カンボジアにおける三日熱マラリア原虫のクロロキン耐性の評価: (CRePViCam)

CQ に対する三日熱マラリア原虫の耐性表現型を評価するために、方法論には次の手順が含まれます。

1. 治療失敗報告地域（ラタナキリ州バンルン地区）の村落からの三日熱マラリア原虫単独感染患者の包含
2. Pv診断の確認（顕微鏡検査およびqPCR）
3. 7日間の臨床フォローアップのために患者をBan Lung病院に搬送
4. 採血後のCQ投与
5. 寄生虫除去と全血 CQ 濃度の 7 日間の追跡調査。
6. 再感染が起こらないことを確認するために、研究全体を通じてバン肺に滞在している患者に対して寄生虫症を2か月間追跡調査しました（バン肺は非伝播地域です）。
7. 三日熱マラリア原虫分離株および再燃/再発がある場合はその後の生体外薬物感受性アッセイ。
8. 0日目および再発/再発がある場合はその後の寄生虫のジェノタイピング分析。

研究デザイン

この研究は、2014年4月から2014年12月までバンルン地区（カンボジア・ラタナキル県）で実施される。 この研究施設（ラタナキリ）は、CQ への治療失敗の報告が比較的多いことに基づいて選択されました。 Ban Lung地区の村では、地域レベル（VMWおよび保健センター）での治療を求めている三日熱マラリア原虫単独感染成人患者全員に研究への参加が提案される。

サンプルサイズの計算は、CQ に対する真の耐性表現型を特定するという主な目的に対処することに基づいていました。したがって、最低 50 人の患者が必要であり、理想的には約 100 人の患者があれば、耐性寄生虫を検出する可能性が高まります。

適格な参加者全員に研究スタッフが連絡し、研究の目的に関する情報が説明されます。 参加前に各参加者からインフォームドコンセントが得られます。

研究施設で特定されたすべての三日熱マラリア原虫単独感染患者が含まれる。

この調査研究に関与するスタッフは、CNM と IPC の科学者と技術者で構成されます。 追加の協力者（ラタナキリ州の基準病院、保健センター、VMW スタッフ）がこのプロジェクトに参加します。

三日熱マラリア原虫の伝播が発生するバン ルン地区の村が選択されます。 これらの村（VMW およびヘルスキャンター）で治療を求める患者は、RDT および非 P によるマラリア感染の検査を受けます。 熱帯熱マラリア感染患者には研究への参加が提案されます。 熱帯熱マラリアの症例は、カンボジアの国家ガイドラインに従って、通常どおりVMWと保健センターによって管理されます。

インフォームドコンセントを得た後、患者は研究に登録され、次の 2 つのグループが構成されます。

1. 村に滞在している患者の対照群と、
2. グループはバンルン病院に搬送されました。

次に、患者に CQ を行う前に、静脈血の 5 ml ACD チューブ 3 本が収集されます。

対照群については、指刺し採取した血液を使用して、WHOプロトコルに従って、寄生虫血症を3日目、7日目、14日目、28日目および42日目、49日目、56日目および60日目に追跡する。

研究グループの場合、患者は寄生虫除去のために指刺しが行われ、完全な寄生虫除去（顕微鏡検査とqPCRでの2回連続の陰性結果によって決定される）が完了するまで少なくとも3日間、8時間ごとにCQ濃度測定が行われます。 寄生虫血症および CQ 濃度は、7 日間指刺しを​​使用して毎日測定されます。

患者が再感染しないことを確認するため、研究期間中、患者はバン肺の宿泊施設に2か月間滞在し、48時間ごとに指を刺して寄生虫血症の増加を検出しますが、対照群は再感染の可能性がある村に滞在します。起こる。

再発が観察された場合、患者はBan Lung病院に再入院し、同じプロトコルが再度実行されます。

三日熱マラリア原虫分離株の ex vivo 薬物感受性アッセイは、血液サンプルから直接、または凍結保存後に行われます。 どちらの場合も、アッセイには、三日熱マラリア原虫分離株への新たに添加された網状赤血球の侵入が含まれます。

この研究に使用される網状赤血球は、IPC とカルメット病院の間の合意に従って、カルメット病院の婦人科/産科 (Pr Kruy Leang Sim) を通じて採取された臍帯血から取得されます。 臍帯血は、出生数がそのようなサンプリングを可能にする場合、週に３回、ＡＣＤチューブ当たり５〜７ｍｌ、１日当たり５本のチューブで定期的にＩＰＣに供給される。 三日熱マラリア原虫の侵入および培養に網赤血球を使用する前に、ABO 血液型、ヘモグロビン電気泳動、G6PD 酵素活性および血液のダフィー状態が測定されます。

データはMicrosoft Excelを使用して入力および処理されます。 寄生虫血症は血液中の CQ 濃度と直接相関しており、クリアランス時間の傾きと CQ に対する感受性に従って寄生虫を分類することが可能になります。

重大な影響を検出するために必要な場合、統計分析が実行されます。