Monitoreo de la eficacia de los antihelmínticos para el tratamiento de los helmintos transmitidos por el suelo P2 (ConWorm)

Objetivo primario:

Luego de obtener el consentimiento informado, se reclutará a los escolares en el grupo de edad objetivo y se les pedirá que proporcionen una muestra de heces reciente (un intervalo de menos de 4 horas) que se procesará para determinar el Recuento de huevos fecales (FEC) para cada Transmitido por el suelo. Helmintos (STH) presentes. Para el muestreo inicial el objetivo es inscribir al menos 250 niños infectados por al menos uno de los Helmintos Transmitidos por el Suelo (STH). Este tamaño de muestra se seleccionó en función del análisis estadístico de la potencia del estudio, utilizando simulaciones aleatorias de datos de recuento de huevos fecales sobredispersos correlacionados que reflejan la estructura de varianza-covarianza en una selección de conjuntos de datos reales de recuento de huevos fecales (FEC). Este análisis sugirió que se requería un tamaño de muestra de hasta 200 individuos (α = 0.05, potencia = 80 %) para detectar una caída de 10 puntos porcentuales desde una eficacia nula de ~ 80 % (porcentaje medio de FEC ∆ por individuo) en un amplio espectro. variedad de escenarios de infección. Los análisis de potencia estándar para proporciones también indicaron que la detección de una caída de ~10 puntos porcentuales desde una tasa de curación nula requería tamaños de muestra de hasta 200 (las muestras más grandes se requieren para detectar desviaciones de eficacias nulas de alrededor del 50%). Dada una tasa de incumplimiento anticipada del 25 %, se consideró necesaria una muestra de 250 sujetos infectados en cada centro de estudio.

Todos los niños que proporcionen muestras de heces serán tratados con una sola tableta de mebendazol (MBZ) de 500 mg bajo supervisión (masticable + agua). El mebendazol (MBZ) será proporcionado (gratis) por el grupo coordinador. De siete a catorce días (intervalo máximo) después del tratamiento se recolectará una segunda muestra fecal de los niños para determinar nuevamente la FEC. Los sujetos que no puedan proporcionar una muestra de heces en el seguimiento, o que estén experimentando una afección médica grave concurrente o tengan diarrea en el momento de la primera muestra, serán excluidos del estudio.

Objetivos secundarios:

En 5 sitios de estudio, las muestras fecales de 100 sujetos infectados deben conservarse antes del tratamiento con mebendazol (MBZ) en un tubo (1 gramo en 10 ml de etanol al 70 %). Las muestras de los mismos niños también deben conservarse nuevamente en un tubo (1 gramo en 10 ml de etanol al 70 %) después del tratamiento. Las muestras deben enviarse al Laboratorio de Parasitología de la Universidad de Ghent.

Las muestras, recogidas antes y después del tratamiento, se examinarán posteriormente mediante ensayos moleculares para detectar la aparición de Necator americanus/Ancylostoma duodenal y la aparición de mutaciones de β-tubulina relacionadas con la resistencia.

Las muestras recogidas antes del tratamiento se examinarán posteriormente mediante ensayos moleculares para evaluar el papel de los animales como reservorio de helmintos humanos transmitidos por el suelo (STH).

Técnicas parasitológicas, determinación del Conteo Fecal de Huevos de Helmintos Transmitidos por el Suelo (STH). Todas las muestras fecales se procesaron utilizando la técnica de conteo de huevos de McMaster para la detección y el recuento de infecciones por A. lumbricoides, T. trichiura y anquilostomas. Todos los sitios de estudio están familiarizados con la técnica y las diapositivas de McMaster se proporcionaron previamente.

Ensayos moleculares (Laboratorio de Parasitología, Universidad de Gante) y extracción de ácido desoxirribonucleico (ADN).

El ADN de los helmintos transmitidos por el suelo (STH) se extraerá de las muestras conservadas en etanol al 70% utilizando el mini kit de heces de Qiagen.

Identificación molecular de Helmintos Transmitidos por el Suelo (STH). La presencia de las especies de helmintos transmitidos por el suelo: Ascaris (n= 2), Trichuris (n= 2) y anquilostomas (n= 4) se evaluará mediante diferentes ensayos moleculares. Para la diferenciación de las especies de Trichuris, se aplicará la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) específica de la especie. Para la diferenciación de Ascaris y los anquilostomas caninos se utilizará un polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción de PCR (PCR-RFLP). Para los anquilostomas humanos, se aplicará una PCR cuantitativa.

Presencia de mutaciones en β-tubulina relacionadas con la resistencia a mebendazol (MBZ) Este objetivo específico se realizará en colaboración con la Universidad McGill (Canadá).

Análisis estadístico. Tanto la tasa de curación (CR) como la reducción del recuento de huevos fecales (FECR) se considerarán para monitorear la eficacia del mebendazol (MBZ) contra los helmintos transmitidos por el suelo. El análisis estadístico se evaluará según lo descrito por Vercruysse et al., 2011.