Metabolismo y efectos sobre la salud de los limonoides cítricos en humanos hipercolesterolémicos

Este es un estudio de 127 días con un diseño cruzado, dividido en tres períodos metabólicos (P1, P2 y P3). Durante los primeros 14 días (P1), todos los sujetos recibirán dos bebidas de placebo y se les pedirá que consuman una con el desayuno y la cena. Luego, en el período metabólico 2 (P2), los sujetos se asignarán aleatoriamente a uno de dos grupos (Grupo 1 y Grupo 2). Durante los próximos 56 días, el Grupo 1 continuará consumiendo dos bebidas de placebo al día, mientras que el Grupo 2 consumirá dos bebidas que contengan limonoides (250 mg/bebida). Durante los últimos 56 días (P3), las bebidas proporcionadas al Grupo 1 contendrán limonoides y las bebidas proporcionadas al Grupo 2 serán placebo. Tanto la bebida de placebo como la de limonoides serán bebidas endulzadas artificialmente, estériles, con sabor a naranja y tamponadas de 12 onzas, que contienen 60 mg de vitamina C, 11 mg de riboflavina y cero calorías. Se instruye a los sujetos que deben beber toda la bebida proporcionada cada día. Las bebidas contendrán un biomarcador (riboflavina), y el biomarcador se analiza en muestras de orina recolectadas cada 2 semanas en las citas de recolección de bebidas para monitorear el cumplimiento. Se informará a los sujetos que están siendo monitoreados para el cumplimiento. El glucósido de limonina se obtiene de materiales de desecho de cítricos utilizando métodos cromatográficos que emplean medios y solventes aprobados para alimentos. El glucósido de limonina puro final se cristaliza fraccionadamente a partir de una solución acuosa concentrada de un extracto purificado por cromatografía. El material cristalino se separa de las aguas madres, se seca y se somete a evaluación de espectro de masas y resonancia magnética nuclear. Los datos espectrales se comparan con los datos adquiridos para un estándar de glucósido de limonina pura para establecer una pureza final que es superior al 95 %.

Se extraerán muestras de sangre (aproximadamente 70 ml, menos de cinco cucharadas) después de un ayuno nocturno de 12 horas en los días de estudio 1, 15, 71 y 127 mediante venopunción. Estas muestras de sangre se utilizarán para determinar los limonoides séricos, el conteo completo de células sanguíneas (CBC) y el panel de química integral (CCP), los lípidos séricos, los marcadores de inflamación, las funciones de linfocitos y monocitos. Además de las extracciones de sangre en ayunas los días 15 (Grupo 2) y el día 71 (Grupo 1), se extraerán muestras de sangre repetidas (5 ml cada vez, aproximadamente una cucharadita) a las 2, 4, 6, 8 y 24 horas. después de tomar dos bebidas limonoides de 12 onzas (limonoides totales 500 mg) para determinar la absorción y el metabolismo de los limonoides. Los investigadores señalan que las muestras de sangre extraídas 24 horas después de la ingesta de limonoides serán el día 16 del estudio para el Grupo 2 y el día 72 para el Grupo 1. La cantidad total de sangre extraída será inferior a 500 ml (2 tazas) en 127 días. Se recolectará una muestra de orina en la misma visita que las extracciones de sangre en ayunas, y cada dos semanas en las citas de recolección de bebidas. Las extracciones de sangre repetidas a las 0, 2, 4, 6 y 8 horas después del suplemento de limonoides se acompañarán de la recolección de muestras de orina. No se permitirá comida durante las 8 hrs; La ingesta de agua será monitoreada y restringida a un litro. A los sujetos se les servirán dos comidas estandarizadas durante este tiempo, cada una de las cuales representará el 35 % de su ingesta calórica diaria, una después de la extracción de sangre a las 0 horas y la otra después de la extracción de sangre a las 8 horas.

Se indicará a los sujetos que no cambien su dieta, ejercicio o estilo de vida durante el transcurso del estudio. También se les indicará que no consuman ningún jugo/fruta cítrica (naranja, toronja) durante todo el estudio. Se recogerán telefónicamente tres recordatorios dietéticos de 24 horas durante la última semana de cada periodo metabólico (P1, P2, P3). Se servirá una dieta estandarizada para las tres comidas de cada día antes de las extracciones de sangre.