Nosowe wyzwanie LPS u zdrowych ochotników

PROJEKT BADANIA I METODOLOGIA Jest to jednoośrodkowe badanie, które zostanie przeprowadzone w Imperial Clinical Respiratory Research Unit (ICRRU) w St Mary's Hospital w London Paddington.

REKRUTACJA Do badania zostanie zrekrutowanych łącznie 15 zdrowych uczestników.

WIZYTY STUDYJNE Badanie obejmie łącznie 11 wizyt ambulatoryjnych. Wizyta przesiewowa jest pierwszą wizytą, podczas której badanie jest omawiane z uczestnikiem, a PI lub osoba przez niego wyznaczona uzyskuje pisemną świadomą zgodę. Odbywa się to przed wykonaniem jakichkolwiek procedur związanych z badaniem. Uczestnik będzie posiadał kartę informacyjną badania przez co najmniej 24 godziny przed wizytą.

Wizyta będzie obejmowała zebranie danych demograficznych, wzrost i wagę, badanie przedmiotowe przez lekarza, wywiad lekarski, parametry życiowe, temperaturę ciała, 12-odprowadzeniowe EKG, ocenę laboratoryjną (pobranie krwi), badanie moczu na obecność narkotyków oraz testy ciążowe dla kobiet. Uczestnik zostanie również poproszony o wskazanie obecności jakichkolwiek objawów nosowych poprzez wypełnienie zmodyfikowanego arkusza oceny całkowitych objawów nosowych i wykonanie testu szczytowego przepływu wdechowego przez nos (PNIF).

Jeśli kwalifikują się, uczestnicy zostaną poproszeni o powrót na dalsze wizyty studyjne. Uczestnicy otrzymają losowo 4 różne dawki LPS i placebo.

Istnieje łącznie 5 okresów leczenia. Każdy okres leczenia składa się z 11 godzinnej wizyty pierwszego dnia i 20 minutowej wizyty następnego dnia. Pomiędzy wizytami w okresie leczenia jest łącznie 12-28 dni przerwy.

Podczas wizyt w okresie leczenia uczestnicy badania zostaną poddani następującym procedurom badawczym:

1. Przepłukać nos do obu nozdrzy i wyrzucić z 5 ml 0,9% soli fizjologicznej w celu oczyszczenia nosa przed prowokacją nosową LPS.
2. Prowokacja donosowa LPS (placebo, 1,10, 30 lub 100µg na nozdrze)
3. Nasosorpcja (prawe nozdrze) przy -30m, +30m, +1h, następnie co godzinę do 10h i 24h
4. Płukanie nosa (lewe nozdrze) na -30m, +2h, +4h, +8h, +24h
5. Wydrapanie nosa (lewe nozdrze) przy -30m, +3h, +6h, +24h
6. Zmodyfikowana ocena całkowitych objawów nosowych (TNSS) przy -30m, +30m, +1h, następnie co godzinę do 10h i 24h
7. Szczytowy przepływ wdechowy przez nos (PNIF) przy -30m, +2h, +4h, +8h, 24h
8. Ogólnoustrojowe zdarzenia niepożądane
9. Temperatura (oralna) przy -30m, +2h, +4h, +8h
10. Ciśnienie krwi i tętno przy -30m
11. U kobiet w wieku rozrodczym zostanie wykonany test ciążowy.

PROCEDURY NOSOWE W BADANIE

1. Płukanie nosa (płukanie nosa): Płukanie nosa w nosie przeprowadza się poprzez wprowadzenie do nosa niewielkiej objętości płynu zawierającego słoną wodę (sól fizjologiczną). Adapter nosowy w kształcie oliwki umieszcza się wewnątrz nozdrza. Uczestnik jest następnie proszony, aby usiadł do przodu, a roztwór słonej wody (sól fizjologiczna) jest używany do płukania nosa i wypłukiwania go przez okres jednej minuty. Ta procedura jest przeprowadzana na obu nozdrzach w celu oczyszczenia nosa podczas pierwszej wizyty studyjnej, a następnie powtarzana tylko na lewym nozdrzu podczas każdej wizyty leczniczej.
2. Wchłanianie płynu przez wyściółkę nosa (nasosorpcja lub SAM): Mały pasek materiału chłonnego, który wygląda i czuje się jak miękka bibułka, zostanie użyty do wchłonięcia wilgoci z wewnętrznej powierzchni nozdrza. Specjalny papier chłonny zostanie umieszczony w nozdrzu i pozostawiony na okres 2 minut, aby wchłonął płyn z wyściółki nosa przed usunięciem, delikatnie zasysając płyn jak bibuła. Wkładanie papieru do nosa może łaskotać i powodować lekkie łzawienie oczu. Jednak nosorpcja nie boli, a metoda badaczy okazała się dobrze tolerowana przez niemowlęta, dzieci i dorosłych. Papier absorbuje płyn nosowy, a wiele substancji wytwarzanych przez komórki nosowe można następnie wyekstrahować z bibuły i zmierzyć w laboratorium.
3. Zeskrobanie nosa (kiretaż nosa lub Rhinoprobe): Mała sterylna plastikowa sonda jednorazowego użytku zostanie włożona do nosa i delikatnie dociśnięta do wewnętrznej powierzchni wyściółki nozdrza. Sonda o długości 3 cali ma na końcu małą miarkę, którą ledwo widać. Z każdego nozdrza zostaną pobrane 24 małe próbki (piłka od szpilki, 2 mm tkanki) z części nosa, która ma zmniejszone ukrwienie nerwów, aby ograniczyć dyskomfort. Pobranie tej próbki nie powoduje krwawienia, ale może powodować lekki dyskomfort i lekkie łzawienie oczu. Sonda pobierze komórki nosowe z powierzchni nozdrza, które następnie zostaną przesłane do analizy. Ta metoda została zastosowana u wielu dorosłych, dzieci i niemowląt i była bardzo dobrze tolerowana.

ANALIZA STATYSTYCZNA Każdy z pomiarów zostanie podsumowany opisowo według dawki i czasu przy użyciu odpowiednich statystyk podsumowujących. W stosownych przypadkach zmienne odpowiedzi zostaną przekształcone (np. przekształcony logarytmicznie). Dane dotyczące ekspresji genów zostaną znormalizowane przez gen gospodyni domowej. TNSS zostanie obliczony poprzez zsumowanie wyników niedrożności nosa, wydzieliny z nosa/wycieku z nosa, pieczenia/swędzenia/bólu nosa i kichania w każdym punkcie czasowym. Średnie ważone ocen objawów zostaną obliczone w przedziale czasu od 0 do 10 godzin.

TNSS, ciśnienia w nosie, pomiary sorpcji nosowej i dane dotyczące ekspresji genów z wymazów z nosa zostaną wykreślone w funkcji czasu, z oddzielnym wykresem dla każdego podmiotu i pomiaru oraz z dawką LPS i placebo reprezentowanymi przez oddzielne linie na wykresach. Statystyki podsumowujące (np. średnie przedziały ufności +/- 95% lub mediana i przedział międzykwartylowy) dla płukania nosa i dane dotyczące ekspresji genów zostaną wykreślone według dawki w funkcji czasu.

Korelacje zostaną zbadane za pomocą wykresów punktowych dla następujących miar:

• Średnie ważone TNSS vs. maksymalne TNF-α
• Średnie ważone TNSS vs. maksymalna IL-8
• Średnie ważone TNSS vs. maksymalne s-ICAM-1
• Maksymalna ekspresja ICAM-1 vs. maksymalna TNF-α

Odtwarzalność nosowej prowokacji LPS dla ekspresji ICAM-1 i TNF-α zostanie zbadana przy użyciu następujących podzbiorów danych:

• Przed podaniem danych dla każdego okresu, aby zbadać zmienność wewnątrzosobniczą. Parametr w funkcji numeru okresu zostanie wykreślony z osobną linią dla każdego podmiotu w celu zbadania, czy występuje efekt okresu. Wykresy pudełkowe i wąsowe zostaną również użyte do podsumowania parametru według okresu.
• Dane z okresu placebo — parametr w funkcji czasu zostanie wykreślony z osobną linią dla każdego pacjenta w celu zbadania, czy występuje efekt przebiegu w czasie. Wykresy pudełkowe i wąsy będą również używane do podsumowania parametru w czasie.

Przedstawione zostaną wykresy pudełkowe i wąsy dla ekspresji ICAM-1 i TNF-α oraz dawki i czasu w celu zbadania, czy pomiary te powrócą do linii podstawowej po 24 godzinach.

Można przeprowadzić dodatkowe analizy eksploracyjne w celu dalszego scharakteryzowania profilu ekspresji ICAM po donosowej prowokacji LPS.