Metabolismo ed effetti sulla salute dei limonoidi di agrumi negli esseri umani ipercolesterolemici

Questo è uno studio di 127 giorni con un disegno incrociato, diviso in tre periodi metabolici (P1, P2 e P3). Per i primi 14 giorni (P1), tutti i soggetti riceveranno due bevande placebo e verrà chiesto di consumarne una a colazione ea cena. Quindi nel periodo metabolico 2 (P2), i soggetti verranno assegnati in modo casuale a uno dei due gruppi (Gruppo 1 e Gruppo 2). Per i prossimi 56 giorni, il Gruppo 1 continuerà a consumare due bevande placebo al giorno, mentre il Gruppo 2 consumerà due bevande contenenti limonoidi (250 mg/bevanda). Durante gli ultimi 56 giorni (P3), le bevande fornite al Gruppo 1 conterranno limonoidi e le bevande fornite al Gruppo 2 saranno placebo. Sia il placebo che le bevande limonoidi saranno bevande tamponate da 12 once, sterili, aromatizzate all'arancia, dolcificate artificialmente, contenenti 60 mg di vitamina C, 11 mg di riboflavina e zero calorie. I soggetti sono istruiti che devono bere tutte le bevande fornite ogni giorno. Le bevande conterranno un biomarcatore (riboflavina) e il biomarcatore viene analizzato nei campioni di urina raccolti ogni 2 settimane agli appuntamenti per il ritiro delle bevande per monitorare la conformità. I soggetti saranno informati che sono monitorati per la conformità. Il glucoside di limonina è ottenuto da materiali di scarto di agrumi utilizzando metodi cromatografici che impiegano mezzi e solventi approvati per uso alimentare. Il glucoside di limonina puro finale viene cristallizzato in modo frazionato da una soluzione acquosa concentrata di un estratto purificato cromatograficamente. Il materiale cristallino viene separato dalle acque madri, essiccato e sottoposto a valutazione spettrale di massa e risonanza magnetica nucleare. I dati spettrali vengono confrontati con i dati acquisiti per uno standard di glucoside di limonina puro per stabilire la purezza finale che è migliore del 95%.

I campioni di sangue (circa 70 ml, meno di cinque cucchiai) verranno prelevati dopo un digiuno notturno di 12 ore nei giorni 1, 15, 71 e 127 dello studio mediante prelievo venoso. Questi campioni di sangue verranno utilizzati per determinare i limonoidi sierici, il conteggio completo delle cellule del sangue (CBC) e il pannello chimico completo (CCP), i lipidi sierici, i marcatori di infiammazione, le funzioni dei linfociti e dei monociti. Oltre ai prelievi di sangue a digiuno nei giorni 15 (Gruppo 2) e 71 (Gruppo 1), verranno prelevati campioni di sangue ripetuti (5 ml ogni volta, circa un cucchiaino) a 2, 4, 6, 8 e 24 ore dopo aver assunto due bevande limonoidi da 12 once (limonoidi totali 500 mg) per determinare l'assorbimento e il metabolismo dei limonoidi. I ricercatori notano che i campioni di sangue prelevati 24 ore dopo l'assunzione di limonoidi saranno il giorno 16 dello studio per il Gruppo 2 e il giorno 72 per il Gruppo 1. La quantità totale di sangue prelevato sarà inferiore a 500 ml (2 tazze) in 127 giorni. Un campione di urina puntuale verrà raccolto alla stessa visita dei prelievi di sangue a digiuno e ogni due settimane agli appuntamenti per il ritiro delle bevande. Ripetuti prelievi di sangue a 0, 2, 4, 6 e 8 ore dopo il supplemento di limonoidi saranno accompagnati dalla raccolta di campioni di urina. Nessun cibo sarà consentito durante le 8 ore; l'assunzione di acqua sarà monitorata e limitata a un litro. Ai soggetti verranno serviti due pasti standard durante questo periodo, ognuno dei quali rappresenta il 35% del loro apporto calorico giornaliero, uno dopo il prelievo di sangue di 0 ore e l'altro dopo il prelievo di sangue di 8 ore.

I soggetti saranno istruiti a non modificare la loro dieta, esercizio fisico o stile di vita durante il corso dello studio. Saranno inoltre istruiti a non consumare agrumi / succhi (arancia, pompelmo) durante lo studio. Tre richiami dietetici di 24 ore saranno raccolti telefonicamente durante l'ultima settimana di ciascun periodo metabolico (P1, P2, P3). Verrà servita una dieta standardizzata per tutti e tre i pasti per ogni giorno prima dei prelievi di sangue.