Sitrushedelmien limonoidien aineenvaihdunta ja terveysvaikutukset hyperkolesteroleemisilla ihmisillä

Tämä on 127 päivän tutkimus, jossa on cross-over-suunnitelma, ja se on jaettu kolmeen aineenvaihduntajaksoon (P1, P2 ja P3). Ensimmäiset 14 päivää (P1) kaikki tutkittavat saavat kaksi lumelääkejuomaa ja heitä pyydetään nauttimaan yksi aamiaisen ja illallisen yhteydessä. Sitten aineenvaihduntajaksolla 2 (P2) koehenkilöt jaetaan satunnaisesti toiseen kahdesta ryhmästä (ryhmä 1 ja ryhmä 2). Seuraavan 56 päivän ajan ryhmä 1 jatkaa kahden lumelääkejuoman nauttimista päivässä, kun taas ryhmä 2 nauttii kahta limonoideja sisältävää juomaa (250 mg/juoma). Viimeisten 56 päivän aikana (P3) ryhmän 1 juomat sisältävät limonoideja ja ryhmän 2 juomat ovat lumelääkettä. Sekä lume- että limonoidijuomat ovat 12 unssin puskuroituja, steriilejä, appelsiinin makuisia, keinotekoisesti makeutettuja juomia, jotka sisältävät 60 mg C-vitamiinia, 11 mg riboflaviinia ja nollakaloreita. Tutkittavia neuvotaan, että heidän on juotava kaikki tarjottu juoma joka päivä. Juomat sisältävät biomarkkerin (riboflaviini), ja biomarkkeri analysoidaan virtsanäytteistä, jotka kerätään joka 2. viikko juomien noutotapaamisissa noudattamisen valvomiseksi. Koehenkilöille ilmoitetaan, että heidän noudattamistaan ​​seurataan. Limoniiniglukosidi saadaan sitrushedelmien jätemateriaaleista käyttämällä kromatografisia menetelmiä, joissa käytetään elintarvikelaatuisia hyväksyttyjä väliaineita ja liuottimia. Lopullinen puhdas limoniiniglukosidi kiteytetään jakeittain kromatografisesti puhdistetun uutteen väkevöidystä vesiliuoksesta. Kiteinen materiaali erotetaan emäliuoksesta, kuivataan ja sille suoritetaan massaspektri- ja ydinmagneettinen resonanssiarviointi. Spektritietoja verrataan puhtaalle limoniiniglukosidistandardille saatuihin tietoihin lopullisen puhtauden, joka on parempi kuin 95 %, määrittämiseksi.

Verinäytteet (noin 70 ml, alle viisi ruokalusikallista) otetaan 12 tunnin yön yli paaston jälkeen tutkimuspäivinä 1, 15, 71 ja 127 laskimopunktiolla. Näitä verinäytteitä käytetään seerumin limonoidien, täydellisen verisolumäärän (CBC) ja kattavan kemian paneelin (CCP), seerumin lipidien, tulehdusmerkkiaineiden, lymfosyyttien ja monosyyttien toimintojen määrittämiseen. Päivinä 15 (ryhmä 2) ja päivänä 71 (ryhmä 1) otettujen paastoverinäytteiden lisäksi otetaan toistuvia verinäytteitä (5 ml joka kerta, noin yksi teelusikallinen) kello 2, 4, 6, 8 ja 24 tuntia. kahden 12 unssin limonoidijuoman (yhteensä 500 mg limonoideja) nauttimisen jälkeen limonoidien imeytymisen ja aineenvaihdunnan määrittämiseksi. Tutkijat huomauttavat, että verinäytteet otetaan 24 tuntia limonoidin nauttimisen jälkeen tutkimuspäivänä 16 ryhmälle 2 ja päivänä 72 ryhmälle 1. Otetun veren kokonaismäärä on alle 500 ml (2 kuppia) 127 päivässä. Pistevirtsanäyte otetaan samalla käynnillä paastoverenoton yhteydessä ja kahden viikon välein juomien noutoajan yhteydessä. Toistuviin verikokeisiin 0, 2, 4, 6 ja 8 tunnin kuluttua limonoidilisän jälkeen otetaan virtsanäytteitä. Ruokailua ei sallita 8 tunnin aikana; vedenottoa valvotaan ja rajoitetaan yhteen litraan. Koehenkilöille tarjotaan tänä aikana kaksi standardoitua ateriaa, joista kukin edustaa 35 % heidän päivittäisestä kalorinsaannistaan, toinen 0 tunnin verenoton jälkeen ja toinen 8 tunnin verenoton jälkeen.

Koehenkilöitä neuvotaan olemaan muuttamatta ruokavaliotaan, liikuntaa tai elämäntapaansa tutkimuksen aikana. Heitä myös neuvotaan olemaan kuluttamatta sitrushedelmiä/mehua (appelsiini, rypälehedelmä) koko tutkimuksen ajan. Jokaisen aineenvaihduntajakson (P1, P2, P3) viimeisen viikon aikana kerätään puhelimitse kolme 24 tunnin ruokavalion palautusta. Standardoitu ruokavalio tarjoillaan kaikille kolmelle aterialle joka päivä ennen verenottoa.