Nenän LPS-haaste terveillä vapaaehtoisilla

TUTKIMUKSEN SUUNNITTELU JA MENETELMÄT Tämä on yhden keskuksen tutkimus, joka suoritetaan Imperial Clinical Respiratory Research Unitissa (ICRRU) St Mary's Hospitalissa Lontoossa Paddingtonissa.

REKRYTOINTI Tutkimukseen rekrytoidaan yhteensä 15 tervettä osallistujaa.

OPINTOKÄYNNIT Tutkimukseen sisältyy yhteensä 11 avohoitokäyntiä. Seulontakäynti on ensimmäinen käynti, jossa tutkimuksesta keskustellaan osallistujan kanssa ja PI tai hänen nimeämänsä saa kirjallisen tietoisen suostumuksen. Tämä tehdään ennen tutkimukseen liittyvien toimenpiteiden suorittamista. Osallistujalla on oltava tutkimustietolomake vähintään 24 tuntia ennen vierailua.

Vierailulla kerätään demografisia tietoja, pituutta ja painoa, lääkärin suorittamaa fyysistä tarkastusta, sairaushistoriaa, elintoimintoja, ruumiinlämpöä, 12-kytkentäistä EKG:tä, laboratorioarvioita (turvaverit), virtsan lääkkeet, väärinkäyttötestit ja raskaustestit naisille. Osallistujaa pyydetään myös ilmoittamaan mahdollisten nenäoireiden olemassaolo täyttämällä muokattu nenäoireiden kokonaispistemäärä ja suorittamalla nenän sisäänhengitysvirtauksen huipputesti (PNIF).

Osallistujia pyydetään palaamaan uusille opintovierailuille, jos he ovat kelvollisia. Osallistujille annetaan 4 eri annosta LPS:ää ja lumelääkettä satunnaistetulla tavalla.

Hoitojaksoja on yhteensä 5. Jokainen hoitojakso koostuu 11 tunnin käynnistä ensimmäisenä päivänä ja 20 minuutin käynnistä seuraavana päivänä. Jokaisen hoitojakson käynnin välillä on yhteensä 12-28 päivän tauko.

Hoitojakson käyntien aikana tutkimukseen osallistuneet käyvät läpi seuraavat tutkimustoimenpiteet:

1. Huuhtele nenä molempiin sieraimiin ja hävitä ne 5 ml:lla 0,9 % suolaliuosta nenän puhdistamiseksi ennen nenän LPS-altistusta.
2. Nenäaltistus LPS:llä (plasebo, 1, 10, 30 tai 100 µg sierainta kohti)
3. Nasosorptio (oikea sierain) -30m, +30m, +1h, sitten tunnin välein klo 10h ja 24h
4. Nenähuuhtelu (vasen sierain) -30m, +2h, +4h, +8h, +24h
5. Nenän kaapiminen (vasen sieraimeen) -30m, +3h, +6h, +24h
6. Muokattu nenäoireiden kokonaispistemäärä (TNSS) kohdissa -30 m, +30 m, +1 h, sitten tunnin välein 10 tuntiin ja 24 tuntiin
7. Nenän sisäänhengityksen huippunopeus (PNIF) -30 m, +2h, +4h, +8h, 24h
8. Systeemiset haittatapahtumat
9. Lämpötila (suullinen) -30m, +2h, +4h, +8h
10. Verenpaine ja syke -30 metrissä
11. Hedelmällisessä iässä oleville naisille tehdään raskaustesti.

TUTKIMUKSEN NASAL-MENETELMÄT

1. Nenän pesu (nenähuuhtelu): Nenähuuhtelu nenässä suoritetaan johtamalla pieni määrä suolavettä (suolaliuosta) nenään. Oliivin muotoinen nenäsovitin asetetaan sieraimen sisään. Osallistujaa pyydetään sitten istumaan eteenpäin ja suolavesiliuosta (suolaliuosta) käytetään huuhtelemaan sisään ja ulos nenästä minuutin ajan. Tämä toimenpide suoritetaan molemmilla sieraimella nenän puhdistamiseksi ensimmäisellä tutkimuskäynnillä ja toistetaan sitten vain vasemmassa sieraimessa kullakin hoitokäynnillä.
2. Nenän limakalvon nesteen imeytyminen (nasosorptio tai SAM): Pientä imukykyistä materiaalia, joka näyttää ja tuntuu pehmeältä pehmopaperilta, käytetään kosteuden imemiseen sieraimen sisäpinnalta. Erityinen imukykyinen paperi asetetaan sieraimeen ja jätetään 2 minuutiksi imemään nenän limakalvon nestettä ennen poistamista. Se imee nestettä varovasti, kuten imupaperi. Paperin laittaminen nenään voi kutittaa ja saada silmäsi vedeytymään hieman. Nenäsorptio ei kuitenkaan satu, ja tutkijan menetelmä on osoittautunut hyvin siedetyksi vauvoilla, lapsilla ja aikuisilla. Paperi imee nenänesteen ja monet nenäsolujen tuottamat aineet voidaan sitten erottaa paperista ja mitata laboratoriossa.
3. Nenän raapiminen (nenäkyretti tai Rhinoprobe): Pieni steriili kertakäyttöinen muovinen anturi työnnetään nenään ja painetaan varovasti sieraimen sisäpintaa vasten. 3 tuuman pituisen anturin päässä on pieni kauha, jota tuskin huomaa. Jokaisesta sieraimesta otetaan 24 pientä näytettä (neulanpää, 2 mm kudosta) nenän osasta, jossa hermotarve on heikentynyt epämukavuuden rajoittamiseksi. Tämän näytteen ottaminen ei aiheuta verenvuotoa, mutta saattaa aiheuttaa lievää epämukavuutta ja saattaa silmät vuotaa hieman. Koetin kerää nenäsolut sieraimen pinnalta, jotka lähetetään sitten analysoitavaksi. Tämä menetelmä on tehty monille aikuisille, lapsille ja vauvoille, ja se on ollut erittäin hyvin siedetty.

TILASTOANALYYSI Jokaisesta toimenpiteestä tehdään kuvaileva yhteenveto annoksen ja ajan mukaan käyttämällä asianmukaisia ​​yhteenvetotilastoja. Tarvittaessa vastemuuttujat muunnetaan (esim. log-muunnettu). Geeniekspressiotiedot normalisoidaan talonhoitajageenillä. TNSS lasketaan summaamalla nenän tukos, nenävuoto/rinorrea, nenän polttava/kutina/kiputunto ja aivastelu kullakin aikapisteellä. Oirepisteiden painotetut keskiarvot lasketaan ajanjaksolta 0–10 tuntia.

TNSS, nenän nuuskapaineet, nenäsorptiomittaukset ja nenän naarmuista saadut geeniekspressiotiedot piirretään kukin ajan funktiona, erillinen käyrä jokaiselle kohteelle ja mittaukselle, ja LPS-annos ja lumelääke esitetään erillisillä viivoilla kaavioissa. Yhteenvetotilastot (esim. keskimääräiset +/- 95 %:n luottamusvälit tai mediaani- ja kvartiilialue) nenähuuhtelun ja geeniekspressiotietojen perusteella piirretään annoksen mukaan ajan suhteen.

Korrelaatioita tutkitaan käyttämällä sirontakaavioita seuraaville mittauksille:

• Painotettu tarkoittaa TNSS:ää vs. maksimi TNF-α
• Painotettu tarkoittaa TNSS:ää vs. maksimi IL-8
• Painotettu tarkoittaa TNSS:tä vs. maksimi s-ICAM-1
• Maksimi ICAM-1:n ilmentyminen vs. maksimi TNF-a

Nenän LPS-altistuksen toistettavuus ICAM-1:n ilmentymiselle ja TNF-α:lle tutkitaan käyttämällä seuraavia osajoukkoja:

• Ennakkoannostustiedot kullekin ajanjaksolle tutkiaksesi yksilön sisäistä vaihtelua. Parametri vs. jakso numero piirretään erillisellä rivillä kullekin aiheelle sen selvittämiseksi, onko jaksolla vaikutusta. Box- ja whisker-kaavioita käytetään myös parametrien yhteenvetoon jaksoittain.
• Placebojakson tiedot – Parametri vs. aika piirretään erillisellä rivillä kullekin kohteelle sen selvittämiseksi, onko aikakulun vaikutusta. Laatikko- ja whisker-kaavioita käytetään myös yhteenvedon tekemiseen ajan mittaan.

Box- ja whisker-kaaviot ICAM-1:n ilmentymiselle ja TNF-α:lle sekä annokselle ja ajalle esitetään sen tutkimiseksi, palaavatko nämä mittaukset lähtötasolle 24 tunnin kuluttua.

Voidaan suorittaa lisää tutkivia analyysejä ICAM:n ilmentymisprofiilin karakterisoimiseksi edelleen nenän LPS-altistuksen jälkeen.