Untersuchung von Entzündungsmarkern (VNN1) bei Morbus Crohn und Colitis ulcerosa. (VANIN)

Zu den entzündlichen Darmerkrankungen (CED) gehören Morbus Crohn und Colitis ulcerosa. Der genaue Ursprung von IBD ist bisher unbekannt. Heutzutage ist die aktuelle Hypothese der Pathogenese der Krankheit, dass CED aus einer fehlregulierten Immunantwort der Schleimhaut auf die mikrobielle Darmflora in genetisch anfälligen Wirten resultiert. Die intestinale Homöostase hängt von Wechselwirkungen zwischen Immun- und Epithelzellen ab. Epithelzellen sind die erste Verteidigungslinie, sie sind eng mit dem darunter liegenden darmassoziierten Lymphgewebe verbunden und ihre Veränderung führt zu einem Verlust der Gewebehomöostase.

Vanin-1 (Vnn1 bei Mäusen, VNN1 beim Menschen) ist eine epitheliale Pantheinase, die die Zellantwort auf Stress reguliert.

Dieses Ectoenzym hydrolysiert das Vitamin B5-Derivat Pantethein, um Gewebe mit Cysteamin zu versorgen und Pantothenat zu regenerieren. Frühere Studien haben gezeigt, dass Vnn1 KO-Mäuse resistenter gegen experimentelle Colitis waren und die Verabreichung von Cystamin (oxidierte Form von Cysteamin) ihre Anfälligkeit für Colitis wiederherstellte. Darüber hinaus zeigt die Analyse der VNN1-Expression bei CED-Patienten, dass eine hohe VNN1-Expression mit schwerwiegenden klinischen Merkmalen verbunden ist. Daher könnte die Analyse der VNN1-Expression einen guten prognostischen Marker darstellen.

In einem kürzlich veröffentlichten Artikel haben wir in einer retrospektiven Kohorte von 500 CED-Patienten und -Kontrollen neue SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) im VNN1-Promotor charakterisiert und ihre Assoziation mit der CED-Inzidenz und der hohen VNN1-Expression gezeigt. Dies legte nahe, dass das VNN1-Gen ein neuer Prädispositionsmarker für CED sein könnte.

Bei der Maus wird die Vnn1-Expression durch die Aktivierung der Transkriptionsfaktoren PPARa und PPARg streng reguliert. Interessanterweise ist einer der bei Patienten identifizierten SNPs an einer PPARg-Bindungsstelle beteiligt. Interessanterweise haben Medikamente, die mit der Familie der 5-ASA verwandt sind und üblicherweise bei IBD verwendet werden, PPARgamma-Agonistenpotential. Daher könnte die Quantifizierung der VNN1-Spiegel bei Patienten unter 5-ASA-Therapie helfen, das Ansprechen auf die Therapie vorherzusagen und Patienten mit dem höchsten Nutzen für diese Therapie auszuwählen.

Der Zweck dieses neuen Projekts besteht darin, unsere anfängliche Analyse zu erweitern. Die Studie wird prospektiv, monozentrisch und kontrolliert durchgeführt. Sein primäres Ziel ist es, das Niveau der VNN1-Expression in der Dickdarmschleimhaut zwischen CED-Patienten und Kontrollpersonen zu bewerten, um die Korrelation zwischen hoher VNN1-Expression und CED zu bestätigen. In Bezug auf seinen prospektiven Charakter werden wir auch versuchen, das VNN1-Expressionsniveau mit spezifischen Endophänotypen (Schweregrad und/oder Lokalisation der Läsionen, Qualität des Ansprechens auf die Therapie) in Verbindung zu bringen. Schließlich werden wir Patienten auf die zuvor identifizierten SNPs untersuchen, um diese Informationen in die Interpretation der Ergebnisse der Expressionsanalyse zu integrieren.

Diese Studie ist auf 2 Jahre geplant. Es werden zwei Gruppen von Patienten gebildet: Eine Gruppe umfasst IBD-Patienten, die vom "Service de Gastro-entérologie du Pr Grimaud à l'Hôpital Nord" betreut werden, und die andere Gruppe bildet die Kontrollkohorte mit Personen, denen eine Screening-Koloskopie vorgeschlagen wurde Familiengeschichte von Dickdarmkrebs oder Polypen oder Reizdarmsyndrom.

Der Prüfer muss für jeden eingeschlossenen Patienten einen Fragebogen ausfüllen und Informationen über Alter, Geschlecht, Vorgeschichte, eingenommene Medikamente, Verdauungssymptome und Indikation zur Koloskopie sammeln.

IBD-Patienten erhalten einen ersten Satz Biopsien (n = 10) und Blutproben, die unter Vollnarkose während einer Koloskopie entnommen werden, die in ihrer üblichen IBD-Nachsorge geplant ist; ein zweiter Satz ähnlicher Proben wird innerhalb der nächsten 12 Monate entnommen, wenn eine endoskopische Kontrolle medizinisch gerechtfertigt ist. Den Kontrollpersonen wird während ihrer Koloskopie nur ein Satz Biopsie- und Blutproben unter Vollnarkose entnommen. Im besonderen Fall von IBD-Patienten, die operiert werden müssen, wird ein kleines Stück der Resektion ex vivo sowohl an gesunden als auch an pathologischen Bereichen entnommen.

Die Blutprobe dient der Quantifizierung der serischen Pantheteinase-Aktivität von VNN1 und der genetischen Untersuchung von SNP.

Die Kolonbiopsien werden in Duplikaten aus 5 verschiedenen Ileokolon-Bereichen erhalten, einer für die histopathologische Analyse und der andere für die Transkriptionsanalyse durch qRT-PCR.

Die chirurgischen Proben werden für die Transkriptionsaktivität, Gewebe-Pantheteinase-Aktivität und den Aufbau einer TMA-Bank (Tissue MicroArrays) für die Immunhistochemie verwendet.

Der erwartete Nutzen besteht in der Validierung eines neuen IBD-Prognosemarkers für die Schwere der Erkrankung oder möglicherweise für die Bewertung des therapeutischen Ansprechens.