Plasmodium Vivax -klorokiiniresistenssin arviointi Kambodžassa: (CRePViCam)

P. vivaxin CQ-resistenssifenotyypin arvioimiseksi menetelmään sisältyy seuraavat vaiheet:

1. P.vivax-monotartunnan saaneiden potilaiden sisällyttäminen kylistä hoidon epäonnistumisesta raportoidulle alueelle (Ban Lungin alue, Rattanakiri)
2. Pv-diagnostiikka (mikroskopia ja qPCR)
3. Potilaiden siirto Ban Lungin sairaalaan 7 päivän kliiniseen seurantaan
4. Verenotto, jota seuraa CQ:n antaminen
5. Loisten puhdistuman ja kokoveren CQ-pitoisuuden seuranta 7 päivän ajan.
6. Parasitemian seuranta 2 kuukauden ajan potilaiden ollessa Ban Lungissa koko tutkimuksen ajan sen varmistamiseksi, ettei uutta tartuntaa tapahdu (Ban Lung on tartunta-alue).
7. P. vivax -isolaattien lääkeherkkyysmääritys ex vivo ja mahdollisen uusiutumisen/relapsin jälkeen.
8. Loisten genotyyppianalyysi päivänä 0 ja mahdollisen uusiutumisen/relapsin jälkeen.

Tutkimus suunnittelu

Tutkimus suoritetaan Ban Lungin alueella (Rattanakirin maakunta, Kambodža) huhtikuun 2014 ja joulukuun 2014 välisenä aikana. Tämä tutkimuspaikka (Rattanakiri) on valittu suhteellisen korkean CQ-hoidon epäonnistumisilmoitusten perusteella. Ban Lungin piirin kylissä kaikille P. vivaxin monoinfektion saaneille aikuisille potilaille, jotka hakeutuvat hoitoon yhteisön tasolla (VMW ja terveyskeskukset) tarjotaan osallistumista tutkimukseen

Otoskoon laskenta perustui ensisijaiseen tavoitteeseen, eli todellisen resistenssifenotyypin tunnistamiseen CQ:lle. Siksi tarvitaan vähintään 50 potilasta, ja ihannetapauksessa noin 100 potilasta lisää resistenttien loisten havaitsemisen todennäköisyyttä.

Tutkimushenkilöstö ottaa yhteyttä kaikkiin soveltuviin osallistujiin ja heille kerrotaan tutkimuksen tavoitteista. Jokaiselta osallistujalta hankitaan tietoinen suostumus ennen osallistumista.

Kaikki tutkimuspaikoissa tunnistetut P. vivax -monoinfektiopotilaat otetaan mukaan.

Tähän tutkimukseen osallistuva henkilöstö koostuu CNM:n ja IPC:n tutkijoista ja teknikoista. Hankkeeseen osallistuu lisää yhteistyökumppaneita (referenssisairaala, terveyskeskukset ja VMW:n henkilöstön Rattanakirin provinssi).

Kylät Ban Lungin alueella, joissa P. vivax leviää, valitaan. Potilaat, jotka hakevat hoitoa näistä kylistä (VMW ja Health canters), testataan malariatartunnan varalta RDT:llä ja muilla kuin P. falciparum-tartunnan saaneelle potilaalle tarjotaan osallistumista tutkimukseen. Falciparum-malariatapauksia hoitavat VMW ja terveyskeskukset tavalliseen tapaan Kambodžan kansallisten ohjeiden mukaisesti

Tietoisen suostumuksen saatuaan potilaat otetaan mukaan tutkimukseen ja muodostetaan kaksi ryhmää:

1. kylässään oleskelevien potilaiden kontrolliryhmä ja
2. ryhmä siirrettiin Banlungin sairaalaan.

Sitten otetaan 3 x 5 ml ACD-putkia laskimoverta ennen kuin CQ annetaan potilaille.

Kontrolliryhmässä parasitemiaa seurataan päivänä 3, päivä 7, päivä 14, päivä 28 ja päivä D49, päivä 56 ja päivä 60 WHO:n protokollan mukaisesti käyttämällä sormenpistoilla kerättyä verta.

Tutkimusryhmässä potilaita seurataan sormenpistoilla loisten puhdistumiseksi ja CQ-konsentraatiomittauksilla 8 tunnin välein vähintään 3 päivän ajan, kunnes loinen on puhdistettu täydellisesti (määritetään kahdella peräkkäisellä negatiivisella tuloksella mikroskopiassa ja qPCR:ssä). Parasitemia ja CQ-pitoisuus määritetään päivittäin sormenpistoilla 7 päivän ajan.

Varmistaakseen, että potilaat eivät saa uutta tartuntaa, he oleskelevat Ban Lung -majoitustiloissa 2 kuukauden ajan 48 tunnin välein sormenpistoilla havaitakseen loisten lisääntymisen tutkimuksen aikana, kun taas kontrolliryhmä pysyy kylässään, jossa uusi tartunta voi tapahtua. esiintyä.

Jos havaitaan uusiutumista, potilaat otetaan sitten uudelleen Ban Lungin sairaalaan ja sama protokolla suoritetaan uudelleen.

P. vivax -isolaattien lääkeherkkyysmääritys ex vivo suoritetaan joko suoraan verinäytteistä tai kylmäsäilytyksen jälkeen. Molemmissa tapauksissa määritys sisältää juuri lisättyjen retikulosyyttien tunkeutumisen P. vivax -isolaatteihin.

Tähän työhön käytetyt retikulosyytit saadaan napanuoraverestä, joka on hankittu Calmetten sairaalan (Pr Kruy Leang Sim) gynekologian/sünnitysosaston kautta IPC:n ja Calmetten sairaalan välisen sopimuksen mukaisesti. Napanuoraverta toimitetaan IPC:lle säännöllisesti, kolme kertaa viikossa, 5-7 ml per ACD-putki, 5 putkea päivässä, jos synnytysten lukumäärä sallii tällaisen näytteenoton. ABO-veriryhmä, hemoglobiinielektroforeesi, G6PD-entsyymiaktiivisuus ja veren Duffy-status määritetään ennen retikulosyyttien käyttöä P. vivax -invaasiossa ja -viljelyssä.

Tiedot syötetään ja käsitellään Microsoft Excelillä. Parasitemia korreloi suoraan veren CQ-pitoisuuteen ja mahdollistaa loisten luokittelun niiden poistumisajan kulmakertoimen ja niiden CQ-herkkyyden mukaan.

Tilastollinen analyysi suoritetaan tarvittaessa merkittävien vaikutusten havaitsemiseksi.