Vurdering af Plasmodium Vivax Chloroquine Resistens i Cambodja: (CRePViCam)

For at vurdere resistensfænotypen af ​​P. vivax over for CQ, vil metoden omfatte følgende trin:

1. Inkludering af P.vivax mono-inficerede patienter fra landsbyer i behandlingssvigt-rapporteret område (Ban Lung-distriktet, Rattanakiri)
2. Pv diagnostisk bekræftelse (mikroskopi og qPCR)
3. Overførsel af patienter til Ban Lung hospital for en 7-dages klinisk opfølgning
4. Blodopsamling efterfulgt af CQ administration
5. Parasitclearance og fuldblods CQ-koncentrationsopfølgning i 7 dage.
6. Parasitemi-opfølgning i 2 måneder med patienter, der opholder sig i Ban Lung under hele undersøgelsen for at sikre, at der ikke opstår geninfektion (Ban Lung er et område uden overførsel).
7. Ex vivo lægemiddelfølsomhedsassay af P. vivax-isolater og efter eventuel gendannelse/tilbagefald.
8. Genotypingsanalyse af parasitter på dag 0 og efter eventuel gendannelse/tilbagefald.

Forskningsdesign

Undersøgelsen vil blive udført i Ban Lung-distriktet (Rattanakir-provinsen, Cambodja) mellem april 2014 og december 2014. Dette forskningssted (Rattanakiri) er valgt på baggrund af relativt høje rapporter om behandlingssvigt til CQ. I Ban Lung-distriktets landsbyer vil alle P. vivax mono-inficerede voksne patienter, der søger behandling på lokalt niveau (VMW og sundhedscentre), blive tilbudt at deltage i undersøgelsen

Prøvestørrelsesberegningen var baseret på at adressere det primære formål med at identificere en ægte resistensfænotype over for CQ. Der kræves derfor minimum 50 patienter, og ideelt set vil omkring 100 patienter øge sandsynligheden for at opdage resistente parasitter.

Alle kvalificerede deltagere vil blive kontaktet af undersøgelsens personale, og information om undersøgelsens mål vil blive forklaret. Informeret samtykke vil blive indhentet fra hver deltager før inklusion.

Alle P. vivax mono-inficerede patienter identificeret på undersøgelsesstederne vil blive inkluderet.

Personale involveret i denne forskningsundersøgelse vil være sammensat af forskere og teknikere fra CNM og IPC. Yderligere samarbejdspartnere (referencehospital, sundhedscentre og VMW-personale i Rattanakiri-provinsen) vil blive involveret i projektet.

Landsbyer i Ban Lung-distriktet, hvor P. vivax-transmission finder sted, vil blive udvalgt. Patienter, der søger behandling fra disse landsbyer (VMW og Health galop), vil blive testet for malariainfektion af RDT og enhver ikke-P. falciparum-inficerede patient vil blive tilbudt at deltage i undersøgelsen. Falciparum malaria tilfælde vil blive styret af VMW og sundhedscentre som normalt i henhold til Cambodjas nationale retningslinjer

Efter at have indhentet informeret samtykke vil patienterne blive optaget i undersøgelsen, og to grupper vil blive sammensat:

1. en kontrolgruppe af patienter, der opholder sig i deres landsby og
2. en gruppe overført til Banlung hospital.

Derefter vil der blive opsamlet 3 x 5 ml-ACD-rør med veneblod, før de gives CQ til patienterne.

For kontrolgruppen vil parasitæmi blive fulgt på dag 3, D7, D14, D28 og D42 D49, D56 og D60 i henhold til WHO-protokol ved hjælp af fingerstik-opsamlet blod.

For undersøgelsesgruppen vil patienterne blive fulgt med fingerstik for parasitterclearance og CQ-koncentrationsmålinger hver 8. time i mindst 3 dage indtil fuldstændig parasitclearance (bestemt af to på hinanden følgende negative resultater i mikroskopi og qPCR). Parasitæmi og CQ-koncentration vil blive bestemt dagligt ved hjælp af fingerstik i 7 dage.

For at sikre, at patienterne ikke bliver re-inficeret, vil de blive i Ban Lung indkvartering i 2 måneder med fingerstik hver 48. time for at opdage enhver stigning i parasitæmi under undersøgelsen, mens kontrolgruppen bliver i deres landsby, hvor geninfektion kan forekomme.

Hvis der observeres genopblomstring, vil patienterne blive genindlagt på Ban Lung hospital, og den samme protokol vil blive udført igen.

Ex vivo lægemiddelfølsomhedsanalyse af P. vivax-isolaterne udføres enten direkte fra blodprøverne eller efter kryokonservering. I begge tilfælde vil assayet involvere invasion af frisk tilsatte retikulocytter til P. vivax-isolaterne.

De retikulocytter, der bruges til dette arbejde, vil blive opnået fra navlestrengsblod erhvervet gennem gynækologisk/obstetrisk afdeling på Calmette hospital (Pr Kruy Leang Sim), i henhold til aftalen mellem IPC og Calmette hospital. Navlestrengsblod vil blive leveret regelmæssigt til IPC, tre gange om ugen, 5 til 7 ml pr. ACD-rør, 5 rør om dagen, hvis antallet af fødsel tillader en sådan prøvetagning. ABO-blodgruppe, hæmoglobinelektroforese, G6PD-enzymaktivitet og Duffy-status af blodet vil blive bestemt før brug af retikulocytter til P. vivax-invasion og dyrkning.

Data vil blive indtastet og behandlet ved hjælp af Microsoft Excel. Parasitæmi vil være direkte korreleret til CQ-koncentrationen i blodet og vil gøre det muligt at kategorisere parasitterne i henhold til hældningen af ​​deres clearance-tid og deres følsomhed over for CQ.

Statistisk analyse vil blive udført, når det er nødvendigt for at opdage eventuelle signifikante effekter.