Surveillance de l'efficacité des anthelminthiques pour le traitement des helminthes transmis par le sol P2 (ConWorm)

Objectif principal:

Suite à l'obtention du consentement éclairé, les écoliers du groupe d'âge cible seront recrutés et invités à fournir un échantillon de selles récent (un intervalle de moins de 4 heures) qui sera traité pour déterminer le nombre d'œufs fécaux (FEC) pour chaque transmission par le sol. Helminthes (STH) présents. Pour l'échantillonnage initial, l'objectif est d'inscrire au moins 250 enfants infectés pour au moins une des helminthes transmises par le sol (STH). Cette taille d'échantillon a été sélectionnée sur la base d'une analyse statistique de la puissance de l'étude, à l'aide de simulations aléatoires de données de comptage d'œufs fécaux surdispersées corrélées reflétant la structure de variance-covariance dans une sélection d'ensembles de données réels de comptage d'œufs fécaux (FEC). Cette analyse a suggéré qu'une taille d'échantillon allant jusqu'à 200 individus (α = 0,05, puissance = 80%) était nécessaire pour détecter une baisse de 10 points de pourcentage à partir d'une efficacité nulle d'environ 80% (pourcentage moyen FEC ∆ par individu) sur une large éventail de scénarios d'infection. Les analyses de puissance standard pour les proportions ont également indiqué que la détection d'une baisse d'environ 10 points de pourcentage par rapport à un taux de guérison nul nécessitait des tailles d'échantillon allant jusqu'à 200 (les plus grands échantillons étant nécessaires pour détecter des écarts par rapport à des efficacités nulles d'environ 50 %). Compte tenu d'un taux de non-conformité anticipé de 25 %, un échantillon de 250 sujets infectés a donc été jugé nécessaire sur chaque site d'étude.

Tous les enfants fournissant des échantillons de selles seront traités avec une table unique de mébendazole (MBZ) de 500 mg sous surveillance (mastication + eau). Le mébendazole (MBZ) sera fourni (gratuitement) par le groupe de coordination. Sept à quatorze jours (intervalle maximum) après le traitement, un deuxième échantillon fécal sera prélevé sur les enfants pour déterminer à nouveau la FEC. Les sujets qui ne sont pas en mesure de fournir un échantillon de selles lors du suivi, ou qui souffrent d'une affection médicale concomitante grave ou qui ont la diarrhée au moment du premier prélèvement, seront exclus de l'étude.

Objectifs secondaires :

Dans 5 sites d'étude, les échantillons de matières fécales de 100 sujets infectés doivent être conservés avant le traitement au mébendazole (MBZ) dans un tube (1 gramme dans 10 ml d'éthanol à 70%). Les échantillons des mêmes enfants doivent également être conservés à nouveau dans un tube (1 gramme dans 10 ml d'éthanol à 70 %) après le traitement. Les échantillons doivent être envoyés au Laboratoire de Parasitologie de l'Université de Gand.

Les échantillons, prélevés avant et après traitement seront ensuite examinés par des dosages moléculaires de la survenue de Necator americanus/Ancylostoma duodenal et de la survenue de mutations de la β-tubuline liées à la résistance.

Les échantillons prélevés avant le traitement seront ensuite examinés par des tests moléculaires pour évaluer le rôle des animaux en tant que réservoir pour les helminthes transmises par le sol (STH) humains.

Techniques parasitologiques, détermination du nombre d'œufs fécaux d'helminthes transmis par le sol (STH). Tous les échantillons fécaux ont été traités à l'aide de la technique de comptage des œufs de McMaster pour la détection et le dénombrement des infections par A. lumbricoides, T. trichiura et les ankylostomes. Tous les sites d'étude sont familiers avec la technique et des diapositives McMaster ont été fournies précédemment.

Essais moléculaires (Laboratoire de Parasitologie, Université de Gand) et extraction d'acide désoxyribonucléique (ADN).

L'ADN des helminthes transmis par le sol (STH) sera extrait des échantillons conservés dans de l'éthanol à 70% à l'aide du kit de mini selles Qiagen.

Identification moléculaire des helminthes transmis par le sol (STH). La présence des espèces d'helminthes transmis par le sol : Ascaris (n = 2), Trichuris (n = 2) et ankylostomes (n = 4) sera évaluée à l'aide de différents tests moléculaires. Pour la différenciation des espèces de Trichuris, la réaction en chaîne par polymérase (PCR) spécifique à l'espèce sera appliquée. Pour la différenciation des Ascaris et des ankylostomes canins, un PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) sera utilisé. Pour les ankylostomes humains, une PCR quantitative sera appliquée.

Présence de mutations dans la β-tubuline liées à la résistance au mébendazole (MBZ) Cet objectif spécifique sera réalisé en collaboration avec l'Université McGill (Canada).

Analyses statistiques. Le taux de guérison (CR) et la réduction du nombre d'œufs fécaux (FECR) seront pris en compte pour surveiller l'efficacité du mébendazole (MBZ) contre les helminthes transmis par le sol. L'analyse statistique sera évaluée comme décrit par Vercruysse et al., 2011.