Inflammatoristen merkkiaineiden (VNN1) tutkimus Crohnin taudissa ja haavaisessa paksusuolitulehduksessa. (VANIN)

Tulehduksellisia suolistosairauksia (IBD) ovat muun muassa Crohnin tauti ja haavainen paksusuolitulehdus. IBD:n tarkka alkuperä ei ole toistaiseksi tiedossa. Nykyään sairauden patogeneesin nykyinen hypoteesi on, että IBD johtuu säätelemättömästä limakalvon immuunivasteesta suolen mikrobiflooralle geneettisesti herkissä isännissä. Suoliston homeostaasi riippuu immuuni- ja epiteelisolujen välisistä vuorovaikutuksista. Epiteelisolut ovat ensimmäinen puolustuslinja, ne ovat tiiviisti yhteydessä taustalla olevaan suolistoon liittyvään lymfoidikudokseen ja niiden muuttaminen johtaa kudosten homeostaasin menettämiseen.

Vaniini-1 (Vnn1 hiirillä, VNN1 ihmisillä) on epiteelin panteinaasi, joka säätelee solujen vastetta stressiin.

Tämä ektoentsyymi hydrolysoi B5-vitamiinijohdannaista panteteiinia toimittamaan kysteamiinia kudoksiin ja regeneroimaan pantotenaattia. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että Vnn1 KO -hiiret olivat vastustuskykyisempiä kokeelliselle paksusuolitulehdukselle ja kystamiinin (kysteamiinin hapettunut muoto) antaminen palautti niiden alttiuden paksusuolentulehdukselle. Lisäksi VNN1-ekspression analyysi IBD-potilailla osoittaa, että korkea VNN1-ekspressio liittyy vakaviin kliinisiin piirteisiin. Siten VNN1:n ilmentymisen analyysi voisi edustaa hyvää prognostista markkeria.

Äskettäin julkaistussa artikkelissa luonnehdimme 500 IBD-potilaan retrospektiivistä kohorttia ja kontrolloimme uusia SNP:itä (yksi nukleotidin polymorfismeja) VNN1-promoottorissa ja osoitimme niiden yhteyden IBD:n esiintyvyyteen ja korkeaan VNN1-ilmentymiseen. Tämä viittasi siihen, että VNN1-geeni saattaa olla uusi IBD-alttiusmarkkeri.

Hiirellä Vnn1:n ilmentymistä säätelee tiukasti PPARa- ja PPARg-transkriptiotekijöiden aktivaatio. Mielenkiintoista on, että yksi potilailla tunnistetuista SNP:istä osallistuu PPARg:n sitoutumiskohtaan. Mielenkiintoista on, että 5-ASA-perheeseen liittyvillä lääkkeillä, joita yleisesti käytetään IBD:ssä, on PPARgamma-agonistipotentiaalia. Siksi VNN1-tasojen kvantifiointi potilailla, jotka saavat 5-ASA-hoitoa, voi auttaa ennustamaan hoitovastetta ja valitsemaan potilaita, joista on eniten hyötyä tästä hoidosta.

Tämän uuden projektin tarkoituksena on laajentaa alkuperäistä analyysiämme. Tutkimus on prospektiivinen, yksikeskinen ja kontrolloitu. Sen ensisijaisena tavoitteena on arvioida VNN1-ekspression taso paksusuolen limakalvolla IBD-potilaiden ja kontrollihenkilöiden välillä korkean VNN1-ilmentymisen ja IBD:n välisen korrelaation vahvistamiseksi. Prospektiivisen luonteen suhteen yritämme myös liittää VNN1-ekspressiotason tiettyihin endofenotyyppeihin (leesioiden vakavuus ja/tai sijainti, hoitovasteen laatu). Lopuksi seulomme potilaita aiemmin tunnistettujen SNP:iden varalta integroidaksemme nämä tiedot ekspressioanalyysin tulosten tulkintaan.

Tämä tutkimus on suunniteltu 2 vuodeksi. Muodostetaan kaksi potilasryhmää: toiseen ryhmään kuuluvat IBD-potilaat, joita seurataan "Service de Gastro-entérologie du Pr Grimaud à l'Hôpital Nordissa" ja toinen ryhmä muodostaa kontrollikohortin, johon kuuluvat henkilöt, joille ehdotettiin seulontakolonoskopiaa suvussa paksusuolensyöpää tai polyyppejä tai ärtyvän suolen oireyhtymää.

Tutkijan on täytettävä jokaisesta mukana olevasta potilaasta kyselylomake, jossa kerätään tietoja iästä, sukupuolesta, aiemmasta sairaushistoriasta, käytetyistä lääkkeistä, ruoansulatuskanavan oireista ja kolonoskopia-aiheista.

IBD-potilaille otetaan ensimmäinen biopsiasarja (n = 10) ja verinäytteitä, jotka kerätään yleisanestesiassa kolonoskopian aikana, joka on suunniteltu heidän IBD:n tavanomaiseen seurantaan; toinen sarja samanlaisia ​​näytteitä kerätään seuraavien 12 kuukauden aikana, jos endoskooppinen kontrolli on lääketieteellisesti perusteltua. Kontrollihenkilöillä on vain yksi sarja biopsiaa ja verinäytteitä, jotka kerätään yleisanestesiassa kolonoskopian aikana. Erityistapauksessa IBD-potilaita, jotka tarvitsevat leikkausta, pieni pala resektiosta kerätään ex vivo sekä terveiltä että patologisilta alueilta.

Verinäyte käyttää VNN1-seerisen panteteinaasin aktiivisuuden kvantifiointia ja SNP:n geneettistä tutkimusta.

Paksusuolen biopsiat otetaan kaksoiskappaleina viideltä eri ileokoolonin alueelta, yksi histopatologista analyysiä varten ja toinen transkriptioanalyysiä varten qRT-PCR:llä.

Kirurgisia näytteitä käytetään transkriptioaktiivisuuteen, kudoksen panteteinaasiaktiivisuuteen ja TMA (Tissue MicroArrays) -pankin muodostamiseen immunohistokemiassa.

Odotetut edut ovat uuden IBD:n ennustemarkkerin validointi sairauden vaikeusasteen tai mahdollisesti terapeuttisen vasteen arvioimiseksi.