Valutazione della resistenza alla clorochina da Plasmodium Vivax in Cambogia: (CRePViCam)

Al fine di valutare il fenotipo di resistenza di P. vivax a CQ, la metodologia prevederà i seguenti passaggi:

1. Inclusione di pazienti mono-infetti da P.vivax provenienti dai villaggi nell'area segnalata con fallimento del trattamento (distretto di Ban Lung, Rattanakiri)
2. Conferma diagnostica Pv (microscopia e qPCR)
3. Trasferimento dei pazienti all'ospedale Ban Lung per un follow-up clinico di 7 giorni
4. Raccolta del sangue seguita dalla somministrazione di CQ
5. Controllo della clearance del parassita e della concentrazione di CQ nel sangue intero per 7 giorni.
6. Follow-up della parassitemia per 2 mesi con pazienti che soggiornano a Ban Lung durante l'intero studio per assicurarsi che non si verifichino re-infezioni (Ban Lung è un'area senza trasmissione).
7. Saggio di sensibilità ai farmaci ex vivo degli isolati di P. vivax e dopo qualsiasi recrudescenza/ricaduta, se presente.
8. Analisi di genotipizzazione dei parassiti al Giorno 0 e dopo ogni eventuale recrudescenza/recidiva.

Progetto di ricerca

Lo studio sarà condotto nel distretto di Ban Lung (provincia di Rattanakir, Cambogia) tra aprile 2014 e dicembre 2014. Questo sito di ricerca (Rattanakiri) viene scelto sulla base di segnalazioni relativamente elevate di fallimenti terapeutici a CQ. Nei villaggi del distretto di Ban Lung, a tutti i pazienti adulti mono-infetti da P. vivax in cerca di cure a livello comunitario (VMW e centri sanitari) verrà offerto di partecipare allo studio

Il calcolo della dimensione del campione si è basato sull'affrontare l'obiettivo primario di identificare un vero fenotipo di resistenza al CQ. Pertanto è richiesto un minimo di 50 pazienti e, idealmente, circa 100 pazienti aumenteranno la probabilità di rilevare parassiti resistenti.

Tutti i partecipanti idonei saranno contattati dal personale dello studio e verranno spiegate le informazioni sugli obiettivi dello studio. Il consenso informato sarà ottenuto da ciascun partecipante prima dell'inclusione.

Saranno inclusi tutti i pazienti mono-infetti da P. vivax identificati nei siti dello studio.

Il personale coinvolto in questo studio di ricerca sarà composto da scienziati e tecnici del CNM e dell'IPC. Ulteriori collaboratori (ospedale di riferimento, centri sanitari e personale VMW nella provincia di Rattanakiri) saranno coinvolti nel progetto.

Saranno selezionati i villaggi nel distretto di Ban Lung dove si verifica la trasmissione di P. vivax. I pazienti in cerca di cure da quei villaggi (VMW e canter sanitari) saranno testati per l'infezione da malaria mediante RDT e qualsiasi infezione non P. falciparum verrà offerto di partecipare allo studio. I casi di malaria Falciparum saranno gestiti dal VMW e dai centri sanitari come di consueto secondo le linee guida nazionali cambogiane

Dopo aver ottenuto il consenso informato, i pazienti verranno arruolati nello studio e verranno costituiti due gruppi:

1. un gruppo di controllo di pazienti che soggiornano nel loro villaggio e
2. un gruppo trasferito all'ospedale di Banlung.

Quindi, verranno raccolte 3 provette da 5 ml-ACD di sangue venoso prima di dare CQ ai pazienti.

Per il gruppo di controllo, la parassitemia sarà seguita al Day3, D7, D14, D28 e D42 D49, D56 e D60 secondo il protocollo dell'OMS, utilizzando sangue prelevato dal polpastrello.

Per il gruppo di studio, i pazienti saranno seguiti da puntura del dito per l'eliminazione dei parassiti e misure di concentrazione di CQ ogni 8 ore per almeno 3 giorni fino alla completa eliminazione del parassita (determinata da due risultati negativi consecutivi in ​​​​microscopia e qPCR). La parassitemia e la concentrazione di CQ saranno determinate giornalmente utilizzando la puntura del dito per 7 giorni.

Per assicurarsi che i pazienti non vengano reinfettati, rimarranno nella struttura di Ban Lung per 2 mesi con punture ogni 48 ore per rilevare qualsiasi aumento della parassitemia durante lo studio, mentre il gruppo di controllo rimarrà nel loro villaggio dove la reinfezione può verificarsi.

Se si osserva una recrudescenza, i pazienti verranno quindi riammessi nell'ospedale Ban Lung e verrà eseguito nuovamente lo stesso protocollo.

L'analisi ex vivo della sensibilità ai farmaci degli isolati di P. vivax sarà eseguita direttamente dai campioni di sangue o dopo crioconservazione. In entrambi i casi, il saggio comporterà l'invasione di reticolociti appena aggiunti agli isolati di P. vivax.

I reticolociti utilizzati per questo lavoro saranno ottenuti da sangue del cordone ombelicale acquisito attraverso il reparto di ginecologia/ostetricia dell'ospedale di Calmette (Pr Kruy Leang Sim), secondo l'accordo tra l'IPC e l'ospedale di Calmette. Il sangue cordonale verrà fornito regolarmente all'IPC, tre volte alla settimana, da 5 a 7 ml per provetta ACD, 5 provette al giorno, se il numero di nascite lo consente. Il gruppo sanguigno ABO, l'elettroforesi dell'emoglobina, l'attività dell'enzima G6PD e lo stato Duffy del sangue saranno determinati prima di utilizzare i reticolociti per l'invasione e la coltura di P. vivax.

I dati verranno inseriti ed elaborati utilizzando Microsoft Excel. La parassitemia sarà direttamente correlata alla concentrazione di CQ nel sangue e permetterà di classificare i parassiti in base alla pendenza del loro tempo di clearance e alla loro sensibilità al CQ.

L'analisi statistica verrà eseguita quando necessario per rilevare eventuali effetti significativi.