A Plasmodium Vivax klorokin rezisztencia értékelése Kambodzsában: (CRePViCam)

A P. vivax CQ-val szembeni rezisztencia fenotípusának felmérése érdekében a módszertan a következő lépéseket tartalmazza:

1. P.vivax monofertőzött betegek bevonása falvakból a kezelési kudarcok miatt bejelentett területen (Ban Lung körzet, Rattanakiri)
2. Pv diagnosztikai megerősítés (mikroszkópos és qPCR)
3. A betegek átszállítása a Ban Lung kórházba 7 napos klinikai nyomon követés céljából
4. Vérvétel, majd CQ beadás
5. Parazitatisztítás és teljes vér CQ-koncentráció követése 7 napon keresztül.
6. Parazitémia követése 2 hónapon keresztül a Ban Lungban tartózkodó betegeknél a vizsgálat teljes ideje alatt, hogy megbizonyosodjon arról, hogy nem fordul elő újrafertőződés (a Ban Lung nem fertőző terület).
7. A P. vivax izolátumok ex vivo gyógyszerérzékenységi vizsgálata és bármilyen kiújulás/relapszus után, ha van ilyen.
8. Paraziták genotipizálási analízise a 0. napon és bármilyen kiújulás/relapszus után, ha van ilyen.

Kutatási terv

A tanulmányt Ban Lung körzetben (Rattanakir tartomány, Kambodzsa) végzik 2014 áprilisa és 2014 decembere között. Ezt a kutatóhelyet (Rattanakiri) a CQ kezelési kudarcainak viszonylag magas száma alapján választották ki. A Ban Lung körzet falvaiban minden P. vivax monofertőzött felnőtt betegnek, aki közösségi szintű kezelést kér (VMW és egészségügyi központok), felajánlják, hogy részt vegyen a vizsgálatban

A mintanagyság kiszámítása a CQ-val szembeni valódi rezisztencia fenotípus azonosításának elsődleges célkitűzésén alapult. Ezért legalább 50 betegre van szükség, és ideális esetben körülbelül 100 beteg növeli a rezisztens paraziták kimutatásának valószínűségét.

A vizsgálati személyzet minden jogosult résztvevőt megkeres, és tájékoztatást ad a vizsgálat céljairól. A felvétel előtt minden résztvevőtől tájékozott hozzájárulást kell kérni.

A vizsgálati helyszíneken azonosított összes P. vivax monofertőzött beteget bevonjuk.

A kutatásban részt vevő személyzet a CNM és az IPC tudósaiból és technikusaiból áll. További együttműködők (referenciakórház, egészségügyi központok és a VMW személyzete, Rattanakiri tartomány) vesznek részt a projektben.

A Ban Lung körzet azon falvait választják ki, ahol a P. vivax terjed. Az ezekből a falvakból (VMW és Health Canters) kezelést kérő betegeket RDT és minden nem P. falciparum fertőzött betegnek felajánlják, hogy részt vegyen a vizsgálatban. A Falciparum malária eseteit a VMW és az egészségügyi központok kezelik, ahogy általában a kambodzsai nemzeti irányelveknek megfelelően

A tájékozott beleegyezés megszerzése után a betegeket bevonják a vizsgálatba, és két csoportot alkotnak:

1. a falujukban tartózkodó betegek kontrollcsoportja és
2. egy csoportot átvittek a Banlung kórházba.

Ezután 3 x 5 ml-es ACD vénás vért kell gyűjteni, mielőtt a betegeknek CQ-t adnának.

A kontrollcsoport esetében a parazitémiát a 3., 7., 14., 28. és 42. napon, 49., 56. és 60. napon követik a WHO protokollja szerint, ujjbegyből vett vér felhasználásával.

A vizsgálati csoportban a betegeket ujjbegyéssel követik a paraziták eltávolítása és a CQ-koncentráció mérése céljából 8 óránként legalább 3 napon keresztül a teljes parazitatisztulásig (ezt a mikroszkópos és qPCR két egymást követő negatív eredmény határozza meg). A parazitémiát és a CQ-koncentrációt naponta ujjbegy segítségével határozzuk meg 7 napon keresztül.

Annak érdekében, hogy a betegek ne fertőződjenek meg újra, 2 hónapig a Ban Lung szállásán maradnak, minden 48 óránkénti ujjszúrással, hogy észleljék a parazitémia növekedését a vizsgálat során, míg a kontrollcsoport a falujukban marad, ahol az újbóli fertőzés elkerülhető. előfordul.

Ha kiújulás figyelhető meg, a betegeket újra felveszik a Ban Lung kórházba, és ugyanazt a protokollt újra végrehajtják.

A P. vivax izolátumok ex vivo gyógyszerérzékenységi vizsgálatát vagy közvetlenül a vérmintákból, vagy mélyhűtés után kell elvégezni. Mindkét esetben a vizsgálat magában foglalja a frissen hozzáadott retikulociták invázióját a P. vivax izolátumokhoz.

Az ehhez a munkához használt retikulocitákat a Calmette kórház nőgyógyászati/szülészeti osztályán (Pr Kruy Leang Sim) nyert köldökzsinórvérből nyerik az IPC és a Calmette kórház közötti megállapodás értelmében. A köldökzsinórvért rendszeresen, hetente háromszor, ACD-csövönként 5-7 ml-rel, napi 5 kémcsövönként, ha a születések száma megengedi. Meg kell határozni az ABO vércsoportot, a hemoglobin elektroforézist, a G6PD enzimaktivitást és a vér Duffy állapotát, mielőtt a retikulocitákat P. vivax invázióhoz és tenyésztéshez használnánk.

Az adatok bevitele és feldolgozása a Microsoft Excel segítségével történik. A parazitémia közvetlenül korrelál a vér CQ-koncentrációjával, és lehetővé teszi a paraziták kategorizálását a kiürülési idejük meredeksége és a CQ-ra való érzékenységük szerint.

Statisztikai elemzést végeznek, ha szükséges bármilyen jelentős hatás kimutatása érdekében.