Avaliação da resistência do Plasmodium Vivax à cloroquina no Camboja: (CRePViCam)

Para avaliar o fenótipo de resistência de P. vivax à CQ, a metodologia envolverá as seguintes etapas:

1. Inclusão de pacientes monoinfectados por P.vivax de aldeias na área relatada como falha de tratamento (distrito de Ban Lung, Rattanakiri)
2. Confirmação diagnóstica de Pv (microscopia e qPCR)
3. Transferência de pacientes para o hospital Ban Lung para acompanhamento clínico de 7 dias
4. Coleta de sangue seguida de administração de CQ
5. Depuração do parasita e acompanhamento da concentração de CQ no sangue total durante 7 dias.
6. Acompanhamento de parasitemia durante 2 meses com pacientes que permaneceram em Ban Lung durante todo o estudo para garantir que não ocorra reinfecção (Ban Lung é uma área sem transmissão).
7. Ensaio de suscetibilidade a drogas ex vivo de isolados de P. vivax e após qualquer recrudescência/recaída, se houver.
8. Análise de genotipagem de parasitas no dia 0 e após qualquer recrudescência/recaída, se houver.

Projeto de pesquisa

O estudo será realizado no distrito de Ban Lung (província de Rattanakir, Camboja) entre abril de 2014 e dezembro de 2014. Este local de pesquisa (Rattanakiri) é escolhido com base em relatórios relativamente altos de falhas de tratamento para CQ. Nas aldeias do distrito de Ban Lung, todos os pacientes adultos monoinfectados por P. vivax que procuram tratamento a nível comunitário (VMW e centros de saúde) serão convidados a participar do estudo

O cálculo do tamanho da amostra foi baseado em abordar o objetivo principal de identificar um verdadeiro fenótipo de resistência à CQ. Portanto, é necessário um mínimo de 50 pacientes e, idealmente, cerca de 100 pacientes aumentarão a probabilidade de detectar parasitas resistentes.

Todos os participantes elegíveis serão abordados pela equipe do estudo e as informações sobre os objetivos do estudo serão explicadas. O consentimento informado será obtido de cada participante antes da inclusão.

Todos os pacientes monoinfectados por P. vivax identificados nos locais de estudo serão incluídos.

A equipe envolvida neste estudo de pesquisa será composta por cientistas e técnicos do CNM e do IPC. Colaboradores adicionais (hospital de referência, centros de saúde e funcionários da VMW na província de Rattanakiri) estarão envolvidos no projeto.

Serão selecionadas aldeias no distrito de Ban Lung onde ocorre a transmissão de P. vivax. Os pacientes que procuram tratamento nessas aldeias (VMW e centros de saúde) serão testados para infecção por malária por RDT e qualquer outro não-P. falciparum será oferecido para participar do estudo. Os casos de malária Falciparum serão geridos pela VMW e pelos centros de saúde, como habitualmente, de acordo com as diretrizes nacionais do Camboja

Após obter o consentimento informado, os pacientes serão incluídos no estudo e dois grupos serão constituídos:

1. um grupo de controle de pacientes que ficam em sua aldeia e
2. um grupo foi transferido para o hospital Banlung.

Em seguida, serão coletados 3 tubos de 5ml-ACD de sangue venoso antes de serem administrados CQ aos pacientes.

Para o grupo controle, a parasitemia será acompanhada no Dia 3, D7, D14, D28 e D42 D49, D56 e D60 de acordo com o protocolo da OMS, usando sangue coletado por picada no dedo.

Para o grupo de estudo, os pacientes serão acompanhados por picada no dedo para eliminação de parasitas e medidas de concentração de CQ a cada 8h por pelo menos 3 dias até a eliminação completa do parasita (determinada por dois resultados negativos consecutivos em microscopia e qPCR). A parasitemia e a concentração de CQ serão determinadas diariamente por meio de picada no dedo por 7 dias.

Para garantir que os pacientes não sejam reinfectados, eles permanecerão no alojamento Ban Lung por 2 meses com picadas no dedo a cada 48h para detectar qualquer aumento na parasitemia durante o estudo, enquanto o grupo controle ficará em sua aldeia onde a reinfecção pode ocorrer.

Se for observada recrudescência, os pacientes serão readmitidos no hospital Ban Lung e o mesmo protocolo será realizado novamente.

O ensaio de sensibilidade a drogas ex vivo dos isolados de P. vivax será realizado diretamente das amostras de sangue ou após criopreservação. Em ambos os casos, o ensaio envolverá a invasão de reticulócitos recém-adicionados aos isolados de P. vivax.

Os reticulócitos utilizados para este trabalho serão obtidos do sangue do cordão umbilical adquirido através do departamento de ginecologia/obstetrícia do hospital Calmette (Pr Kruy Leang Sim), de acordo com o acordo entre o IPC e o hospital Calmette. O sangue do cordão umbilical será fornecido regularmente ao IPC, três vezes por semana, 5 a 7 ml por tubo ACD, 5 tubos por dia, se o número de nascimentos permitir tal amostragem. Grupo sanguíneo ABO, eletroforese de hemoglobina, atividade da enzima G6PD e status Duffy do sangue serão determinados antes do uso de reticulócitos para invasão e cultura de P. vivax.

Os dados serão inseridos e processados ​​usando o Microsoft Excel. A parasitemia estará diretamente correlacionada com a concentração de CQ no sangue e permitirá categorizar os parasitas de acordo com a inclinação de seu tempo de eliminação e sua sensibilidade à CQ.

A análise estatística será realizada quando necessário para detectar quaisquer efeitos significativos.