Nazális LPS kihívás az egészséges önkéntesekben

A VIZSGÁLAT TERVEZÉSE ÉS MÓDSZERTANA Ez egy egyközpontú vizsgálat, amelyet a londoni paddingtoni St Mary's Hospital Imperial Clinical Respiratory Research Unit (ICRRU) részlegében hajtanak végre.

TOborzás A tanulmány összesen 15 egészséges résztvevőt vesz fel.

VIZSGÁLATI LÁTOGATÁSOK A vizsgálat összesen 11 járóbeteg-látogatást foglal magában. A szűrési látogatás az az első látogatás, ahol a vizsgálatot megvitatják a résztvevővel, és a PI vagy megbízottja írásos beleegyezését kapja. Ezt a vizsgálattal kapcsolatos eljárások elvégzése előtt kell elvégezni. A résztvevőnek a látogatás előtt legalább 24 órával rendelkeznie kell a vizsgálati adatlappal.

A látogatás magában foglalja a demográfiai adatok, a testmagasság és a testtömeg gyűjtését, az orvos által végzett fizikális vizsgálatot, a kórelőzményt, az életjeleket, a testhőmérsékletet, a 12 elvezetéses EKG-t, a laboratóriumi vizsgálatokat (biztonsági vér), a vizelet gyógyszereit, a visszaéléstesztet és a terhességi teszteket nők számára. A résztvevőt arra is felkérik, hogy jelezze az orrtünetek jelenlétét egy módosított összes orrtünet pontozási lap kitöltésével, és végezzen el egy csúcs nazális belégzési áramlás (PNIF) tesztet.

Ha jogosultak, a résztvevőket felkérik, hogy térjenek vissza további tanulmányi látogatásokra. A résztvevők 4 különböző adag LPS-t és placebót kapnak randomizált módon.

Összesen 5 kezelési időszak van. Minden kezelési időszak egy 11 órás látogatásból áll az első napon és egy 20 perces látogatásból a következő napon. Az egyes kezelési időszakos látogatások között összesen 12-28 nap van.

A kezelési időszak látogatásai során a vizsgálat résztvevői a következő vizsgálati eljárásokon esnek át:

1. Öblítse ki az orrát mindkét orrlyukba, és öntse ki 5 ml 0,9%-os sóoldattal, hogy megtisztítsa az orrát az orr LPS-fertőzés előtt.
2. Nazális provokáció LPS-sel (placebo, 1, 10, 30 vagy 100 µg orrlyukonként)
3. Nazoszorpció (jobb orrlyuk) -30 m, +30 m, +1 óra, majd óránként 10 óráig és 24 óráig
4. Orrmosás (bal orrlyuk) -30m, +2h, +4h, +8h, +24h
5. Orrkaparás (bal orrlyuk) -30 méternél, +3h, +6h, +24h
6. Módosított teljes orrtünet pontszám (TNSS) -30 órától, +30 órától, +1 órától, majd óránként 10 óráig és 24 óráig
7. Csúcs nazális belégzési áramlás (PNIF) -30 órában, +2 óra, +4 óra, +8 óra, 24 óra
8. Szisztémás nemkívánatos események
9. Hőmérséklet (szájon át) -30m, +2h, +4h, +8h
10. Vérnyomás és pulzusszám -30 méteren
11. A fogamzóképes korú nőknél terhességi tesztet kell végezni.

NAZELIS ELJÁRÁSOK A TANULMÁNYBAN

1. Orrmosás (orrmosás): Az orrban az orrmosást úgy végezzük, hogy kis mennyiségű sós vizet (sóoldatot) engedünk az orrba. Egy olajbogyó alakú orr-adaptert helyeznek el az orrlyuk belsejében. Ezután a résztvevőt megkérik, hogy üljön előre, és a sós vizes oldattal (sóoldattal) öblítse ki az orrát egy perc alatt. Ezt az eljárást mindkét orrlyukon elvégzik az orr tisztítása céljából az első vizsgálati látogatás alkalmával, majd minden kezelési látogatás alkalmával csak a bal orrlyukon ismételjük meg.
2. Az orrburkoló folyadék felszívódása (nazoszorpció vagy SAM): Egy kis nedvszívó anyagcsík, amely úgy néz ki, mint a puha selyempapír, az orrlyuk belső felületéről való nedvesség felszívására szolgál. A speciális nedvszívó papírt az orrlyukba helyezik, és 2 percig hagyják, hogy felszívja az orrnyálkahártya-folyadékot, mielőtt eltávolítaná, és óvatosan szívja fel a folyadékot, mint az itatós papír. Ha a papírt az orrba helyezi, az csiklandozhat, és enyhén könnybe lábadhat a szeme. A nasoszorpció azonban nem árt, és a vizsgálói módszer jól tolerálhatónak bizonyult csecsemőknél, gyermekeknél és felnőtteknél. A papír magába szívja az orrfolyadékot, és az orrsejtek által termelt számos anyag kivonható a papírból, és a laboratóriumban mérhető.
3. Orrkaparás (orrküretázs vagy Rhinoprobe): Egy kis, steril eldobható műanyag szondát helyeznek az orrba, és finoman az orrlyuk belső felületéhez nyomják. A 3 hüvelyk hosszú szondának egy apró gombóc van a végén, amit alig lehet látni. Mindegyik orrlyukból 24 apró mintát vesznek (egy gombostűfej, 2 mm-es szövet) az orr azon részéből, ahol csökkent az idegellátás, hogy csökkentsék a kellemetlen érzéseket. A minta vétele nem okoz vérzést, de enyhe kellemetlenséget okozhat, és enyhén könnyezhet a szem. A szonda összegyűjti az orrsejteket az orrlyuk felszínéről, amelyeket ezután elemzésre küld. Ezt a módszert sok felnőttnél, gyermeknél és csecsemőnél alkalmazták, és nagyon jól tolerálták.

STATISZTIKAI ELEMZÉS A megfelelő összefoglaló statisztikák felhasználásával minden egyes intézkedést dózis és idő szerint leíró módon összefoglalunk. Adott esetben a válaszváltozók átalakulnak (pl. log-transzformált). A génexpressziós adatokat a házőrző gén normalizálja. A TNSS kiszámítása az orrdugulás, az orrváladék/orrhoea, az orrban jelentkező égő/viszketés/fájdalomérzet és a tüsszögés pontszámainak összegzésével történik minden időpontban. A tünetek súlyozott átlagát a 0 és 10 óra közötti időintervallumra számítják ki.

A TNSS-t, az orrszippantás nyomását, a nasoszorpciós méréseket és az orrkaparékból származó génexpressziós adatokat az idő függvényében ábrázolják, külön diagrammal minden alanyhoz és méréshez, az LPS-dózist és a placebót pedig külön vonalak jelzik a diagramokon. Összefoglaló statisztikák (pl. átlagos +/- 95%-os konfidencia intervallumok vagy medián és interkvartilis tartomány) az orröblítéshez és a génexpressziós adatokhoz dózis és idő függvényében kell ábrázolni.

A korrelációkat szórásdiagramok segítségével vizsgáljuk a következő mérőszámokhoz:

• A súlyozott TNSS-t jelent a maximális TNF-α-hoz képest
• A súlyozott TNSS-t jelent a maximális IL-8-hoz képest
• A súlyozott: TNSS a maximális s-ICAM-1 értékhez képest
• Maximális ICAM-1 expresszió vs. maximális TNF-α

Az ICAM-1-expresszió és a TNF-α nazális LPS-kihívásának reprodukálhatóságát a következő adathalmazok felhasználásával vizsgáljuk meg:

• Előadagolja az adatokat az egyes időszakokra, hogy feltárja az alanyon belüli változékonyságot. A paraméter és a periódus száma külön vonallal lesz ábrázolva minden egyes alanyhoz, hogy megvizsgálja, van-e periódushatás. Box és whisker diagramokat is használunk a paraméterek időszakonkénti összegzésére.
• Placebo periódus adatai – A Paraméter vs. időt külön vonallal ábrázoljuk minden egyes alanyhoz, hogy megvizsgáljuk, van-e időbeli hatás. Box és whisker diagramokat is használunk a paraméterek időbeli összegzésére.

Box és whisker diagramokat mutatunk be az ICAM-1 expressziójára és a TNF-α-ra, valamint a dózisra és az időre, hogy megvizsgáljuk, hogy ezek az értékek 24 óra elteltével visszatérnek-e az alapértékre.

További feltáró elemzések végezhetők az ICAM expressziós profiljának további jellemzésére nazális LPS-fertőzést követően.