Nasaler LPS-Challenge bei gesunden Freiwilligen

STUDIENDESIGN UND METHODOLOGIE Dies ist eine monozentrische Studie, die an der Imperial Clinical Respiratory Research Unit (ICRRU) am St. Mary's Hospital in London Paddington durchgeführt wird.

REKRUTIERUNG Die Studie wird insgesamt 15 gesunde Teilnehmer rekrutieren.

STUDIENBESUCHE Die Studie umfasst insgesamt 11 ambulante Patientenbesuche. Der Screening-Besuch ist der erste Besuch, bei dem die Studie mit dem Teilnehmer besprochen wird und eine schriftliche Einverständniserklärung vom PI oder seinem Beauftragten eingeholt wird. Dies erfolgt vor der Durchführung studienbezogener Verfahren. Der Teilnehmer muss das Studieninformationsblatt mindestens 24 Stunden vor dem Besuch erhalten haben.

Der Besuch umfasst die Erfassung von demografischen Daten, Größe und Gewicht, körperliche Untersuchung durch einen Arzt, Anamnese, Vitalfunktionen, Körpertemperatur, 12-Kanal-EKG, Laboruntersuchungen (Sicherheitsblut), Urin-Drogentest und Schwangerschaftstests für Frauen. Der Teilnehmer wird auch gebeten, das Vorhandensein von nasalen Symptomen anzugeben, indem er ein modifiziertes Bewertungsblatt für nasale Gesamtsymptome ausfüllt und einen Test des nasalen Inspirationsspitzenflusses (PNIF) durchführt.

Falls berechtigt, werden die Teilnehmer gebeten, für weitere Studienbesuche zurückzukehren. Die Teilnehmer erhalten randomisiert 4 verschiedene LPS-Dosen und ein Placebo.

Es gibt insgesamt 5 Behandlungsperioden. Jede Behandlungsperiode besteht aus einem 11-stündigen Besuch am ersten Tag und einem 20-minütigen Besuch am folgenden Tag. Zwischen jedem Behandlungszeitraum liegen insgesamt 12-28 Tage Intervall.

Während der Besuche im Behandlungszeitraum werden die Studienteilnehmer den folgenden Studienverfahren unterzogen:

1. Nasenspülung in beide Nasenlöcher und mit 5 ml 0,9%iger Kochsalzlösung verwerfen, um die Nase vor der nasalen LPS-Provokation zu reinigen.
2. Nasenprovokation mit LPS (Placebo, 1,10, 30 oder 100 µg pro Nasenloch)
3. Nasosorption (rechtes Nasenloch) bei -30m, +30m, +1h, dann stündlich bis 10h und 24h
4. Nasenspülung (linkes Nasenloch) bei -30m, +2h, +4h, +8h, +24h
5. Nasenkratzen (linkes Nasenloch) bei -30m, +3h, +6h, +24h
6. Modifizierter totaler nasaler Symptom-Score (TNSS) bei -30m, +30m, +1h, dann stündlich bis 10h und 24h
7. Spitzenrate des nasalen Inspirationsflusses (PNIF) bei -30 m, +2 Std., +4 Std., +8 Std., 24 Std
8. Systemische Nebenwirkungen
9. Temperatur (oral) bei -30m, +2h, +4h, +8h
10. Blutdruck und Herzfrequenz bei -30m
11. Bei Frauen im gebärfähigen Alter wird ein Schwangerschaftstest durchgeführt.

NASENVERFAHREN IN DER STUDIE

1. Nasenspülung (Nasenspülung): Nasenspülungen in der Nase werden durchgeführt, indem eine kleine Menge Salzwasser (Kochsalzlösung) in die Nase geleitet wird. Ein Nasenadapter in Form einer Olive wird in das Nasenloch eingesetzt. Der Teilnehmer wird dann gebeten, sich nach vorne zu setzen, und die Salzwasserlösung (Kochsalzlösung) wird verwendet, um die Nase über einen Zeitraum von einer Minute ein- und auszuspülen. Dieses Verfahren wird an beiden Nasenlöchern durchgeführt, um die Nase beim ersten Studienbesuch zu reinigen, und wird dann bei jedem Behandlungsbesuch nur am linken Nasenloch wiederholt.
2. Flüssigkeitsabsorption der Nasenschleimhaut (Nasosorption oder SAM): Ein kleiner Streifen aus absorbierendem Material, das wie weiches Seidenpapier aussieht und sich anfühlt, wird verwendet, um Feuchtigkeit von der Innenfläche des Nasenlochs zu absorbieren. Das spezielle saugfähige Papier wird in das Nasenloch gelegt und dort für einen Zeitraum von 2 Minuten belassen, um die Nasenschleimhautflüssigkeit zu absorbieren, bevor es entfernt wird, wobei Flüssigkeit wie Löschpapier sanft aufgesaugt wird. Das Einführen des Papiers in die Nase kann kitzeln und dazu führen, dass Ihre Augen ein wenig tränen. Die Nasosorption tut jedoch nicht weh und die Methode der Ermittler hat sich bei Babys, Kindern und Erwachsenen als gut verträglich erwiesen. Das Papier saugt die Nasenflüssigkeit auf und viele Substanzen, die von den Nasenzellen produziert werden, können dann aus dem Papier extrahiert und im Labor gemessen werden.
3. Nasenschaben (Nasenkürettage oder Rhinoprobe): Eine kleine sterile Einweg-Kunststoffsonde wird in die Nase eingeführt und sanft gegen die innere Oberflächenauskleidung des Nasenlochs gedrückt. Die 3 Zoll lange Sonde hat am Ende eine winzige Schaufel, die kaum zu sehen ist. 24 winzige Proben aus jedem Nasenloch (ein Stecknadelkopf, 2 mm, Gewebe) werden aus einem Teil der Nase entnommen, der eine reduzierte Nervenversorgung hat, um Beschwerden zu begrenzen. Die Entnahme dieser Probe verursacht keine Blutung, kann aber leichte Beschwerden verursachen und die Augen leicht tränen lassen. Die Sonde sammelt Nasenzellen von der Oberfläche des Nasenlochs, die dann zur Analyse gesendet werden. Diese Methode wurde bei vielen Erwachsenen, Kindern und Babys durchgeführt und sehr gut vertragen.

STATISTISCHE ANALYSE Jede der Maßnahmen wird deskriptiv nach Dosis und Zeit unter Verwendung geeigneter zusammenfassender Statistiken zusammengefasst. Gegebenenfalls werden Antwortvariablen transformiert (z. log-transformiert). Genexpressionsdaten werden durch das Housekeeper-Gen normalisiert. Der TNSS wird berechnet, indem die Werte für Nasenverstopfung, Nasenausfluss/Rhinorrhoe, Nasenbrennen/Juckreiz/Schmerzgefühl und Niesen zu jedem Zeitpunkt summiert werden. Gewichtete Mittelwerte der Symptomwerte werden über das Zeitintervall 0 bis 10 h berechnet.

TNSS, nasaler Schnüffeldruck, Nasosorptionsmessungen und Genexpressionsdaten aus den Nasenabstrichen werden jeweils gegen die Zeit aufgetragen, mit einem separaten Diagramm für jedes Subjekt und jede Messung, und wobei die LPS-Dosis und das Placebo durch separate Linien auf den Diagrammen dargestellt werden. Zusammenfassende Statistiken (z. B. Mittelwert +/- 95 % Konfidenzintervall oder Median und Interquartilbereich) für Nasenspülung und Genexpressionsdaten werden nach Dosis gegen Zeit aufgetragen.

Korrelationen werden unter Verwendung von Streudiagrammen für die folgenden Maße untersucht:

• Gewichtete Mittel TNSS vs. maximales TNF-α
• Gewichtet bedeutet TNSS vs. maximales IL-8
• Gewichtet bedeutet TNSS vs. Maximum s-ICAM-1
• Maximale ICAM-1-Expression gegenüber maximalem TNF-α

Die Reproduzierbarkeit der nasalen LPS-Provokation für ICAM-1-Expression und TNF-α wird unter Verwendung der folgenden Untergruppen von Daten untersucht:

• Prädosieren Sie Daten für jeden Zeitraum, um die Variabilität innerhalb des Subjekts zu untersuchen. Parameter vs. Periodenzahl werden mit einer separaten Linie für jedes Subjekt dargestellt, um zu untersuchen, ob es einen Periodeneffekt gibt. Box- und Whisker-Plots werden auch verwendet, um die Parameter nach Zeitraum zusammenzufassen.
• Placebo-Periodendaten – Parameter vs. Zeit werden mit einer separaten Linie für jedes Subjekt dargestellt, um zu untersuchen, ob es einen Zeitverlaufseffekt gibt. Box- und Whisker-Plots werden auch verwendet, um den Parameter über die Zeit zusammenzufassen.

Box-and-Whisker-Plots für ICAM-1-Expression und TNF-α sowie Dosis und Zeit werden dargestellt, um zu untersuchen, ob diese Messungen nach 24 h auf die Grundlinie zurückkehren.

Zusätzliche explorative Analysen können durchgeführt werden, um das Expressionsprofil von ICAM nach nasaler LPS-Provokation weiter zu charakterisieren.