Sledování účinnosti anthelmintik při léčbě hlístů přenášených půdou P2 (ConWorm)

Primární cíl:

Po získání informovaného souhlasu budou přijati školáci v cílové věkové skupině a požádáni o poskytnutí aktuálního vzorku stolice (interval kratší než 4 hodiny), který bude zpracován za účelem stanovení počtu fekálních vajíček (FEC) pro každou půdu přenesenou. Přítomni helminti (STH). Pro počáteční odběr vzorků je cílem zapsat alespoň 250 infikovaných dětí pro alespoň jednoho z helmintů přenášených půdou (STH). Tato velikost vzorku byla vybrána na základě statistické analýzy výkonu studie s použitím náhodných simulací korelovaných nadměrně rozptýlených dat počtu fekálních vajíček odrážejících strukturu variance-kovariance ve výběru skutečných datových souborů počtu fekálních vajíček (FEC). Tato analýza naznačila, že k detekci poklesu o 10 procentních bodů z nulové účinnosti ~ 80 % (průměrné procento FEC ∆ na jednotlivce) v širokém měřítku bylo zapotřebí vzorku o velikosti až 200 jedinců (α = 0,05, síla = 80 %). řada scénářů infekce. Standardní analýzy výkonu pro proporce také ukázaly, že detekce poklesu o ~10 procentních bodů z nulové rychlosti vytvrzování vyžadovala velikost vzorků až 200 (největší vzorky byly vyžadovány pro detekci odchylek od nulové účinnosti kolem 50 %). Vzhledem k očekávané míře nevyhovění 25 % byl proto vzorek 250 infikovaných subjektů považován za nezbytný v každém místě studie.

Všechny děti poskytující vzorky stolice budou léčeny mebendazolem (MBZ) jednou tabletou 500 mg pod dohledem (žvýkání + voda). Mebendazol (MBZ) poskytne (zdarma) koordinační skupina. Sedm až čtrnáct dní (maximální interval) po léčbě bude dětem odebrán druhý vzorek stolice pro opětovné stanovení FEC. Jedinci, kteří nejsou schopni poskytnout vzorek stolice při sledování, nebo kteří trpí závažným souběžným zdravotním stavem nebo mají průjem v době prvního odběru vzorků, budou ze studie vyloučeni.

Sekundární cíle:

Na 5 místech studie by měly být vzorky stolice od 100 infikovaných subjektů před léčbou mebendazolem (MBZ) uchovány v jedné zkumavce (1 gram v 10 ml 70% ethanolu). Vzorky od stejných dětí by měly být po ošetření také znovu uchovány v jedné zkumavce (1 gram v 10 ml 70% etanolu). Vzorky byly zaslány do Laboratoře parazitologie na univerzitě v Gentu.

Vzorky odebrané před a po léčbě budou následně vyšetřeny molekulárními testy na výskyt Necator americanus/Ancylostoma duodenal a výskyt mutací β-tubulinu souvisejících s rezistencí.

Vzorky odebrané před ošetřením budou následně zkoumány molekulárními testy, aby se vyhodnotila role zvířat jako rezervoáru pro lidské půdou přenášené helminty (STH).

Parazitologické techniky, stanovení počtu fekálních vajíček u půdních helmintů (STH). Všechny vzorky stolice byly zpracovány pomocí techniky počítání vajíček McMaster pro detekci a stanovení počtu infekcí způsobených A. lumbricoides, T. trichiura a měchovci. Všechna místa studie jsou s touto technikou obeznámena a sklíčka McMaster byla poskytnuta dříve.

Molekulární testy (Laboratory of Parasitology, Gent University) a extrakce deoxyribonukleové kyseliny (DNA).

DNA helmintů přenášených půdou (STH) bude extrahována ze vzorků konzervovaných v 70% ethanolu pomocí sady Qiagen mini stolice.

Molekulární identifikace půdou přenášených helmintů (STH). Přítomnost druhů hlístů přenášených půdou: Ascaris (n= 2), Trichuris (n = 2) a měchovci (n = 4) bude hodnocena pomocí různých molekulárních testů. Pro diferenciaci druhů Trichuris bude aplikována druhově specifická polymerázová řetězová reakce (PCR). Pro odlišení Ascaris a měchovce psího bude použit PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). U lidských měchovcovitých bude aplikována kvantitativní PCR.

Přítomnost mutací v β-tubulinu souvisejících s rezistencí na mebendazol (MBZ) Tento specifický cíl bude realizován ve spolupráci s McGill University (Kanada).

Statistická analýza. Za monitorování účinnosti mebendazolu (MBZ) proti hlístům přenášeným půdou se bude uvažovat jak rychlost vyléčení (CR), tak snížení počtu vajíček ve stolici (FECR). Statistická analýza bude vyhodnocena tak, jak je popsáno v Vercruysse et al., 2011.