Metabolism och hälsoeffekter av citruslimonoider hos hyperkolesterolemiska människor

Detta är en 127-dagars studie med en cross-over design, uppdelad i tre metaboliska perioder (P1, P2 och P3). Under de första 14 dagarna (P1) kommer alla försökspersoner att få två placebodrycker och kommer att uppmanas att konsumera en vardera till frukost och middag. Sedan i metabolisk period 2 (P2), kommer försökspersonerna att slumpmässigt tilldelas en av två grupper (Grupp 1 och Grupp 2). Under de kommande 56 dagarna kommer grupp 1 att fortsätta att konsumera två placebo-drycker per dag, medan grupp 2 kommer att konsumera två drycker som innehåller limonoider (250 mg/dryck). Under de sista 56 dagarna (P3) kommer dryckerna som tillhandahålls till grupp 1 att innehålla limonoider, och drycker som tillhandahålls till grupp 2 kommer att vara placebo. Både placebo- och limonoiddryckerna kommer att vara 12-oz buffrad, steril, apelsinsmaksatt, artificiellt sötad dryck, innehållande 60 mg C-vitamin, 11 mg riboflavin och noll kalorier. Försökspersonerna instrueras att de måste dricka all dryck som tillhandahålls varje dag. Drycker kommer att innehålla en biomarkör (riboflavin), och biomarkören analyseras i urinprover som samlas in varannan vecka vid upphämtningen av drycker för att övervaka efterlevnaden. Försökspersonerna kommer att informeras om att de övervakas för efterlevnad. Limoninglukosid erhålls från citrusavfallsmaterial med hjälp av kromatografiska metoder som använder livsmedelsgodkända medier och lösningsmedel. Den slutliga rena limoninglukosiden kristalliseras fraktionerat från en koncentrerad vattenlösning av ett kromatografiskt renat extrakt. Det kristallina materialet separeras från moderluten, torkas och utsätts för masspektral och kärnmagnetisk resonansbedömning. Spektraldata jämförs med data som erhållits för en ren limoninglukosidstandard för att fastställa slutlig renhet som är bättre än 95 %.

Blodprover (cirka 70 ml, mindre än fem matskedar) kommer att tas efter 12 timmars fasta över natten på studiedagarna 1, 15, 71 och 127 genom venpunktion. Dessa blodprover kommer att användas för att bestämma serumlimonoider, fullständigt antal blodkroppar (CBC), och omfattande kemipanel (CCP), serumlipider, inflammationsmarkörer, lymfocyt- och monocyterfunktioner. Utöver de fastande blodtagningarna dag 15 (Grupp 2) och dag 71 (Grupp 1), kommer upprepade blodprover (5 ml varje gång, cirka en tesked) att tas vid 2, 4, 6, 8 och 24 timmar efter att ha tagit två 12-oz limonoiddrycker (totalt limonoider 500 mg) för att bestämma absorptionen och metabolismen av limonoider. Utredarna noterar att blodproverna som tas 24 timmar efter limonoidintaget kommer att vara på studiedag 16 för grupp 2 och dag 72 för grupp 1. Den totala mängden blod som tas kommer att vara mindre än 500 ml (2 koppar) på 127 dagar. Ett punkturinprov kommer att samlas in vid samma besök som det fastande blodet tas, och varannan vecka vid hämtning av drycker. Upprepade blodtagningar 0, 2, 4, 6 och 8 timmar efter limonoidtillskottet kommer att åtföljas av insamling av urinprover. Ingen mat kommer att tillåtas under 8 timmar; vattenintaget kommer att övervakas och begränsas till en liter. Försökspersonerna kommer att serveras två standardiserade måltider under denna tid, som var och en representerar 35 % av deras dagliga kaloriintag, en efter 0 timmars blodtagning och den andra efter 8 timmars blodtagning.

Försökspersonerna kommer att instrueras att inte ändra sin kost, träning eller livsstil under studiens gång. De kommer också att instrueras att inte konsumera någon citrusfrukt/juice (apelsin, grapefrukt) under hela studien. Tre 24-timmars dietåterkallelser kommer att samlas in per telefon under den sista veckan av varje metabolisk period (P1, P2, P3). En standardiserad diet kommer att serveras för alla tre måltiderna för varje dag före blodtagningarna.