Desafio LPS Nasal em Voluntários Saudáveis

DESENHO DO ESTUDO E METODOLOGIA Este é um estudo de centro único que será realizado na Imperial Clinical Respiratory Research Unit (ICRRU) no St Mary's Hospital em London Paddington.

RECRUTAMENTO O estudo irá recrutar um total de 15 participantes saudáveis.

VISITAS DO ESTUDO O estudo envolverá um total de 11 consultas ambulatoriais. A visita de triagem é a visita inicial em que o estudo é discutido com o participante e o consentimento informado por escrito é obtido pelo PI ou seu designado. Isso é feito antes de realizar qualquer procedimento relacionado ao estudo. O participante terá a folha de informações do estudo por pelo menos 24 horas antes da visita.

A visita incluirá a coleta de dados demográficos, altura e peso, exame físico por um médico, histórico médico, sinais vitais, temperatura corporal, ECG de 12 derivações, avaliações laboratoriais (sangues de segurança), teste de abuso de drogas na urina e testes de gravidez para mulheres. O participante também será solicitado a indicar a presença de quaisquer sintomas nasais preenchendo uma folha de pontuação de sintomas nasais totais modificada e realizando um teste de pico de fluxo inspiratório nasal (PNIF).

Se elegíveis, os participantes serão solicitados a retornar para outras visitas de estudo. Os participantes receberão 4 doses diferentes de LPS e um placebo de forma aleatória.

Há um total de 5 períodos de tratamento. Cada período de tratamento consiste em uma visita de 11h no primeiro dia e uma visita de 20 minutos no dia seguinte. Há um intervalo total de 12 a 28 dias entre cada visita do período de tratamento.

Durante as visitas do período de tratamento, os participantes do estudo serão submetidos aos seguintes procedimentos do estudo:

1. Lavagem nasal em ambas as narinas e descarte com 5ml de soro fisiológico 0,9% para limpar o nariz antes do desafio nasal com LPS.
2. Provocação nasal com LPS (placebo, 1,10, 30 ou 100µg por narina)
3. Nasoabsorção (narina direita) a -30m, +30m, +1h, depois de hora em hora até 10h e 24h
4. Lavagem nasal (narina esquerda) a -30m, +2h, +4h, +8h, +24h
5. Raspagem nasal (narina esquerda) a -30m, +3h, +6h, +24h
6. Escore total modificado de sintomas nasais (TNSS) em -30m, +30m, +1h, depois de hora em hora até 10h e 24h
7. Taxa de pico de fluxo inspiratório nasal (PNIF) em -30m, +2h, +4h, +8h, 24h
8. Eventos adversos sistêmicos
9. Temperatura (oral) a -30m, +2h, +4h, +8h
10. Pressão arterial e frequência cardíaca a -30m
11. As mulheres com potencial para engravidar farão um teste de gravidez.

PROCEDIMENTOS NASAIS NO ESTUDO

1. Lavagem nasal (lavagem nasal): As lavagens nasais no nariz são realizadas passando um pequeno volume de fluido de água salgada (solução salina) para dentro do nariz. Um adaptador nasal em forma de azeitona é colocado dentro da narina. O participante é então solicitado a sentar-se para a frente e a solução de água salgada (salina) é usada para enxaguar o nariz durante um período de um minuto. Este procedimento é realizado em ambas as narinas para limpar o nariz na visita inicial do estudo e, em seguida, repetido apenas na narina esquerda em cada visita de tratamento.
2. Absorção de fluido de revestimento nasal (nasossorção ou SAM): Uma pequena tira de material absorvente, que se parece com um lenço de papel macio, será usada para absorver a umidade da superfície interna da narina. O papel absorvente especial será colocado dentro da narina e deixado por um período de 2 minutos para absorver o fluido do revestimento nasal antes de ser removido, sugando suavemente o fluido como mata-borrão. Colocar o papel no nariz pode fazer cócegas e fazer com que seus olhos lacrimejem um pouco. No entanto, a nasoabsorção não dói e o método dos investigadores provou ser bem tolerado em bebês, crianças e adultos. O papel absorve o fluido nasal e muitas substâncias produzidas pelas células nasais podem ser extraídas do papel e medidas em laboratório.
3. Raspagem nasal (curetagem nasal ou Rhinoprobe): Uma pequena sonda de plástico descartável e estéril será inserida no nariz e será pressionada suavemente contra o revestimento da superfície interna da narina. A sonda de 3 polegadas de comprimento tem uma pequena abertura na extremidade, que mal pode ser vista. 24 amostras minúsculas de cada narina (uma cabeça de alfinete, 2 mm, de tecido) serão retiradas de uma parte do nariz que tem um suprimento nervoso reduzido para limitar qualquer desconforto. A coleta desta amostra não causa sangramento, mas pode causar algum desconforto leve e pode fazer com que os olhos lacrimejem levemente. A sonda coletará células nasais da superfície da narina que serão enviadas para análise. Este método foi realizado em muitos adultos, crianças e bebês e foi muito bem tolerado.

ANÁLISE ESTATÍSTICA Cada uma das medidas será resumida descritivamente por dose e tempo usando estatísticas resumidas apropriadas. Se apropriado, as variáveis ​​de resposta serão transformadas (por exemplo, transformada em log). Os dados de expressão gênica serão normalizados pelo gene housekeeper. O TNSS será calculado pela soma das pontuações de obstrução nasal, corrimento nasal/rinorreia, queimação/coceira/sensação de dor nasal e espirros em cada ponto de tempo. As médias ponderadas dos escores de sintomas serão calculadas no intervalo de tempo de 0 a 10h.

TNSS, pressões de fungada nasal, medidas de nasossorção e dados de expressão gênica das raspagens nasais serão plotados contra o tempo, com um gráfico separado para cada sujeito e medida, e com dose de LPS e placebo representados por linhas separadas nos gráficos. Estatísticas resumidas (por exemplo, média +/- intervalos de confiança de 95% ou mediana e intervalo interquartílico) para lavagem nasal e dados de expressão gênica serão plotados por dose em relação ao tempo.

As correlações serão exploradas usando gráficos de dispersão para as seguintes medidas:

• Médias ponderadas TNSS vs. TNF-α máximo
• Médias ponderadas TNSS vs. IL-8 máximo
• Médias ponderadas TNSS vs. s-ICAM-1 máximo
• Expressão máxima de ICAM-1 vs. máxima de TNF-α

A reprodutibilidade do desafio de LPS nasal para expressão de ICAM-1 e TNF-α será explorada usando os seguintes subconjuntos de dados:

• Dados pré-dose para cada período para explorar a variabilidade intra-sujeito. Parâmetro versus número do período será plotado com uma linha separada para cada assunto para explorar se há um efeito do período. Gráficos de caixa e bigode também serão usados ​​para resumir o parâmetro por período.
• Dados do período de placebo - Parâmetro versus tempo será plotado com uma linha separada para cada sujeito para explorar se há um efeito de curso de tempo. Gráficos de caixa e bigode também serão usados ​​para resumir o parâmetro ao longo do tempo.

Gráficos de caixa e bigode para expressão de ICAM-1 e TNF-α e dose e tempo serão apresentados para investigar se essas medidas retornam à linha de base após 24h.

Análises exploratórias adicionais podem ser realizadas para caracterizar ainda mais o perfil de expressão de ICAM após desafio com LPS nasal.