Ocena oporności Plasmodium Vivax na chlorochinę w Kambodży: (CRePViCam)

Aby ocenić fenotyp oporności P. vivax na CQ, metodologia będzie obejmować następujące kroki:

1. Włączenie pacjentów z monoinfekcją P.vivax z wiosek na obszarze, na którym odnotowano niepowodzenie leczenia (dystrykt Ban Lung, Rattanakiri)
2. Potwierdzenie diagnostyki Pv (mikroskopia i qPCR)
3. Przeniesienie pacjentów do szpitala Ban Lung na 7-dniową obserwację kliniczną
4. Pobranie krwi, a następnie podanie CQ
5. Kontrola usuwania pasożytów i stężenia CQ w pełnej krwi przez 7 dni.
6. Obserwacja parazytemii przez 2 miesiące z pacjentami przebywającymi w Ban Lung podczas całego badania, aby upewnić się, że nie nastąpi ponowna infekcja (Ban Lung to obszar zakazu przenoszenia).
7. Test wrażliwości na leki ex vivo izolatów P. vivax i po ewentualnym nawrocie/nawrocie.
8. Analiza genotypowa pasożytów w dniu 0 i po ewentualnym nawrocie/nawrocie.

Projekt badawczy

Badanie zostanie przeprowadzone w dystrykcie Ban Lung (prowincja Rattanakir, Kambodża) w okresie od kwietnia 2014 r. do grudnia 2014 r. To miejsce badawcze (Rattanakiri) zostało wybrane na podstawie stosunkowo dużej liczby zgłoszeń niepowodzeń leczenia CQ. W wioskach dystryktu Ban Lung wszystkim dorosłym pacjentom zarażonym pojedynczo P. vivax poszukującym leczenia na poziomie społeczności (VMW i ośrodki zdrowia) zostanie zaoferowany udział w badaniu

Obliczenie wielkości próby opierało się na uwzględnieniu głównego celu, jakim było zidentyfikowanie prawdziwego fenotypu oporności na CQ. Dlatego wymagane jest minimum 50 pacjentów, a najlepiej około 100 pacjentów zwiększy prawdopodobieństwo wykrycia opornych pasożytów.

Pracownicy badania skontaktują się ze wszystkimi kwalifikującymi się uczestnikami i wyjaśnią informacje o celach badania. Świadoma zgoda zostanie uzyskana od każdego uczestnika przed włączeniem.

Uwzględnieni zostaną wszyscy pacjenci z monoinfekcją P. vivax zidentyfikowani w ośrodkach badawczych.

Personel zaangażowany w to badanie będzie się składał z naukowców i techników z CNM i IPC. Dodatkowi współpracownicy (szpital referencyjny, ośrodki zdrowia i personel VMW w prowincji Rattanakiri) będą zaangażowani w projekt.

Wybrane zostaną wioski w dystrykcie Ban Lung, w których występuje transmisja P. vivax. Pacjenci zgłaszający się na leczenie z tych wiosek (kantery VMW i Health) zostaną przebadani pod kątem zakażenia malarią przez RDT i wszelkie inne niż P. falciparum pacjentowi zaproponuje się udział w badaniu. Przypadki malarii Falciparum będą zarządzane przez VMW i ośrodki zdrowia, jak zwykle, zgodnie z krajowymi wytycznymi Kambodży

Po uzyskaniu świadomej zgody pacjenci zostaną włączeni do badania i utworzone zostaną dwie grupy:

1. grupa kontrolna pacjentów przebywających w swojej wsi i
2. grupa przeniesiona do szpitala Banlung.

Następnie, przed podaniem CQ pacjentom, zostaną pobrane 3 x 5 ml-ACD probówki z krwią żylną.

W przypadku grupy kontrolnej parazytemia będzie obserwowana w dniach 3, 7, 14, 28 i 42, 49, 56 i 60 zgodnie z protokołem WHO, przy użyciu krwi pobranej z opuszka palca.

W przypadku grupy badanej pacjenci będą monitorowani przez nakłucie palca w celu usunięcia pasożytów i pomiary stężenia CQ co 8 godzin przez co najmniej 3 dni, aż do całkowitego usunięcia pasożyta (określonego przez dwa kolejne negatywne wyniki mikroskopii i qPCR). Stężenie parazytemii i CQ będzie oznaczane codziennie za pomocą nakłucia palca przez 7 dni.

Aby upewnić się, że pacjenci nie zostaną ponownie zarażeni, pozostaną oni w kwaterach Ban Lung przez 2 miesiące z pobieraniem odcisków palców co 48 godzin w celu wykrycia wzrostu parazytemii podczas badania, podczas gdy grupa kontrolna pozostanie w swojej wiosce, gdzie może dojść do ponownego zakażenia zdarzać się.

Jeśli zaobserwuje się nawrót, pacjenci zostaną ponownie przyjęci do szpitala Ban Lung i ponownie zostanie przeprowadzony ten sam protokół.

Test wrażliwości na leki ex vivo izolatów P. vivax zostanie przeprowadzony bezpośrednio z próbek krwi lub po kriokonserwacji. W obu przypadkach test będzie obejmował inwazję świeżo dodanych retikulocytów do izolatów P. vivax.

Retikulocyty użyte do tej pracy zostaną pozyskane z krwi pępowinowej pozyskanej na oddziale ginekologiczno-położniczym szpitala Calmette (Pr Kruy Leang Sim), zgodnie z umową między IPC a szpitalem Calmette. Krew pępowinowa będzie dostarczana do IPC regularnie, trzy razy w tygodniu, 5 do 7 ml na probówkę ACD, 5 probówek dziennie, jeśli liczba urodzeń na to pozwala. Grupa krwi ABO, elektroforeza hemoglobiny, aktywność enzymu G6PD i status Duffy krwi zostaną określone przed użyciem retikulocytów do inwazji i hodowli P. vivax.

Dane będą wprowadzane i przetwarzane przy użyciu programu Microsoft Excel. Parazytemia będzie bezpośrednio skorelowana ze stężeniem CQ we krwi i pozwoli na kategoryzację pasożytów według nachylenia ich czasu klirensu i ich wrażliwości na CQ.

Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona, gdy będzie to wymagane w celu wykrycia jakichkolwiek znaczących skutków.