Bedömning av Plasmodium Vivax klorokinresistens i Kambodja: (CRePViCam)

För att bedöma resistensfenotypen av P. vivax mot CQ kommer metoden att innefatta följande steg:

1. Inkludering av P.vivax mono-infekterade patienter från byar i behandlingsmisslyckande område (Ban Lung-distriktet, Rattanakiri)
2. Pv diagnostisk bekräftelse (mikroskopi och qPCR)
3. Överföring av patienter till Ban Lung sjukhus för en 7-dagars klinisk uppföljning
4. Bloduppsamling följt av CQ-administration
5. Parasitclearance och CQ-koncentrationsuppföljning i helblod under 7 dagar.
6. Parasitemiuppföljning under 2 månader med patienter som vistas i Ban Lung under hela studien för att säkerställa att ingen återinfektion inträffar (Ban Lung är ett område utan överföring).
7. Ex vivo läkemedelskänslighetsanalys av P. vivax-isolat och efter eventuellt återfall/återfall.
8. Genotypanalys av parasiter vid dag 0 och efter eventuellt återfall/återfall.

Forskningsdesign

Studien kommer att genomföras i Ban Lung-distriktet (Rattanakir-provinsen, Kambodja) mellan april 2014 och december 2014. Denna forskningsplats (Rattanakiri) är vald på basis av relativt höga rapporter om behandlingsmisslyckanden till CQ. I Ban Lung-distriktets byar kommer alla P. vivax mono-infekterade vuxna patienter som söker behandling på samhällsnivå (VMW och vårdcentraler) att erbjudas att delta i studien

Provstorleksberäkningen baserades på att ta itu med det primära målet att identifiera en sann resistensfenotyp mot CQ. Därför krävs minst 50 patienter och helst kommer cirka 100 patienter att öka sannolikheten för att upptäcka resistenta parasiter.

Alla kvalificerade deltagare kommer att kontaktas av studiepersonalen och information om studiens mål kommer att förklaras. Informerat samtycke kommer att erhållas från varje deltagare innan inkluderingen.

Alla P. vivax mono-infekterade patienter som identifierats på studieställena kommer att inkluderas.

Personal som är involverad i denna forskningsstudie kommer att bestå av forskare och tekniker från CNM och IPC. Ytterligare samarbetspartners (referenssjukhus, vårdcentraler och VMW-personal i Rattanakiri-provinsen) kommer att vara involverade i projektet.

Byar i Ban Lung-distriktet där P. vivax-överföring sker kommer att väljas ut. Patienter som söker behandling från dessa byar (VMW och Health galopp) kommer att testas för malariainfektion av RDT och alla icke-P. falciparum-infekterade patienter kommer att erbjudas att delta i studien. Falciparum malariafall kommer att hanteras av VMW och hälsocentraler som vanligt enligt kambodjanska nationella riktlinjer

Efter att ha erhållit informerat samtycke kommer patienterna att registreras i studien och två grupper kommer att bildas:

1. en kontrollgrupp av patienter som vistas i deras by och
2. en grupp överförd till Banlung sjukhus.

Sedan kommer 3 x 5 ml-ACD-rör med venöst blod att samlas upp innan de ges CQ till patienter.

För kontrollgruppen kommer parasitemi att följas på dag 3, D7, D14, D28 och D42 D49, D56 och D60 enligt WHO:s protokoll, med hjälp av blod från fingerstick.

För studiegruppen kommer patienterna att följas av ett fingerstick för parasitclearance och CQ-koncentrationsmätningar var 8:e timme i minst 3 dagar tills fullständig parasitclearning (bestäms av två på varandra följande negativa resultat i mikroskopi och qPCR). Parasitemi och CQ-koncentration kommer att bestämmas dagligen med fingerstick i 7 dagar.

För att säkerställa att patienterna inte kommer att återinfekteras kommer de att stanna i Ban Lung boende i 2 månader med fingerstick var 48:e timme för att upptäcka eventuell ökning av parasitemi under studien, medan kontrollgruppen kommer att stanna i sin by där återinfektion kan inträffa.

Om återväxt observeras, kommer patienterna att läggas in igen på Ban Lung sjukhus och samma protokoll kommer att utföras igen.

Ex vivo läkemedelskänslighetsanalys av P. vivax-isolaten kommer att utföras antingen direkt från blodproven eller efter kryokonservering. I båda fallen kommer analysen att involvera invasionen av nytillsatta retikulocyter till P. vivax-isolaten.

De retikulocyter som används för detta arbete kommer att erhållas från navelsträngsblod som förvärvats genom gynekologi/obstetriska avdelningen på Calmettes sjukhus (Pr Kruy Leang Sim), enligt avtalet mellan IPC och Calmettes sjukhus. Navelsträngsblod kommer regelbundet att tillföras IPC, tre gånger i veckan, 5 till 7 ml per ACD-rör, 5 rör per dag, om antalet födslar tillåter sådan provtagning. ABO-blodgrupp, hemoglobinelektrofores, G6PD-enzymaktivitet och Duffy-status för blodet kommer att bestämmas innan retikulocyter används för P. vivax-invasion och -odling.

Data kommer att matas in och bearbetas med hjälp av Microsoft Excel. Parasitemi kommer att vara direkt korrelerad till CQ-koncentrationen i blodet och gör det möjligt att kategorisera parasiterna enligt lutningen av deras rensningstid och deras känslighet för CQ.

Statistisk analys kommer att utföras vid behov för att upptäcka eventuella signifikanta effekter.