Monitoring van de werkzaamheid van anthelminthica voor de behandeling van via de bodem overgedragen wormen P2 (ConWorm)

Hoofddoel:

Na het verkrijgen van geïnformeerde toestemming zullen schoolkinderen in de beoogde leeftijdsgroep worden geworven en gevraagd om een ​​recent ontlastingsmonster te verstrekken (een interval van minder dan 4 uur) dat zal worden verwerkt om het aantal fecale eieren (FEC) te bepalen voor elke door de bodem overgedragen Helminten (STH) aanwezig. Voor de eerste bemonstering is het streven om minimaal 250 geïnfecteerde kinderen in te schrijven voor minimaal één van de door de bodem overgedragen wormen (STH). Deze steekproefomvang werd geselecteerd op basis van statistische analyse van de studiekracht, met behulp van willekeurige simulaties van gecorreleerde, oververspreide Fecal Egg Count-gegevens die de variantie-covariantiestructuur weerspiegelen in een selectie van echte fecale eiertelling (FEC) datasets. Deze analyse suggereerde dat een steekproefomvang van maximaal 200 individuen (α = 0,05, power = 80%) nodig was om een ​​daling van 10 procentpunt te detecteren vanaf een nuleffectiviteit van ~ 80% (gemiddeld percentage FEC ∆ per individu) over een brede scala aan infectiescenario's. Standaard power-analyses voor verhoudingen gaven ook aan dat de detectie van een daling van ~10 procentpunt van een nul-genezingspercentage steekproefomvang tot 200 vereiste (de grootste monsters waren nodig om afwijkingen van nul-werkzaamheid van ongeveer 50%) te detecteren. Gezien een verwacht niet-nalevingspercentage van 25%, werd een steekproef van 250 geïnfecteerde proefpersonen daarom noodzakelijk geacht op elke onderzoekslocatie.

Alle kinderen die ontlastingsmonsters aanleveren, zullen onder toezicht behandeld worden met mebendazole (MBZ) enkele tablet van 500 mg (kauwen + water). De mebendazole (MBZ) wordt (gratis) verstrekt door de coördinatiegroep. Zeven tot veertien dagen (maximaal interval) na de behandeling wordt bij de kinderen een tweede fecesmonster afgenomen om opnieuw FEC te bepalen. Proefpersonen die bij de follow-up geen ontlastingsmonster kunnen geven, of die tegelijkertijd een ernstige medische aandoening hebben of diarree hebben op het moment van de eerste monstername, zullen van het onderzoek worden uitgesloten.

Secundaire doelstellingen:

Op 5 onderzoekslocaties moeten fecale monsters van 100 geïnfecteerde proefpersonen worden bewaard vóór behandeling met mebendazol (MBZ) in één tube (1 gram in 10 ml 70% ethanol). Monsters van dezelfde kinderen dienen na behandeling ook weer in één tube (1 gram in 10 ml 70% ethanol) bewaard te worden. Stalen zijn opgestuurd naar het Laboratorium voor Parasitologie, Universiteit Gent.

De monsters die voor en na de behandeling zijn verzameld, zullen vervolgens door middel van moleculaire assays worden onderzocht op het voorkomen van Necator americanus/Ancylostoma duodenal en het optreden van β-tubulinemutaties gerelateerd aan resistentie.

De monsters die vóór de behandeling zijn verzameld, zullen vervolgens worden onderzocht door middel van moleculaire testen om de rol van dieren als reservoir voor door de mens overgedragen wormen (STH) te beoordelen.

Parasitologische technieken, bepaling van het aantal fecale eieren van door de bodem overgedragen wormen (STH). Alle fecale monsters werden verwerkt met behulp van de McMaster-techniek voor het tellen van eieren voor de detectie en telling van infecties met A. lumbricoides, T. trichiura en haakwormen. Alle onderzoekslocaties zijn bekend met de techniek en eerder werden McMaster-dia's verstrekt.

Moleculaire assays (Laboratorium voor Parasitologie, Universiteit Gent) en extractie van deoxyribonucleïnezuur (DNA).

DNA van Soil-Transmitted Helminths (STH) zal worden geëxtraheerd uit de monsters die zijn bewaard in ethanol 70% met behulp van de Qiagen mini-ontlastingskit.

Moleculaire identificatie van door de bodem overgedragen wormen (STH). De aanwezigheid van de via de bodem overdraagbare wormensoorten: Ascaris (n=2), Trichuris (n=2) en haakwormen (n=4) zal worden beoordeeld met behulp van verschillende moleculaire testen. Voor de differentiatie van Trichuris-soorten zal soortspecifieke polymerasekettingreactie (PCR) worden toegepast. Voor de differentiatie van Ascaris en de hondenhaakwormen zal een PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) gebruikt worden. Voor de menselijke haakwormen zal een kwantitatieve PCR worden toegepast.

Aanwezigheid van mutaties in β-tubuline gerelateerd aan mebendazol (MBZ) resistentie Deze specifieke doelstelling zal worden uitgevoerd in samenwerking met McGill University (Canada).

Statistische analyse. Zowel Cure Rate (CR) als Fecal Egg Count Reduction (FECR) zullen worden overwogen om de werkzaamheid van mebendazol (MBZ) tegen via de bodem overgedragen wormen te controleren. De statistische analyse zal worden beoordeeld zoals beschreven door Vercruysse et al., 2011.