Monitorowanie skuteczności środków przeciwrobaczych w leczeniu robaków przenoszonych przez glebę P2 (ConWorm)

Podstawowy cel:

Po uzyskaniu świadomej zgody uczniowie w docelowej grupie wiekowej zostaną zwerbowani i poproszeni o dostarczenie ostatniej próbki kału (w odstępie krótszym niż 4 godziny), która zostanie przetworzona w celu określenia liczby jaj w kale (FEC) dla każdego przeniesionego z gleby Obecność robaków (STH). Wstępne pobieranie próbek ma na celu zapisanie co najmniej 250 zakażonych dzieci na co najmniej jeden z robaków przenoszonych przez glebę (STH). Ta wielkość próby została wybrana na podstawie analizy statystycznej mocy badania, przy użyciu losowych symulacji skorelowanych, nadmiernie rozproszonych danych dotyczących liczby jaj w kale, odzwierciedlających strukturę wariancji-kowariancji w wybranych zestawach danych dotyczących rzeczywistej liczby jaj w kale (FEC). Analiza ta sugeruje, że do wykrycia 10-punktowego spadku skuteczności zerowej wynoszącej ~ 80% (średni procent FEC ∆ na osobę) wymagana była próba o wielkości do 200 osób (α = 0,05, moc = 80%) w szerokim zakresie różne scenariusze infekcji. Standardowe analizy mocy dla proporcji wykazały również, że wykrycie spadku o ~10 punktów procentowych w stosunku do zerowego wskaźnika utwardzania wymagało wielkości próbek do 200 (największe próbki były wymagane do wykrycia odchyleń od zerowej skuteczności o około 50%). Biorąc pod uwagę przewidywany wskaźnik niezgodności wynoszący 25%, w każdym miejscu badania uznano za konieczne pobranie próbki 250 zakażonych osób.

Wszystkie dzieci dostarczające próbki kału będą leczone mebendazolem (MBZ) w pojedynczej tabeli 500 mg pod nadzorem (żucie + woda). Mebendazol (MBZ) zostanie dostarczony (bezpłatnie) przez grupę koordynującą. Siedem do czternastu dni (maksymalny odstęp) po zabiegu od dzieci zostanie pobrana druga próbka kału w celu ponownego oznaczenia FEC. Osoby, które nie są w stanie oddać próbki kału podczas wizyty kontrolnej lub które doświadczają ciężkiego współistniejącego schorzenia lub mają biegunkę w czasie pierwszego pobrania próbki, zostaną wykluczone z badania.

Cele drugorzędne:

W 5 ośrodkach badawczych próbki kału 100 zakażonych osób należy zakonserwować przed leczeniem mebendazolem (MBZ) w jednej probówce (1 gram w 10 ml 70% etanolu). Próbki tych samych dzieci należy również ponownie zakonserwować w jednej probówce (1 gram w 10 ml 70% etanolu) po leczeniu. Próbki należy przesłać do Laboratorium Parazytologii Uniwersytetu w Gandawie.

Próbki pobrane przed i po leczeniu zostaną następnie zbadane za pomocą testów molekularnych na występowanie Necator americanus/Ancylostoma duodenal oraz na występowanie mutacji β-tubuliny związanych z opornością.

Próbki pobrane przed zabiegiem zostaną następnie zbadane za pomocą testów molekularnych w celu oceny roli zwierząt jako rezerwuaru ludzkich robaków przenoszonych przez glebę (STH).

Techniki parazytologiczne, oznaczanie liczby jaj robaków przenoszonych przez glebę (STH) w kale. Wszystkie próbki kału zostały przetworzone przy użyciu techniki liczenia jaj McMaster w celu wykrycia i zliczenia infekcji A. lumbricoides, T. trichiura i tęgoryjców. Wszystkie ośrodki badawcze znają tę technikę, a slajdy McMastera zostały dostarczone wcześniej.

Testy molekularne (Laboratorium Parazytologii, Uniwersytet w Gandawie) i ekstrakcja kwasu dezoksyrybonukleinowego (DNA).

DNA robaków przenoszonych przez glebę (STH) zostanie wyekstrahowane z próbek zakonserwowanych w 70% etanolu przy użyciu mini zestawu stolca Qiagen.

Molekularna identyfikacja robaków przenoszonych przez glebę (STH). Obecność gatunków robaków przenoszonych przez glebę: Ascaris (n=2), Trichuris (n=2) i tęgoryjec (n=4) zostanie oceniona za pomocą różnych testów molekularnych. Do różnicowania gatunków Trichuris zostanie zastosowana specyficzna dla gatunku reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR). Do rozróżnienia Ascaris i tęgoryjców psich zostanie zastosowany polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych PCR (PCR-RFLP). W przypadku ludzkich tęgoryjców zostanie zastosowany ilościowy PCR.

Obecność mutacji w β-tubulinie związanych z opornością na mebendazol (MBZ) Ten cel szczegółowy będzie realizowany we współpracy z Uniwersytetem McGill (Kanada).

Analiza statystyczna. Zarówno wskaźnik wyleczenia (CR), jak i zmniejszenie liczby jaj w kale (FECR) będą brane pod uwagę w monitorowaniu skuteczności mebendazolu (MBZ) przeciwko robakom przenoszonym przez glebę. Analiza statystyczna zostanie oceniona w sposób opisany przez Vercruysse i in., 2011.