Vurdering av Plasmodium Vivax klorokinresistens i Kambodsja: (CRePViCam)

For å vurdere resistensfenotypen til P. vivax mot CQ, vil metodikken innebære følgende trinn:

1. Inkludering av P.vivax mono-infiserte pasienter fra landsbyer i behandlingssvikt-rapportert område (Ban Lung-distriktet, Rattanakiri)
2. Pv diagnostisk bekreftelse (mikroskopi og qPCR)
3. Overføring av pasienter til Ban Lung sykehus for 7 dagers klinisk oppfølging
4. Blodsamling etterfulgt av CQ-administrasjon
5. Parasittclearance og fullblod CQ-konsentrasjonsoppfølging i løpet av 7 dager.
6. Parasitemioppfølging i løpet av 2 måneder med pasienter som oppholder seg i Ban Lung under hele studien for å sikre at ingen re-infeksjon oppstår (Ban Lung er et område uten overføring).
7. Ex vivo legemiddelfølsomhetsanalyse av P. vivax-isolater og etter eventuell gjengang/tilbakefall.
8. Genotypingsanalyse av parasitter på dag 0 og etter eventuell gjengang/tilbakefall.

Forskningsdesign

Studien vil bli utført i Ban Lung-distriktet (Rattanakir-provinsen, Kambodsja) mellom april 2014 og desember 2014. Dette forskningsstedet (Rattanakiri) er valgt på grunnlag av relativt høye rapporter om behandlingssvikt til CQ. I landsbyene i Ban Lung-distriktet vil alle P. vivax mono-infiserte voksne pasienter som søker behandling på samfunnsnivå (VMW og helsesentre) bli tilbudt å delta i studien

Prøvestørrelsesberegningen var basert på å adressere det primære målet om å identifisere en ekte resistensfenotype mot CQ. Derfor kreves minimum 50 pasienter og ideelt sett vil rundt 100 pasienter øke sannsynligheten for å oppdage resistente parasitter.

Alle kvalifiserte deltakere vil bli kontaktet av studiepersonalet og informasjon om målene for studien vil bli forklart. Informert samtykke vil bli innhentet fra hver deltaker før inkludering.

Alle P. vivax mono-infiserte pasienter identifisert på studiestedene vil bli inkludert.

Ansatte som er involvert i denne forskningsstudien vil være sammensatt av forskere og teknikere fra CNM og IPC. Ytterligere samarbeidspartnere (referansesykehus, helsesentre og VMW-ansatte i Rattanakiri-provinsen) vil være involvert i prosjektet.

Landsbyer i Ban Lung-distriktet der P. vivax-overføring forekommer vil bli valgt. Pasienter som søker behandling fra disse landsbyene (VMW og Health canters) vil bli testet for malariainfeksjon av RDT og eventuelle ikke-P. falciparum-infiserte pasienter vil bli tilbudt å delta i studien. Falciparum malariatilfeller vil bli behandlet av VMW og helsesentre som vanligvis i henhold til kambodsjanske nasjonale retningslinjer

Etter å ha innhentet informert samtykke, vil pasientene bli registrert i studien og to grupper vil bli satt sammen:

1. en kontrollgruppe av pasienter som bor i landsbyen deres og
2. en gruppe overført til Banlung sykehus.

Deretter vil 3 x 5 ml-ACD-rør med veneblod samles opp før det gis CQ til pasientene.

For kontrollgruppen vil parasittmi følges på Dag3, D7, D14, D28 og D42 D49, D56 og D60 i henhold til WHOs protokoll, ved bruk av blod fra fingerstikk.

For studiegruppen vil pasientene bli fulgt med fingerstikk for parasittclearing og CQ-konsentrasjonsmåler hver 8. time i minst 3 dager inntil fullstendig parasittclearance (bestemt av to påfølgende negative resultater i mikroskopi og qPCR). Parasitemi og CQ-konsentrasjon vil bli bestemt daglig med fingerstikk i 7 dager.

For å sikre at pasientene ikke blir re-infisert, vil de bo i Ban Lung-innkvartering i 2 måneder med fingerstikk hver 48. time for å oppdage enhver økning i parasittmia under studien, mens kontrollgruppen vil bo i landsbyen deres der re-infeksjon kan skje.

Hvis gjenoppblomstring observeres, vil pasienter deretter bli innlagt på nytt på Ban Lung sykehus og samme protokoll vil bli utført på nytt.

Ex vivo legemiddelsensitivitetsanalyse av P. vivax-isolatene vil bli utført enten direkte fra blodprøvene eller etter kryokonservering. I begge tilfeller vil analysen involvere invasjon av nytilsatte retikulocytter til P. vivax-isolatene.

Retikulocyttene som brukes til dette arbeidet vil bli hentet fra navlestrengsblod anskaffet gjennom gynekologi/obstetrisk avdeling ved Calmette sykehus (Pr Kruy Leang Sim), i henhold til avtalen mellom IPC og Calmette sykehus. Navlestrengsblod vil bli tilført regelmessig til IPC, tre ganger i uken, 5 til 7 ml per ACD-rør, 5 rør per dag, dersom antall fødsel tillater slik prøvetaking. ABO-blodgruppe, hemoglobinelektroforese, G6PD-enzymaktivitet og Duffy-status i blodet vil bli bestemt før bruk av retikulocytter for P. vivax invasjon og kultur.

Data vil bli lagt inn og behandlet med Microsoft Excel. Parasitemia vil være direkte korrelert til CQ-konsentrasjonen i blod og vil tillate å kategorisere parasittene i henhold til helningen på deres klaringstid og deres følsomhet for CQ.

Statistisk analyse vil bli utført når det er nødvendig for å oppdage eventuelle signifikante effekter.