Metabolismo e efeitos na saúde dos limonóides cítricos em humanos hipercolesterolêmicos

Este é um estudo de 127 dias com desenho cruzado, dividido em três períodos metabólicos (P1, P2 e P3). Durante os primeiros 14 dias (P1), todos os indivíduos receberão duas bebidas placebo e serão solicitados a consumir uma no café da manhã e outra no jantar. Então, no período metabólico 2 (P2), os indivíduos serão aleatoriamente designados para um dos dois grupos (Grupo 1 e Grupo 2). Nos próximos 56 dias, o Grupo 1 continuará a consumir duas bebidas placebo por dia, enquanto o Grupo 2 consumirá duas bebidas contendo limonóides (250 mg/bebida). Durante os 56 dias finais (P3), as bebidas fornecidas ao Grupo 1 conterão limonóides e as bebidas fornecidas ao Grupo 2 serão placebo. Tanto o placebo quanto as bebidas limonóides serão bebidas tamponadas, estéreis, com sabor de laranja e adoçadas artificialmente, contendo 60 mg de vitamina C, 11 mg de riboflavina e zero calorias. Os indivíduos são instruídos a beber toda a bebida fornecida a cada dia. As bebidas conterão um biomarcador (riboflavina), e o biomarcador é analisado em amostras de urina coletadas a cada 2 semanas nas consultas de coleta de bebidas para monitorar a adesão. Os sujeitos serão informados de que estão sendo monitorados quanto à conformidade. Limonin glucoside é obtido de materiais de resíduos cítricos utilizando métodos cromatográficos que empregam meios e solventes aprovados para alimentos. O glicosídeo de limonina puro final é cristalizado fracionadamente a partir de uma solução aquosa concentrada de um extrato purificado por cromatografia. O material cristalino é separado do licor-mãe, seco e submetido a avaliação de espectro de massa e ressonância magnética nuclear. Os dados espectrais são comparados aos dados adquiridos para um padrão puro de glicosídeo de limonina para estabelecer a pureza final que é melhor que 95%.

Amostras de sangue (aproximadamente 70 ml, menos de cinco colheres de sopa) serão coletadas após um jejum noturno de 12 horas nos dias 1, 15, 71 e 127 do estudo por punção venosa. Essas amostras de sangue serão usadas para determinar limonóides séricos, hemograma completo (CBC) e painel químico abrangente (CCP), lipídios séricos, marcadores de inflamação, funções de linfócitos e monócitos. Além das coletas de sangue em jejum nos dias 15 (Grupo 2) e 71 (Grupo 1), amostras de sangue repetidas (5 ml de cada vez, aproximadamente uma colher de chá) serão coletadas em 2, 4, 6, 8 e 24 horas depois de tomar duas bebidas limonóides de 12 onças (total de limonóides 500 mg) para determinar a absorção e o metabolismo dos limonóides. Os investigadores observam que as amostras de sangue coletadas 24 horas após a ingestão do limonóide serão no dia 16 do estudo para o Grupo 2 e no dia 72 para o Grupo 1. A quantidade total de sangue coletado será inferior a 500 ml (2 xícaras) em 127 dias. Uma amostra de urina será coletada na mesma visita que as coletas de sangue em jejum e a cada duas semanas nas consultas de coleta de bebidas. Coletas de sangue repetidas em 0, 2, 4, 6 e 8 horas após o suplemento de limonóide serão acompanhadas pela coleta de amostras de urina. Nenhum alimento será permitido durante as 8 horas; a ingestão de água será monitorada e limitada a um litro. Os indivíduos receberão duas refeições padronizadas durante esse período, cada uma representando 35% de sua ingestão calórica diária, uma após a coleta de sangue de 0 h e a outra após a coleta de sangue de 8 h.

Os indivíduos serão instruídos a não mudar suas dietas, exercícios ou estilo de vida durante o estudo. Eles também serão instruídos a não consumir nenhum suco/fruta cítrica (laranja, toranja) durante o estudo. Três recordatórios alimentares de 24 horas serão coletados por telefone durante a última semana de cada período metabólico (P1, P2, P3). Uma dieta padronizada será servida para todas as três refeições de cada dia antes das coletas de sangue.