Estudo de Marcadores Inflamatórios (VNN1) na Doença de Crohn e Colite Ulcerosa. (VANIN)

As doenças inflamatórias intestinais (DII) incluem a doença de Crohn e a colite ulcerosa. A origem precisa da DII é desconhecida até agora. Hoje, a hipótese atual da patogênese da doença é que a DII resulta de uma resposta imune desregulada da mucosa à flora microbiana intestinal em hospedeiros geneticamente suscetíveis. A homeostase intestinal depende de interações entre células imunes e epiteliais. As células epiteliais são a primeira linha de defesa, estão fortemente conectadas ao tecido linfóide associado ao intestino subjacente e sua alteração resulta na perda da homeostase tecidual.

Vanin-1 (Vnn1 em camundongos, VNN1 em humanos) é uma panteinase epitelial que regula a resposta celular ao estresse.

Esta ectoenzima hidrolisa a panteteína derivada da vitamina B5 para fornecer cisteamina aos tecidos e regenerar o pantotenato. Estudos anteriores mostraram que camundongos Vnn1 KO eram mais resistentes à colite experimental e a administração de cistamina (forma oxidada da cisteamina) restaurou sua suscetibilidade à colite. Além disso, a análise da expressão de VNN1 em pacientes com DII mostra que a alta expressão de VNN1 está associada a características clínicas graves. Assim, a análise da expressão de VNN1 pode representar um bom marcador de prognóstico.

Em um artigo publicado recentemente, caracterizamos entre uma coorte retrospectiva de 500 pacientes com DII e controles novos SNPs (polimorfismos de nucleotídeo único) no promotor VNN1 e mostramos sua associação com a incidência de DII e alta expressão de VNN1. Isso sugeriu que o gene VNN1 pode ser um novo marcador de predisposição para DII.

Em camundongos, a expressão de Vnn1 é rigidamente regulada pela ativação dos fatores de transcrição PPARa e PPARg. Curiosamente, um dos SNPs identificados nos pacientes participa de um sítio de ligação do PPARg. Curiosamente, as drogas relacionadas à família do 5-ASA, que são comumente usadas na DII, têm potencial agonista do PPARgama. Portanto, quantificar os níveis de VNN1 em pacientes sob terapia com 5-ASA pode ajudar a prever a resposta à terapia e selecionar pacientes com o maior benefício para esta terapia.

O objetivo deste novo projeto é estender nossa análise inicial. O estudo será prospectivo, monocêntrico e controlado. Seu objetivo primário é avaliar o nível de expressão de VNN1 na mucosa colônica entre pacientes com DII e controles para confirmar a correlação entre alta expressão de VNN1 e DII. Em relação ao seu caráter prospectivo, tentaremos também associar o nível de expressão de VNN1 a endofenótipos específicos (gravidade e/ou localização das lesões, qualidade da resposta à terapêutica). Finalmente, iremos rastrear os pacientes para os SNPs previamente identificados para integrar esta informação na interpretação dos resultados da análise de expressão.

Este estudo está planejado para 2 anos. Dois grupos de pacientes serão constituídos: um grupo incluirá pacientes com DII acompanhados no " Service de Gastro-entérologie du Pr Grimaud à l'Hôpital Nord " e o outro grupo constituirá a coorte de controle incluindo pessoas que foram propostas uma colonoscopia de triagem para história familiar de câncer de cólon ou pólipos, ou para Síndrome do Intestino Irritável.

O investigador terá de preencher um questionário para cada doente incluído, recolhendo informação sobre idade, sexo, antecedentes médicos, medicamentos tomados, sintomas digestivos e indicação de colonoscopia.

Os pacientes com DII terão um primeiro conjunto de biópsias (n = 10) e amostras de sangue coletadas sob anestesia geral durante uma colonoscopia planejada em seu acompanhamento habitual de DII; um segundo conjunto de amostras semelhantes será coletado nos próximos 12 meses se um controle endoscópico for clinicamente justificado. Os indivíduos de controle terão apenas um conjunto de biópsia e amostras de sangue coletadas sob anestesia geral durante a colonoscopia. No caso particular de pacientes com DII que necessitam de cirurgia, um pequeno pedaço da ressecção será coletado ex-vivo em áreas saudáveis ​​e patológicas.

A amostra de sangue servirá para quantificação da atividade da panteteínase sérica VNN1 e estudo genético de SNPs.

As biópsias colônicas serão obtidas em duplicata de 5 diferentes áreas ileocolônicas, uma para análise histopatológica e outra para análise transcricional por qRT-PCR.

As amostras cirúrgicas serão utilizadas para atividade transcricional, atividade da panteteínase tecidual e constituição do banco de TMA (Tissue MicroArrays) para imuno-histoquímica.

Os benefícios esperados são para validar um novo marcador prognóstico de DII para a gravidade da doença ou potencialmente para avaliação da resposta terapêutica.