Metabolisme og helseeffekter av sitruslimonoider hos hyperkolesterolemiske mennesker

Dette er en 127-dagers studie med et cross-over design, delt inn i tre metabolske perioder (P1, P2 og P3). De første 14 dagene (P1) vil alle forsøkspersoner motta to placebo-drikker og vil bli bedt om å innta én hver med frokost og middag. Så i metabolsk periode 2 (P2), vil forsøkspersonene bli tilfeldig tildelt en av to grupper (gruppe 1 og gruppe 2). De neste 56 dagene vil gruppe 1 fortsette å innta to placebo-drikker per dag, mens gruppe 2 vil innta to drikker som inneholder limonoider (250 mg/drikke). I løpet av de siste 56 dagene (P3), vil drikkene som gis til gruppe 1 inneholde limonoider, og drikker gitt til gruppe 2 vil være placebo. Både placebo- og limonoiddrikkene vil være 12-oz bufret, steril, kunstig søtet drikke med appelsinsmak, som inneholder 60 mg vitamin C, 11 mg riboflavin og null kalorier. Forsøkspersonene instrueres om at de må drikke all drikke hver dag. Drikkevarer vil inneholde en biomarkør (riboflavin), og biomarkøren analyseres i urinprøver som samles inn annenhver uke ved henting av drikke for å overvåke overholdelse. Forsøkspersonene vil bli informert om at de blir overvåket for etterlevelse. Limonin-glukosid er hentet fra sitrusavfallsmaterialer ved bruk av kromatografiske metoder som bruker matkvalitetsgodkjente medier og løsemidler. Det endelige rene limonin-glukosid blir fraksjonert krystallisert fra en konsentrert vannløsning av et kromatografisk renset ekstrakt. Det krystallinske materialet separeres fra moderluten, tørkes og utsettes for massespektral og kjernemagnetisk resonansvurdering. Spektraldataene sammenlignes med data innhentet for en ren limonin-glukosidstandard for å etablere en endelig renhet som er bedre enn 95 %.

Blodprøver (ca. 70 ml, mindre enn fem spiseskjeer) vil bli tatt etter 12 timers faste over natten på studiedag 1, 15, 71 og 127 ved venepunktur. Disse blodprøvene vil bli brukt til å bestemme serumlimonoider, fullstendig blodcelletall (CBC), og omfattende kjemipanel (CCP), serumlipider, markører for betennelse, lymfocytt- og monocytterfunksjoner. I tillegg til fastende blodprøver på dag 15 (gruppe 2) og dag 71 (gruppe 1), vil det tas gjentatte blodprøver (5 ml hver gang, omtrent en teskje) etter 2, 4, 6, 8 og 24 timer etter å ha tatt to 12-oz limonoiddrikker (totalt limonoider 500mg) for å bestemme absorpsjon og metabolisme av limonoider. Etterforskerne bemerker at blodprøvene tatt 24 timer etter limonoidinntaket vil være på studiedag 16 for gruppe 2 og dag 72 for gruppe 1. Den totale mengden blod som tas ut vil være mindre enn 500 ml (2 kopper) på 127 dager. En punkturinprøve vil bli tatt ved samme besøk som det fastende blodet tas, og annenhver uke ved henting av drikke. Gjentatte blodprøver 0, 2, 4, 6 og 8 timer etter limonoidtilskuddet vil bli ledsaget av innsamling av urinprøver. Ingen mat vil bli tillatt i løpet av 8 timer; vanninntaket vil bli overvåket og begrenset til én liter. Forsøkspersonene vil få servert to standardiserte måltider i løpet av denne tiden, som hver representerer 35 % av deres daglige kaloriinntak, ett etter 0 timers blodprøvetaking og det andre etter 8 timers blodprøvetaking.

Forsøkspersonene vil bli bedt om å ikke endre dietter, trening eller livsstil i løpet av studiet. De vil også bli bedt om å ikke konsumere noen sitrusfrukter/juice (appelsin, druefrukt) gjennom hele studien. Tre 24-timers dietttilbakekallinger vil bli samlet inn per telefon i løpet av den siste uken av hver metabolske periode (P1, P2, P3). En standardisert diett vil bli servert for alle tre måltidene for hver dag før blodprøvetakingene.