Metabolismus a zdravotní účinky citrusových limonoidů u hypercholesterolemických lidí

Jedná se o 127denní studii s cross-over designem, rozdělenou do tří metabolických období (P1, P2 a P3). Prvních 14 dní (P1) budou všichni jedinci dostávat dva placebo nápoje a budou požádáni, aby konzumovali jeden každý se snídaní a večeří. Poté v metabolické periodě 2 (P2) budou subjekty náhodně rozděleny do jedné ze dvou skupin (Skupina 1 a Skupina 2). Následujících 56 dní bude skupina 1 nadále konzumovat dva placebo nápoje denně, zatímco skupina 2 bude konzumovat dva nápoje obsahující limonoidy (250 mg/nápoj). Během posledních 56 dnů (P3) budou nápoje poskytované skupině 1 obsahovat limonoidy a nápoje poskytované skupině 2 budou placebo. Placebo i limonoidní nápoje budou 12 oz pufrovaný, sterilní, uměle slazený nápoj s pomerančovou příchutí, obsahující 60 mg vitamínu C, 11 mg riboflavinu a nula kalorií. Subjekty jsou poučeny, že musí každý den vypít veškerý poskytnutý nápoj. Nápoje budou obsahovat biomarker (riboflavin) a biomarker je testován ve vzorcích moči odebraných každé 2 týdny při schůzkách k vyzvednutí nápojů, aby bylo možné sledovat dodržování předpisů. Subjekty budou informovány, že jsou sledovány z hlediska dodržování. Glukosid limoninu se získává z citrusových odpadních materiálů pomocí chromatografických metod, které využívají schválená média a rozpouštědla pro potraviny. Finální čistý limonin glukosid se frakčně krystalizuje z koncentrovaného vodného roztoku chromatograficky přečištěného extraktu. Krystalický materiál se oddělí od matečného louhu, suší se a podrobí se hmotnostnímu spektru a hodnocení nukleární magnetické rezonance. Spektrální data jsou porovnána s daty získanými pro čistý limonin glukosidový standard pro stanovení konečné čistoty, která je lepší než 95 %.

Vzorky krve (přibližně 70 ml, méně než pět polévkových lžic) se odeberou po 12 hodinách nočního hladovění ve dnech studie 1, 15, 71 a 127 venepunkcí. Tyto krevní vzorky budou použity ke stanovení sérových limonoidů, kompletního počtu krvinek (CBC) a komplexního chemického panelu (CCP), sérových lipidů, markerů zánětu, funkcí lymfocytů a monocytů. Kromě odběrů krve nalačno 15. den (skupina 2) a 71. den (skupina 1) budou ve 2., 4., 6., 8. a 24. hodině odebrány opakované vzorky krve (pokaždé 5 ml, přibližně jedna čajová lžička). po požití dvou 12-oz limonoidních nápojů (celkem 500 mg limonoidů) ke stanovení vstřebávání a metabolismu limonoidů. Výzkumníci poznamenávají, že vzorky krve odebrané 24 hodin po příjmu limonoidů budou 16. den studie pro skupinu 2 a den 72 pro skupinu 1. Celkové množství odebrané krve bude menší než 500 ml (2 šálky) za 127 dní. Vzorek moči bude odebrán při stejné návštěvě jako odběr krve nalačno a každé dva týdny při schůzce k vyzvednutí nápojů. Opakované odběry krve 0, 2, 4, 6 a 8 hodin po doplnění limonoidů budou doprovázeny odběrem vzorků moči. Během 8 hodin nebude povoleno žádné jídlo; příjem vody bude monitorován a omezen na jeden litr. Subjektům budou během této doby podávána dvě standardizovaná jídla, z nichž každé představuje 35 % jejich denního kalorického příjmu, jedno po 0 hodinovém odběru krve a druhé po 8hodinovém odběru krve.

Subjekty budou instruovány, aby neměnily své diety, cvičení nebo životní styl v průběhu studie. Budou také instruováni, aby během studie nekonzumovali žádné citrusové ovoce/džus (pomeranč, hroznové ovoce). Během posledního týdne každého metabolického období (P1, P2, P3) budou telefonicky shromážděna tři 24hodinová stažení stravy. Každý den před odběry krve bude podávána standardizovaná strava pro všechna tři jídla.