Évaluation de la résistance de Plasmodium Vivax à la chloroquine au Cambodge : (CRePViCam)

Afin d'évaluer le phénotype de résistance de P. vivax à CQ, la méthodologie impliquera les étapes suivantes :

1. Inclusion des patients mono-infectés à P.vivax des villages de la zone d'échec thérapeutique (district de Ban Lung, Rattanakiri)
2. Confirmation du diagnostic pv (microscopie et qPCR)
3. Transfert des patients à l'hôpital de Ban Lung pour un suivi clinique de 7 jours
4. Prélèvement sanguin suivi de l'administration de CQ
5. Suivi de la clairance parasitaire et de la concentration de CQ dans le sang total pendant 7 jours.
6. Suivi de la parasitémie pendant 2 mois avec des patients séjournant à Ban Lung pendant toute la durée de l'étude pour s'assurer qu'aucune réinfection ne se produit (Ban Lung est une zone de non-transmission).
7. Test de sensibilité aux médicaments ex vivo des isolats de P. vivax et après toute recrudescence/rechute, le cas échéant.
8. Analyse génotypique des parasites au jour 0 et après toute recrudescence/rechute, le cas échéant.

Conception de la recherche

L'étude sera menée dans le district de Ban Lung (province de Rattanakir, Cambodge) entre avril 2014 et décembre 2014. Ce site de recherche (Rattanakiri) est choisi sur la base de rapports relativement élevés d'échecs de traitement à CQ. Dans les villages du district de Ban Lung, tous les patients adultes mono-infectés par P. vivax cherchant un traitement au niveau communautaire (VMW et centres de santé) se verront proposer de participer à l'étude

Le calcul de la taille de l'échantillon était basé sur l'objectif principal d'identifier un véritable phénotype de résistance à la CQ. Par conséquent, un minimum de 50 patients est requis et idéalement, environ 100 patients augmenteront la probabilité de détecter des parasites résistants.

Tous les participants éligibles seront approchés par le personnel de l'étude et des informations sur les objectifs de l'étude seront expliquées. Le consentement éclairé sera obtenu de chaque participant avant l'inclusion.

Tous les patients mono-infectés par P. vivax identifiés dans les sites d'étude seront inclus.

Le personnel impliqué dans cette étude de recherche sera composé de scientifiques et de techniciens du CNM et de l'IPC. Des collaborateurs supplémentaires (hôpital de référence, centres de santé et personnel de la VMW de la province de Rattanakiri) seront impliqués dans le projet.

Les villages du district de Ban Lung où se produit la transmission de P. vivax seront sélectionnés. Les patients cherchant un traitement dans ces villages (VMW et centres de santé) seront testés pour l'infection palustre par TDR et tout non-P. patient infecté par falciparum se verra proposer de participer à l'étude. Les cas de paludisme à Falciparum seront pris en charge par la VMW et les centres de santé, comme d'habitude selon les directives nationales cambodgiennes

Après obtention du consentement éclairé, les patients seront enrôlés dans l'étude et deux groupes seront constitués :

1. un groupe témoin de patients demeurant dans leur village et
2. un groupe transféré à l'hôpital de Banlung.

Ensuite, 3 tubes ACD de 5 ml de sang veineux seront prélevés avant d'être administrés par CQ aux patients.

Pour le groupe témoin, la parasitémie sera suivie à J3, J7, J14, J28 et J42 J49, J56 et J60 selon le protocole OMS, à partir de sang prélevé par prélèvement au doigt.

Pour le groupe d'étude, les patients seront suivis par une piqûre au doigt pour la clairance des parasites et des mesures de concentration de CQ toutes les 8h pendant au moins 3 jours jusqu'à la clairance complète des parasites (déterminée par deux résultats négatifs consécutifs en microscopie et qPCR). La parasitémie et la concentration de CQ seront déterminées quotidiennement par piqûre au doigt pendant 7 jours.

Pour s'assurer que les patients ne seront pas réinfectés, ils resteront dans l'hébergement de Ban Lung pendant 2 mois avec des piqûres toutes les 48h pour détecter toute augmentation de la parasitémie pendant l'étude, tandis que le groupe témoin restera dans leur village où la réinfection peut se produire.

Si une recrudescence est observée, les patients seront alors réadmis à l'hôpital de Ban Lung et le même protocole sera à nouveau effectué.

Le test de sensibilité aux médicaments ex vivo des isolats de P. vivax sera effectué soit directement à partir des échantillons de sang, soit après cryoconservation. Dans les deux cas, le test impliquera l'invasion de réticulocytes fraîchement ajoutés aux isolats de P. vivax.

Les réticulocytes utilisés pour ce travail seront obtenus à partir de sang de cordon acquis par le service de gynécologie/obstétrique de l'hôpital de Calmette (Pr Kruy Leang Sim), selon l'accord entre l'IPC et l'hôpital de Calmette. Le sang de cordon sera fourni régulièrement à l'IPC, trois fois par semaine, 5 à 7 ml par tube ACD, 5 tubes par jour, si le nombre de naissances le permet. Le groupe sanguin ABO, l'électrophorèse de l'hémoglobine, l'activité enzymatique G6PD et le statut Duffy du sang seront déterminés avant d'utiliser les réticulocytes pour l'invasion et la culture de P. vivax.

Les données seront saisies et traitées à l'aide de Microsoft Excel. La parasitémie sera directement corrélée à la concentration de CQ dans le sang et permettra de catégoriser les parasites selon la pente de leur temps de clairance et leur sensibilité à la CQ.

Une analyse statistique sera effectuée au besoin pour détecter tout effet significatif.