Sfida LPS nasale in volontari sani

DISEGNO E METODOLOGIA DELLO STUDIO Si tratta di uno studio monocentrico che sarà condotto presso l'Imperial Clinical Respiratory Research Unit (ICRRU) presso il St Mary's Hospital di London Paddington.

RECLUTAMENTO Lo studio recluterà un totale di 15 partecipanti sani.

VISITE DI STUDIO Lo studio prevede un totale di 11 visite ambulatoriali. La visita di screening è la visita iniziale in cui lo studio viene discusso con il partecipante e il consenso informato scritto viene ottenuto dal PI o dal suo designato. Questo viene fatto prima di eseguire qualsiasi procedura correlata allo studio. Il partecipante avrà avuto il foglio informativo dello studio per almeno 24 ore prima della visita.

La visita comprenderà la raccolta di dati demografici, altezza e peso, esame fisico da parte di un medico, anamnesi, segni vitali, temperatura corporea, ECG a 12 derivazioni, valutazioni di laboratorio (sangue di sicurezza) urine test di abuso di droghe e test di gravidanza per le donne. Al partecipante verrà inoltre chiesto di indicare la presenza di eventuali sintomi nasali completando un foglio di punteggio dei sintomi nasali totali modificato ed eseguire un test del flusso inspiratorio nasale di picco (PNIF).

Se idonei, ai partecipanti verrà chiesto di tornare per ulteriori visite di studio. Ai partecipanti verranno somministrate 4 diverse dosi di LPS e un placebo in modo randomizzato.

Ci sono un totale di 5 periodi di trattamento. Ogni periodo di trattamento consiste in una visita di 11 ore il primo giorno e una visita di 20 minuti il ​​giorno successivo. C'è un intervallo totale di 12-28 giorni tra ogni visita del periodo di trattamento.

Durante le visite del periodo di trattamento, i partecipanti allo studio saranno sottoposti alle seguenti procedure di studio:

1. Lavaggio nasale a entrambe le narici e scartare con 5 ml di soluzione fisiologica allo 0,9% per pulire il naso prima della sfida nasale con LPS.
2. Test nasale con LPS (placebo, 1,10, 30 o 100 µg per narice)
3. Nasosorbimento (narice destra) a -30m, +30m, +1h, poi ogni ora fino a 10h e 24h
4. Lavaggio nasale (narice sinistra) a -30m, +2h, +4h, +8h, +24h
5. Raschiamento nasale (narice sinistra) a -30m, +3h, +6h, +24h
6. Punteggio totale dei sintomi nasali modificato (TNSS) a -30 m, +30 m, +1 h, quindi ogni ora a 10 h e 24 h
7. Frequenza del flusso inspiratorio nasale di picco (PNIF) a -30 m, +2 h, +4 h, +8 h, 24 h
8. Eventi avversi sistemici
9. Temperatura (orale) a -30m, +2h, +4h, +8h
10. Pressione sanguigna e frequenza cardiaca a -30m
11. Le donne in età fertile verranno sottoposte a un test di gravidanza.

PROCEDURE NASALI NELLO STUDIO

1. Lavaggio nasale (lavaggio nasale): i lavaggi nasali nel naso vengono eseguiti facendo passare un piccolo volume di fluido di acqua salata (soluzione salina) nel naso. Un adattatore nasale a forma di oliva è posto all'interno della narice. Al partecipante viene quindi chiesto di sedersi in avanti e la soluzione di acqua salata (salina) viene utilizzata per sciacquare dentro e fuori dal naso per un periodo di un minuto. Questa procedura viene eseguita su entrambe le narici per pulire il naso durante la visita iniziale dello studio e poi ripetuta solo sulla narice sinistra ad ogni visita di trattamento.
2. Assorbimento del fluido del rivestimento nasale (nasosorbimento o SAM): una piccola striscia di materiale assorbente, che sembra e si sente come carta velina morbida, verrà utilizzata per assorbire l'umidità dalla superficie interna della narice. La speciale carta assorbente verrà posizionata all'interno della narice e lasciata per un periodo di 2 minuti per assorbire il fluido del rivestimento nasale prima di essere rimossa, aspirando delicatamente il fluido come carta assorbente. Mettere la carta nel naso può solleticare e far lacrimare un po' gli occhi. Tuttavia, il nasoassorbimento non fa male e il metodo degli investigatori si è dimostrato ben tollerato nei neonati, nei bambini e negli adulti. La carta assorbe il fluido nasale e molte sostanze prodotte dalle cellule nasali possono quindi essere estratte dalla carta e misurate in laboratorio.
3. Raschiamento nasale (curettage nasale o Rhinoprobe): una piccola sonda di plastica monouso sterile verrà inserita nel naso e verrà premuta delicatamente contro il rivestimento della superficie interna della narice. La sonda lunga 3 pollici ha una piccola paletta all'estremità, che può essere appena vista. Verranno prelevati 24 minuscoli campioni da ciascuna narice (una capocchia di spillo, 2 mm, di tessuto) da una parte del naso che ha un ridotto apporto nervoso per limitare qualsiasi disagio. L'assunzione di questo campione non provoca sanguinamento, ma può causare un lieve disagio e può far lacrimare leggermente gli occhi. La sonda raccoglierà le cellule nasali dalla superficie della narice che verranno poi inviate per l'analisi. Questo metodo è stato eseguito su molti adulti, bambini e neonati ed è stato molto ben tollerato.

ANALISI STATISTICA Ciascuna delle misure sarà riassunta in modo descrittivo per dose e tempo utilizzando opportune statistiche riassuntive. Se appropriato, le variabili di risposta saranno trasformate (ad es. log-trasformato). I dati di espressione genica saranno normalizzati dal gene house-keeper. Il TNSS sarà calcolato sommando i punteggi di ostruzione nasale, secrezione nasale/rinorrea, sensazione di bruciore/prurito/dolore nasale e starnuti in ciascun punto temporale. Le medie ponderate dei punteggi dei sintomi saranno calcolate nell'intervallo di tempo da 0 a 10 ore.

TNSS, pressioni di sniff nasale, misure di nasosorbimento e dati di espressione genica dai raschietti nasali saranno ciascuno tracciato rispetto al tempo, con un grafico separato per ogni soggetto e misura, e con la dose di LPS e il placebo rappresentati da linee separate sui grafici. Statistiche riassuntive (ad es. media +/- 95% degli intervalli di confidenza o intervallo mediano e interquartile) per il lavaggio nasale e i dati di espressione genica saranno tracciati per dose rispetto al tempo.

Le correlazioni saranno esplorate utilizzando grafici a dispersione per le seguenti misure:

• Pesato significa TNSS rispetto al massimo TNF-α
• Ponderato significa TNSS rispetto al massimo IL-8
• Media ponderata TNSS rispetto al massimo s-ICAM-1
• Massima espressione di ICAM-1 rispetto a massimo TNF-α

La riproducibilità della sfida LPS nasale per l'espressione di ICAM-1 e TNF-α sarà esplorata utilizzando i seguenti sottoinsiemi di dati:

• Predosare i dati per ciascun periodo per esplorare la variabilità intra-soggetto. Il parametro rispetto al numero del periodo verrà tracciato con una linea separata per ogni soggetto per esplorare se esiste un effetto del periodo. Saranno utilizzati anche grafici a scatola e baffi per riepilogare il parametro per periodo.
• Dati del periodo placebo: il parametro rispetto al tempo verrà tracciato con una linea separata per ciascun soggetto per esplorare se esiste un effetto del corso del tempo. Verranno utilizzati anche grafici a scatola e baffi per riepilogare il parametro nel tempo.

Saranno presentati grafici a scatola e baffi per l'espressione di ICAM-1 e TNF-α e dose e tempo per verificare se queste misure ritornano al basale dopo 24 ore.

Ulteriori analisi esplorative possono essere eseguite per caratterizzare ulteriormente il profilo di espressione dell'ICAM dopo la sfida con LPS nasale.