A citrus limonoidok anyagcseréje és egészségügyi hatásai hiperkoleszterinémiás emberekben

Ez egy 127 napos vizsgálat keresztezett elrendezéssel, három metabolikus periódusra osztva (P1, P2 és P3). Az első 14 napban (P1) minden alany két placeboitalban részesül, és reggeli és vacsora közben egyet-egyet fog kapni. Ezután a 2. metabolikus periódusban (P2) az alanyokat véletlenszerűen két csoport (1. csoport és 2. csoport) egyikébe osztják be. A következő 56 napban az 1. csoport továbbra is napi két placeboitalt, míg a 2. csoport két limonoidot tartalmazó italt (250 mg/ital) fog fogyasztani. Az utolsó 56 nap során (P3) az 1. csoportnak biztosított italok limonoidokat, a 2. csoportnak biztosított italok pedig placebót tartalmaznak. Mind a placebo, mind a limonoid ital 12 uncia pufferolt, steril, narancs ízű, mesterségesen édesített ital lesz, amely 60 mg C-vitamint, 11 mg riboflavint és nulla kalóriát tartalmaz. Az alanyokat arra utasítják, hogy minden nap meg kell inniuk az összes biztosított italt. Az italok biomarkert (riboflavint) tartalmaznak, és a biomarkert az italfelvételi időpontokon 2 hetente gyűjtött vizeletmintákban vizsgálják a megfelelőség ellenőrzése érdekében. Az alanyok tájékoztatást kapnak arról, hogy ellenőrzés alatt állnak a megfelelőség szempontjából. A limonin-glükozidot citrusfélék hulladékanyagaiból nyerik kromatográfiás módszerekkel, amelyek élelmiszer-minőségű, jóváhagyott közegeket és oldószereket alkalmaznak. A végső tiszta limonin-glükozidot egy kromatográfiásan tisztított extraktum tömény vizes oldatából frakcionáltan kristályosítják. A kristályos anyagot elválasztják az anyalúgtól, megszárítják és tömegspektrális és mágneses magrezonancia vizsgálatnak vetik alá. A spektrális adatokat a tiszta limonin-glükozid standardra kapott adatokkal hasonlítják össze, hogy megállapítsák a 95%-nál jobb végső tisztaságot.

Vérmintákat (körülbelül 70 ml, kevesebb, mint öt evőkanál) veszünk 12 órás éjszakai koplalás után az 1., 15., 71. és 127. vizsgálati napon vénapunkcióval. Ezeket a vérmintákat a szérum limonoidok, a teljes vérsejtszám (CBC) és az átfogó kémiai panel (CCP), a szérum lipidek, a gyulladás markerei, a limfociták és a monociták funkcióinak meghatározására fogják használni. A 15. napon (2. csoport) és 71. napon (1. csoport) az éhgyomri vérvételen túlmenően ismételt vérmintákat vesznek (minden alkalommal 5 ml, körülbelül egy teáskanál) a 2., 4., 6., 8. és 24. órában. két 12 uncia limonoid ital (összesen 500 mg limonoid) elfogyasztása után a limonoidok felszívódásának és metabolizmusának meghatározására. A kutatók megjegyzik, hogy a limonoid bevétele után 24 órával vett vérmintákat a 2. csoportban a 16., az 1. csoportban pedig a 72. napon veszik. A levett vér teljes mennyisége kevesebb, mint 500 ml (2 csésze) 127 nap alatt. Az éhgyomri vérvétellel azonos vizit alkalmával és kéthetente az italátvételi időpontokban spontán vizeletmintát vesznek. A limonoid kiegészítés után 0, 2, 4, 6 és 8 órával ismételt vérvételt vizeletminta vétele kísér. A 8 óra alatt enni tilos; a vízbevitelt ellenőrizni fogják, és egy literre korlátozzák. Az alanyoknak ez idő alatt két standard étkezést szolgálnak fel, amelyek mindegyike a napi kalóriabevitel 35%-át jelenti, az egyiket a 0 órás vérvétel után, a másikat a 8 órás vérvétel után.

Az alanyokat utasítják, hogy a vizsgálat során ne változtassanak étrendjükön, testmozgásukon vagy életmódjukon. Arra is figyelmeztetik őket, hogy ne fogyasszon citrusféléket/levet (narancs, szőlő) a vizsgálat során. Minden metabolikus periódus utolsó hetében (P1, P2, P3) telefonon három 24 órás étrendi visszahívást gyűjtenek össze. A vérvétel előtt minden nap mindhárom étkezéshez szabványos étrendet szolgálnak fel.