Оценка устойчивости Plasmodium Vivax к хлорохину в Камбодже: (CRePViCam)

Чтобы оценить фенотип устойчивости P. vivax к CQ, методология будет включать следующие этапы:

1. Включение пациентов с моноинфекцией P.vivax из деревень в области, где сообщалось о неэффективности лечения (район Бан Лунг, Раттанакири)
2. Подтверждение диагностики Pv (микроскопия и количественная ПЦР)
3. Перевод пациентов в больницу Ban Lung для 7-дневного клинического наблюдения
4. Сбор крови с последующим введением CQ
5. Клиренс от паразитов и контроль концентрации CQ в цельной крови в течение 7 дней.
6. Последующее наблюдение за паразитемией в течение 2 месяцев с пациентами, находившимися в Бан-Лунге в течение всего исследования, чтобы убедиться в отсутствии повторного заражения (Бан-Лунг — зона, где нет передачи инфекции).
7. Анализ чувствительности изолятов P. vivax к лекарственным средствам ex vivo и после любого обострения/рецидива, если таковой имел место.
8. Генотипический анализ паразитов в день 0 и после любого рецидива/рецидива, если таковой имел место.

Дизайн исследования

Исследование будет проводиться в районе Бан Лунг (провинция Раттанакир, Камбоджа) в период с апреля по декабрь 2014 года. Этот исследовательский центр (Раттанакири) выбран на основании относительно большого количества сообщений о неэффективности лечения CQ. В деревнях округа Бан Лунг всем взрослым пациентам с моноинфекцией P. vivax, обращающимся за лечением на уровне сообщества (VMW и медицинские центры), будет предложено принять участие в исследовании.

Расчет размера выборки был основан на решении основной задачи выявления истинного фенотипа устойчивости к CQ. Поэтому требуется минимум 50 пациентов, а в идеале около 100 пациентов повысят вероятность обнаружения резистентных паразитов.

Сотрудники исследования свяжутся со всеми подходящими участниками, и им будет объяснена информация о целях исследования. Информированное согласие будет получено от каждого участника перед включением.

Будут включены все пациенты с моноинфекцией P. vivax, выявленные в центрах исследования.

Персонал, участвующий в этом исследовании, будет состоять из ученых и технических специалистов из CNM и IPC. В проекте будут задействованы дополнительные сотрудники (справочная больница, медицинские центры и персонал VMW в провинции Раттанакири).

Будут выбраны деревни в районе Бан Лунг, где происходит передача P. vivax. Пациенты, обращающиеся за лечением из этих деревень (центры VMW и Health), будут проверены на наличие малярийной инфекции с помощью RDT и любого не-P. falciparum инфицированному пациенту будет предложено принять участие в исследовании. Случаи малярии Falciparum будут контролироваться VMW и медицинскими центрами, как обычно, в соответствии с национальными рекомендациями Камбоджи.

После получения информированного согласия пациенты будут включены в исследование и будут сформированы две группы:

1. контрольная группа пациентов, проживающих в своем селе и
2. группу перевели в больницу Банлунг.

Затем будут собраны 3 пробирки ACD по 5 мл с венозной кровью перед введением CQ пациентам.

В контрольной группе за паразитемией будут следить в День 3, Д7, Д14, Д28 и Д42, Д49, Д56 и Д60 в соответствии с протоколом ВОЗ с использованием крови, взятой из пальца.

В исследуемой группе пациентов будут сопровождать проколом пальца для очистки от паразитов и измерять концентрацию CQ каждые 8 ​​часов в течение как минимум 3 дней до полной очистки от паразитов (определяется двумя последовательными отрицательными результатами микроскопии и количественной ПЦР). Паразитемию и концентрацию CQ будут определять ежедневно с помощью укола пальца в течение 7 дней.

Чтобы убедиться, что пациенты не будут повторно инфицированы, они будут оставаться в помещении Ban Lung в течение 2 месяцев с уколом пальца каждые 48 часов для выявления любого роста паразитемии во время исследования, в то время как контрольная группа останется в своей деревне, где повторное заражение может быть происходить.

Если наблюдается рецидив, пациенты будут повторно госпитализированы в больницу Ban Lung, и тот же протокол будет выполнен снова.

Анализ чувствительности к лекарственным средствам ex vivo изолятов P. vivax будет проводиться либо непосредственно из образцов крови, либо после криоконсервации. В обоих случаях анализ будет включать инвазию свежедобавленных ретикулоцитов в изоляты P. vivax.

Ретикулоциты, используемые для этой работы, будут получены из пуповинной крови, полученной в гинекологическом/акушерском отделении больницы Кальметт (Pr Kruy Leang Sim), в соответствии с соглашением между IPC и больницей Кальметт. Пуповинная кровь будет поступать в ИПЦ регулярно, три раза в неделю, по 5-7 мл на ACD-пробирку, 5 пробирок в день, если число рождений позволяет такой забор. Группа крови ABO, электрофорез гемоглобина, активность фермента G6PD и статус Duffy в крови будут определены перед использованием ретикулоцитов для инвазии P. vivax и посева.

Данные будут вводиться и обрабатываться с помощью Microsoft Excel. Паразитемия будет напрямую коррелировать с концентрацией CQ в крови и позволит классифицировать паразитов в соответствии с наклоном времени их клиренса и их чувствительностью к CQ.

При необходимости будет проводиться статистический анализ для выявления каких-либо существенных эффектов.