Beoordeling van resistentie tegen chloroquine van Plasmodium Vivax in Cambodja: (CRePViCam)

Om het resistentiefenotype van P. vivax tegen CQ te beoordelen, omvat de methodologie de volgende stappen:

1. Opname van met P.vivax mono-geïnfecteerde patiënten uit dorpen in het gebied waar de behandeling mislukt is (district Ban Lung, Rattanakiri)
2. Pv diagnostische bevestiging (microscopie en qPCR)
3. Overdracht van patiënten naar het Ban Lung-ziekenhuis voor een klinische follow-up van 7 dagen
4. Bloedafname gevolgd door CQ-toediening
5. Parasietenklaring en follow-up van CQ-concentratie in volbloed gedurende 7 dagen.
6. Follow-up van parasitemie gedurende 2 maanden met patiënten die gedurende de hele studie in Ban Lung verblijven om er zeker van te zijn dat er geen herinfectie optreedt (Ban Lung is een gebied zonder overdracht).
7. Ex vivo geneesmiddelgevoeligheidstest van P. vivax-isolaten en na eventuele heropflakkering/terugval.
8. Genotyperingsanalyse van parasieten op dag 0 en na eventuele heropflakkering/terugval.

Onderzoeksopzet

De studie zal worden uitgevoerd in het district Ban Lung (provincie Rattanakir, Cambodja) tussen april 2014 en december 2014. Deze onderzoekslocatie (Rattanakiri) is gekozen op basis van relatief hoge meldingen van mislukte behandelingen bij CQ. In de dorpen in het Ban Lung-district zullen alle met P. vivax mono-geïnfecteerde volwassen patiënten die behandeling zoeken op gemeenschapsniveau (VMW en gezondheidscentra) worden aangeboden om deel te nemen aan het onderzoek

De berekening van de steekproefomvang was gebaseerd op het aanpakken van het primaire doel van het identificeren van een echt resistentiefenotype tegen CQ. Daarom is een minimum van 50 patiënten vereist en idealiter verhogen ongeveer 100 patiënten de kans op het detecteren van resistente parasieten.

Alle in aanmerking komende deelnemers zullen worden benaderd door het onderzoekspersoneel en informatie over de doelstellingen van het onderzoek zal worden toegelicht. Geïnformeerde toestemming zal van elke deelnemer worden verkregen vóór opname.

Alle met P. vivax mono-geïnfecteerde patiënten die op de onderzoekslocaties zijn geïdentificeerd, zullen worden opgenomen.

Het personeel dat betrokken is bij dit onderzoek zal bestaan ​​uit wetenschappers en technici van CNM en IPC. Extra medewerkers (referentieziekenhuis, gezondheidscentra en VMW-medewerkers in de provincie Rattanakiri) zullen bij het project worden betrokken.

Dorpen in het district Ban Lung waar overdracht van P. vivax plaatsvindt, zullen worden geselecteerd. Patiënten die behandeling zoeken uit die dorpen (VMW en Health canters) zullen worden getest op malaria-infectie door RDT en elke niet-P. falciparum geïnfecteerde patiënt zal worden aangeboden om deel te nemen aan het onderzoek. Gevallen van Falciparum-malaria zullen worden beheerd door VMW en gezondheidscentra, zoals gewoonlijk volgens de Cambodjaanse nationale richtlijnen

Na het verkrijgen van geïnformeerde toestemming zullen de patiënten worden ingeschreven in het onderzoek en zullen er twee groepen worden samengesteld:

1. een controlegroep van patiënten die in hun dorp verblijven en
2. een groep werd overgebracht naar het Banlung-ziekenhuis.

Vervolgens worden 3 x 5 ml-ACD-buizen met veneus bloed verzameld voordat CQ aan patiënten wordt gegeven.

Voor de controlegroep zal parasitemie worden gevolgd op Dag 3, D7, D14, D28 en D42 D49, D56 en D60 volgens het WHO-protocol, met behulp van met een vingerprik afgenomen bloed.

Voor de onderzoeksgroep zullen patiënten worden gevolgd door een vingerprik voor parasietenklaring en CQ-concentratiemetingen om de 8 uur gedurende ten minste 3 dagen tot volledige parasietklaring (bepaald door twee opeenvolgende negatieve resultaten in microscopie en qPCR). Parasitemie en CQ-concentratie worden dagelijks gedurende 7 dagen met een vingerprik bepaald.

Om er zeker van te zijn dat de patiënten niet opnieuw geïnfecteerd raken, verblijven ze gedurende 2 maanden in Ban Lung-accommodatie met elke 48 uur vingerprikken om elke toename van parasietmie tijdens het onderzoek op te sporen, terwijl de controlegroep in hun dorp blijft waar herinfectie mogelijk is. voorkomen.

Als heropflakkering wordt waargenomen, worden patiënten opnieuw opgenomen in het Ban Lung-ziekenhuis en wordt hetzelfde protocol opnieuw uitgevoerd.

Een ex vivo geneesmiddelgevoeligheidstest van de P. vivax-isolaten zal ofwel rechtstreeks uit de bloedmonsters ofwel na cryopreservatie worden uitgevoerd. In beide gevallen omvat de test de invasie van vers toegevoegde reticulocyten in de P. vivax-isolaten.

De reticulocyten die voor dit werk worden gebruikt, zullen worden verkregen uit navelstrengbloed dat is verkregen via de afdeling gynaecologie/verloskunde van het ziekenhuis van Calmette (Pr Kruy Leang Sim), volgens de overeenkomst tussen het IPC en het ziekenhuis van Calmette. Navelstrengbloed zal regelmatig aan IPC worden geleverd, drie keer per week, 5 tot 7 ml per ACD-buisje, 5 buisjes per dag, als het aantal geboorten dit toelaat. ABO-bloedgroep, hemoglobine-elektroforese, G6PD-enzymactiviteit en Duffy-status van het bloed zullen worden bepaald voordat reticulocyten worden gebruikt voor invasie en kweek van P. vivax.

Gegevens worden ingevoerd en verwerkt met behulp van Microsoft Excel. Parasitemie zal direct gecorreleerd zijn met de CQ-concentratie in het bloed en zal het mogelijk maken de parasieten te categoriseren volgens de helling van hun klaringstijd en hun gevoeligheid voor CQ.

Statistische analyse zal worden uitgevoerd wanneer dit nodig is om significante effecten op te sporen.