Bewertung der Chloroquin-Resistenz von Plasmodium Vivax in Kambodscha: (CRePViCam)

Um den Resistenzphänotyp von P. vivax gegenüber CQ zu beurteilen, umfasst die Methodik die folgenden Schritte:

1. Einbeziehung von P.vivax-monoinfizierten Patienten aus Dörfern in Gebieten, in denen Behandlungsversagen gemeldet wurde (Bezirk Ban Lung, Rattanakiri)
2. Pv-Diagnosebestätigung (Mikroskopie und qPCR)
3. Überführung der Patienten in das Ban-Lung-Krankenhaus für eine 7-tägige klinische Nachuntersuchung
4. Blutentnahme, gefolgt von CQ-Verabreichung
5. Parasitenbeseitigung und Nachverfolgung der CQ-Konzentration im Vollblut während 7 Tagen.
6. Nachbeobachtung der Parasitämie über einen Zeitraum von zwei Monaten, wobei die Patienten während der gesamten Studie in Ban Lung bleiben, um sicherzustellen, dass es nicht zu einer erneuten Infektion kommt (Ban Lung ist ein Gebiet ohne Übertragung).
7. Ex-vivo-Arzneimittelempfindlichkeitstest von P. vivax-Isolaten und nach etwaigen Rezidiven/Rückfällen.
8. Genotypisierungsanalyse der Parasiten am Tag 0 und nach einem eventuellen Wiederauftreten/Rückfall.

Forschungsdesign

Die Studie wird zwischen April 2014 und Dezember 2014 im Distrikt Ban Lung (Provinz Rattanakir, Kambodscha) durchgeführt. Dieser Forschungsstandort (Rattanakiri) wurde aufgrund relativ hoher Berichte über Behandlungsversagen bei CQ ausgewählt. In Dörfern des Distrikts Ban Lung wird allen mit P. vivax monoinfizierten erwachsenen Patienten, die eine Behandlung auf Gemeindeebene (VMW und Gesundheitszentren) suchen, die Teilnahme an der Studie angeboten

Die Berechnung der Stichprobengröße basierte auf dem primären Ziel, einen echten Resistenzphänotyp gegen CQ zu identifizieren. Daher sind mindestens 50 Patienten erforderlich und im Idealfall erhöhen etwa 100 Patienten die Wahrscheinlichkeit, resistente Parasiten zu entdecken.

Alle teilnahmeberechtigten Teilnehmer werden vom Studienpersonal angesprochen und über die Ziele der Studie informiert. Vor der Aufnahme wird von jedem Teilnehmer eine Einverständniserklärung eingeholt.

Alle in den Studienzentren identifizierten monoinfizierten Patienten mit P. vivax werden eingeschlossen.

Das an dieser Forschungsstudie beteiligte Personal besteht aus Wissenschaftlern und Technikern von CNM und IPC. Weitere Mitarbeiter (Referenzkrankenhaus, Gesundheitszentren und VMW-Mitarbeiter in der Provinz Rattanakiri) werden an dem Projekt beteiligt sein.

Es werden Dörfer im Distrikt Ban Lung ausgewählt, in denen eine Übertragung von P. vivax stattfindet. Patienten, die in diesen Dörfern (VMW und Health Canters) eine Behandlung suchen, werden durch RDT und alle Nicht-P.-Patienten auf eine Malariainfektion getestet. Falciparum-infizierten Patienten wird die Teilnahme an der Studie angeboten. Fälle von Falciparum-Malaria werden von VMW und Gesundheitszentren wie üblich gemäß den nationalen Richtlinien Kambodschas behandelt

Nach Erhalt der Einverständniserklärung werden die Patienten in die Studie aufgenommen und es werden zwei Gruppen gebildet:

1. eine Kontrollgruppe von Patienten, die in ihrem Dorf bleiben und
2. Eine Gruppe wurde ins Banlung-Krankenhaus verlegt.

Anschließend werden 3 x 5 ml-ACD-Röhrchen mit venösem Blut entnommen, bevor den Patienten CQ verabreicht wird.

Bei der Kontrollgruppe wird die Parasitämie an Tag 3, Tag 7, Tag 14, Tag 28 und Tag 42, Tag 49, Tag 56 und Tag 60 gemäß dem WHO-Protokoll unter Verwendung von Blut aus Fingerabdrücken überwacht.

In der Studiengruppe werden die Patienten mindestens 3 Tage lang alle 8 Stunden mit einem Fingerabdruck zur Parasitenbeseitigung und CQ-Konzentrationsmessungen überwacht, bis die Parasitenbeseitigung abgeschlossen ist (bestimmt durch zwei aufeinanderfolgende negative Ergebnisse in der Mikroskopie und qPCR). Parasitämie und CQ-Konzentration werden 7 Tage lang täglich mittels Fingerabdruck bestimmt.

Um sicherzustellen, dass die Patienten nicht erneut infiziert werden, bleiben sie 2 Monate lang in der Unterkunft in Ban Lung und werden alle 48 Stunden in die Finger gestochen, um eine Zunahme der Parasitämie während der Studie festzustellen, während die Kontrollgruppe in ihrem Dorf bleibt, wo eine erneute Infektion möglich ist geschehen.

Wenn ein Rückfall beobachtet wird, werden die Patienten erneut in das Ban Lung-Krankenhaus aufgenommen und das gleiche Protokoll wird erneut durchgeführt.

Der Ex-vivo-Arzneimittelsensitivitätstest der P. vivax-Isolate wird entweder direkt aus den Blutproben oder nach der Kryokonservierung durchgeführt. In beiden Fällen beinhaltet der Test die Invasion frisch hinzugefügter Retikulozyten in die P. vivax-Isolate.

Die für diese Arbeit verwendeten Retikulozyten werden gemäß der Vereinbarung zwischen IPC und dem Calmette-Krankenhaus aus Nabelschnurblut gewonnen, das von der gynäkologischen/geburtshilflichen Abteilung des Calmette-Krankenhauses (Pr Kruy Leang Sim) gewonnen wird. Dem IPC wird regelmäßig Nabelschnurblut zugeführt, dreimal pro Woche, 5 bis 7 ml pro ACD-Röhrchen, 5 Röhrchen pro Tag, wenn die Anzahl der Geburten eine solche Probenahme zulässt. ABO-Blutgruppe, Hämoglobinelektrophorese, G6PD-Enzymaktivität und Duffy-Status des Blutes werden vor der Verwendung von Retikulozyten für die Invasion und Kultur von P. vivax bestimmt.

Die Dateneingabe und -verarbeitung erfolgt mit Microsoft Excel. Parasitämie steht in direktem Zusammenhang mit der CQ-Konzentration im Blut und ermöglicht die Kategorisierung der Parasiten nach der Steigung ihrer Clearance-Zeit und ihrer Empfindlichkeit gegenüber CQ.

Bei Bedarf wird eine statistische Analyse durchgeführt, um signifikante Auswirkungen festzustellen.