Metabolizm i skutki zdrowotne limonoidów cytrusowych u ludzi z hipercholesterolemią

Jest to 127-dniowe badanie z projektem krzyżowym, podzielone na trzy okresy metaboliczne (P1, P2 i P3). Przez pierwsze 14 dni (P1) wszyscy badani będą otrzymywać dwa napoje placebo i będą proszeni o spożywanie po jednym na śniadanie i kolację. Następnie w okresie metabolicznym 2 (P2) osoby zostaną losowo przydzielone do jednej z dwóch grup (Grupa 1 i Grupa 2). Przez następne 56 dni grupa 1 będzie nadal spożywać dwa napoje placebo dziennie, podczas gdy grupa 2 będzie spożywać dwa napoje zawierające limonoidy (250 mg/napój). W ciągu ostatnich 56 dni (P3) napoje dostarczane Grupie 1 będą zawierały limonoidy, a napoje dostarczane Grupie 2 będą placebo. Zarówno napoje placebo, jak i limonoidy będą 12-uncjowymi buforowanymi, sterylnymi, sztucznie słodzonymi napojami o smaku pomarańczowym, zawierającymi 60 mg witaminy C, 11 mg ryboflawiny i zero kalorii. Badanych poinstruowano, że muszą wypić cały dostarczony napój każdego dnia. Napoje będą zawierać biomarker (ryboflawina), a biomarker jest oznaczany w próbkach moczu pobieranych co 2 tygodnie podczas spotkań z odbiorem napojów w celu monitorowania zgodności. Osoby badane zostaną poinformowane, że są monitorowane pod kątem zgodności. Glukozyd limoniny jest uzyskiwany z odpadów cytrusowych przy użyciu metod chromatograficznych, które wykorzystują media i rozpuszczalniki zatwierdzone do kontaktu z żywnością. Ostateczny czysty glukozyd limoniny krystalizuje się frakcjonująco ze stężonego wodnego roztworu chromatograficznie oczyszczonego ekstraktu. Materiał krystaliczny oddziela się od ługu macierzystego, suszy i poddaje ocenie za pomocą widma masowego i jądrowego rezonansu magnetycznego. Dane spektralne porównuje się z danymi uzyskanymi dla czystego wzorca glukozydu limoniny w celu ustalenia końcowej czystości, która jest lepsza niż 95%.

Próbki krwi (około 70 ml, mniej niż pięć łyżek stołowych) zostaną pobrane po 12-godzinnym nocnym poście w dniach badania 1, 15, 71 i 127 przez nakłucie żyły. Te próbki krwi zostaną wykorzystane do określenia limonoidów w surowicy, pełnej morfologii krwi (CBC) i kompleksowego panelu chemicznego (CCP), lipidów w surowicy, markerów stanu zapalnego, funkcji limfocytów i monocytów. Oprócz pobierania krwi na czczo w dniach 15 (Grupa 2) i dniu 71 (Grupa 1), powtórzone próbki krwi (każdorazowo po 5 ml, około jednej łyżeczki) zostaną pobrane w 2, 4, 6, 8 i 24 godz. po zażyciu dwóch napojów z limonoidami o pojemności 12 uncji (łącznie 500 mg limonoidów) w celu określenia wchłaniania i metabolizmu limonoidów. Badacze zauważają, że próbki krwi pobrane 24 godziny po przyjęciu limonoidu będą pochodzić z dnia 16 badania dla grupy 2 i dnia 72 dla grupy 1. Całkowita ilość pobranej krwi będzie mniejsza niż 500 ml (2 filiżanki) w ciągu 127 dni. Punktowa próbka moczu zostanie pobrana podczas tej samej wizyty, podczas której pobierana jest krew na czczo, oraz co dwa tygodnie podczas spotkań z odbiorem napojów. Powtarzanym pobraniom krwi po 0, 2, 4, 6 i 8 godzinach po podaniu limonoidu będzie towarzyszyć pobieranie próbek moczu. Żadne jedzenie nie będzie dozwolone w ciągu 8 godzin; pobór wody będzie monitorowany i ograniczony do jednego litra. Osobnikom będą podawane dwa standardowe posiłki w tym czasie, każdy reprezentujący 35% ich dziennego spożycia kalorii, jeden po 0-godzinnym pobraniu krwi, a drugi po 8-godzinnym pobraniu krwi.

Pacjenci zostaną poinstruowani, aby nie zmieniać swojej diety, ćwiczeń lub stylu życia w trakcie badania. Zostaną również poinstruowani, aby nie spożywać żadnych owoców cytrusowych/soku (pomarańczowego, winogronowego) podczas całego badania. W ostatnim tygodniu każdego okresu metabolicznego (P1, P2, P3) zostaną zebrane telefonicznie trzy 24-godzinne przypominania o diecie. Standardowa dieta będzie podawana dla wszystkich trzech posiłków każdego dnia przed pobraniem krwi.