Hodnocení rezistence k chlorochinu Plasmodium Vivax v Kambodži: (CRePViCam)

Aby bylo možné posoudit fenotyp rezistence P. vivax vůči CQ, bude metodika zahrnovat následující kroky:

1. Zařazení pacientů monoinfikovaných P.vivax z vesnic v oblasti hlášené selháním léčby (okres Ban Lung, Rattanakiri)
2. Pv diagnostické potvrzení (mikroskopie a qPCR)
3. Převoz pacientů do nemocnice Ban Lung na 7denní klinické sledování
4. Odběr krve s následným podáním CQ
5. Sledování clearance parazitů a koncentrace CQ v plné krvi po dobu 7 dnů.
6. Sledování parazitémie po dobu 2 měsíců s pacienty pobývajícími v Ban Lung během celé studie, aby se zajistilo, že nedojde k opětovné infekci (Ban Lung je oblast bez přenosu).
7. Ex vivo test citlivosti izolátů P. vivax na léčivo a po jakékoli rekultivaci/relapsu, pokud existuje.
8. Genotypizační analýza parazitů v den 0 a po jakékoli recrudescenci/relapsu, pokud existuje.

Design výzkumu

Studie bude provedena v okrese Ban Lung (provincie Rattanakir, Kambodža) mezi dubnem 2014 a prosincem 2014. Toto výzkumné místo (Rattanakiri) je vybráno na základě poměrně vysokého počtu zpráv o selhání léčby CQ. V okresních vesnicích Ban Lung bude všem monoinfikovaným dospělým pacientům P. vivax, kteří hledají léčbu na komunitní úrovni (VMW a zdravotní střediska), nabídnuta účast na studii.

Výpočet velikosti vzorku byl založen na řešení primárního cíle identifikace fenotypu skutečné rezistence vůči CQ. Proto je zapotřebí minimálně 50 pacientů a v ideálním případě asi 100 pacientů zvýší pravděpodobnost detekce rezistentních parazitů.

Všichni způsobilí účastníci budou osloveni zaměstnanci studie a budou jim vysvětleny informace o cílech studie. Před zařazením bude od každého účastníka získán informovaný souhlas.

Budou zahrnuti všichni monoinfikovaní pacienti P. vivax identifikovaní v místech studie.

Personál zapojený do této výzkumné studie bude složen z vědců a techniků z CNM a IPC. Do projektu budou zapojeni další spolupracovníci (referenční nemocnice, zdravotní střediska a zaměstnanci VMW v provincii Rattanakiri).

Budou vybrány vesnice v okrese Ban Lung, kde dochází k přenosu P. vivax. Pacienti hledající léčbu z těchto vesnic (VMW a Health canters) budou testováni na infekci malárií pomocí RDT a všech non-P. falciparum infikovaný pacient bude nabídnut k účasti na studii. Případy malárie Falciparum budou řízeny VMW a zdravotními centry jako obvykle podle kambodžských národních směrnic

Po získání informovaného souhlasu budou pacienti zařazeni do studie a budou vytvořeny dvě skupiny:

1. kontrolní skupina pacientů pobývajících ve své obci a
2. skupina převezena do nemocnice Banlung.

Poté budou odebrány 3 x 5ml-ACD zkumavky žilní krve před podáním CQ pacientům.

U kontrolní skupiny bude parazitémie sledována v den 3, D7, D14, D28 a D42 D49, D56 a D60 podle protokolu WHO s použitím krve odebrané z prstu.

U studijní skupiny budou pacienti sledováni píchnutím do prstu za účelem odstranění parazitů a měření koncentrace CQ každých 8 hodin po dobu alespoň 3 dnů až do úplného odstranění parazitů (určeno dvěma po sobě jdoucími negativními výsledky v mikroskopii a qPCR). Parazitémie a koncentrace CQ budou stanoveny denně pomocí vpichu prstu po dobu 7 dnů.

Aby se zajistilo, že pacienti nebudou znovu infikováni, zůstanou v ubytování Ban Lung po dobu 2 měsíců s opichováním každých 48 hodin, aby během studie odhalili jakýkoli nárůst parazitémie, zatímco kontrolní skupina zůstane ve své vesnici, kde může dojít k opětovné infekci. nastat.

Pokud je pozorována rerudescence, pacienti budou poté znovu přijati do nemocnice Ban Lung a bude znovu proveden stejný protokol.

Ex vivo test citlivosti izolátů P. vivax na léčivo bude proveden buď přímo ze vzorků krve, nebo po kryokonzervaci. V obou případech bude test zahrnovat invazi čerstvě přidaných retikulocytů do izolátů P. vivax.

Retikulocyty použité pro tuto práci budou získány z pupečníkové krve získané na gynekologicko-porodnickém oddělení nemocnice v Calmette (Pr Kruy Leang Sim), podle dohody mezi IPC a nemocnicí Calmette. Pupečníková krev bude do IPC dodávána pravidelně, třikrát týdně, 5 až 7 ml na zkumavku ACD, 5 zkumavek denně, pokud to počet narození umožňuje takový odběr. Před použitím retikulocytů pro invazi a kultivaci P. vivax bude stanovena krevní skupina ABO, elektroforéza hemoglobinu, aktivita enzymu G6PD a Duffyho stav krve.

Data budou zadána a zpracována pomocí Microsoft Excel. Parazitémie bude přímo korelovat s koncentrací CQ v krvi a umožní kategorizovat parazity podle sklonu doby jejich clearance a jejich citlivosti na CQ.

V případě potřeby bude provedena statistická analýza k odhalení jakýchkoli významných účinků.