Evaluación de la resistencia a la cloroquina de Plasmodium Vivax en Camboya: (CRePViCam)

Para evaluar el fenotipo de resistencia de P. vivax a CQ, la metodología implicará los siguientes pasos:

1. Inclusión de pacientes monoinfectados con P.vivax de aldeas en el área notificada de fracaso del tratamiento (distrito de Ban Lung, Rattanakiri)
2. Confirmación del diagnóstico de PV (microscopía y qPCR)
3. Traslado de pacientes al hospital de Ban Lung para un seguimiento clínico de 7 días
4. Recolección de sangre seguida de administración de CQ
5. Seguimiento de la eliminación de parásitos y concentración de CQ en sangre total durante 7 días.
6. Seguimiento de parasitemia durante 2 meses con pacientes que permanecen en Ban Lung durante todo el estudio para asegurarse de que no se produzca una reinfección (Ban Lung es un área sin transmisión).
7. Ensayo de susceptibilidad a fármacos ex vivo de aislamientos de P. vivax y después de cualquier recrudecimiento/recaída, si la hubiere.
8. Análisis de genotipado de parásitos en el día 0 y después de cualquier recrudecimiento/recaída, si la hubiere.

Diseño de la investigación

El estudio se llevará a cabo en el distrito de Ban Lung (provincia de Rattanakir, Camboya) entre abril de 2014 y diciembre de 2014. Este sitio de investigación (Rattanakiri) se elige sobre la base de informes relativamente altos de fallas en el tratamiento de CQ. En las aldeas del distrito de Ban Lung, se ofrecerá participar en el estudio a todos los pacientes adultos monoinfectados con P. vivax que busquen tratamiento a nivel comunitario (VMW y centros de salud).

El cálculo del tamaño de la muestra se basó en abordar el objetivo principal de identificar un fenotipo de resistencia real a CQ. Por lo tanto, se requiere un mínimo de 50 pacientes e idealmente, alrededor de 100 pacientes aumentará la probabilidad de detectar parásitos resistentes.

El personal del estudio se acercará a todos los participantes elegibles y se les explicará la información sobre los objetivos del estudio. Se obtendrá el consentimiento informado de cada participante antes de la inclusión.

Se incluirán todos los pacientes monoinfectados por P. vivax identificados en los sitios de estudio.

El personal involucrado en este estudio de investigación estará compuesto por científicos y técnicos del CNM y del IPC. Colaboradores adicionales (Hospital de referencia, Centros de salud y personal de VMW en la provincia de Rattanakiri) participarán en el proyecto.

Se seleccionarán las aldeas del distrito de Ban Lung donde se produzca la transmisión de P. vivax. Los pacientes que busquen tratamiento en esas aldeas (VMW y Health canters) se someterán a pruebas de infección por paludismo mediante RDT y cualquier infección no P. Se ofrecerá a un paciente infectado por falciparum participar en el estudio. Los casos de malaria falciparum serán manejados por VMW y los centros de salud como de costumbre, de acuerdo con las pautas nacionales de Camboya.

Tras obtener el consentimiento informado, los pacientes serán incluidos en el estudio y se constituirán dos grupos:

1. un grupo de control de pacientes que se alojaban en su pueblo y
2. un grupo trasladado al hospital de Banlung.

Luego, se recolectarán 3 tubos ACD de 5 ml de sangre venosa antes de administrarles CQ a los pacientes.

Para el grupo de control, se seguirá la parasitemia en el Día 3, D7, D14, D28 y D42 D49, D56 y D60 de acuerdo con el protocolo de la OMS, utilizando sangre recolectada por punción digital.

Para el grupo de estudio, se realizará un seguimiento de los pacientes mediante punción digital para la eliminación de parásitos y medidas de concentración de CQ cada 8 h durante al menos 3 días hasta la eliminación completa del parásito (determinada por dos resultados negativos consecutivos en microscopía y qPCR). La parasitemia y la concentración de CQ se determinarán diariamente mediante punción digital durante 7 días.

Para asegurarse de que los pacientes no se vuelvan a infectar, permanecerán en el alojamiento de Ban Lung durante 2 meses con pinchazos en los dedos cada 48 horas para detectar cualquier aumento de la parasitemia durante el estudio, mientras que el grupo de control permanecerá en su pueblo donde se puede volver a infectar. ocurrir.

Si se observa un recrudecimiento, los pacientes serán readmitidos en el hospital de Ban Lung y se volverá a realizar el mismo protocolo.

El ensayo de sensibilidad al fármaco ex vivo de los aislados de P. vivax se realizará directamente a partir de las muestras de sangre o después de la crioconservación. En ambos casos, el ensayo implicará la invasión de reticulocitos recién agregados a los aislamientos de P. vivax.

Los reticulocitos utilizados para este trabajo se obtendrán de la sangre del cordón obtenida a través del departamento de ginecología/obstetricia del hospital de Calmette (Pr Kruy Leang Sim), según el acuerdo entre el IPC y el hospital de Calmette. La sangre del cordón umbilical se suministrará regularmente al IPC, tres veces por semana, de 5 a 7 ml por tubo ACD, 5 tubos por día, si el número de nacimientos permite tal muestreo. El grupo sanguíneo ABO, la electroforesis de hemoglobina, la actividad de la enzima G6PD y el estado Duffy de la sangre se determinarán antes de usar reticulocitos para la invasión y el cultivo de P. vivax.

Los datos serán ingresados ​​y procesados ​​utilizando Microsoft Excel. La parasitemia estará directamente relacionada con la concentración de CQ en sangre y permitirá categorizar los parásitos según la pendiente de su tiempo de eliminación y su sensibilidad a la CQ.

Se realizarán análisis estadísticos cuando sea necesario para detectar cualquier efecto significativo.