Исследование маркеров воспаления (VNN1) при болезни Крона и язвенном колите. (VANIN)

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) включают болезнь Крона и язвенный колит. Точное происхождение ВЗК до сих пор неизвестно. На сегодняшний день текущая гипотеза патогенеза заболевания состоит в том, что ВЗК возникает в результате нарушения регуляции иммунного ответа слизистой оболочки на микробную флору кишечника у генетически предрасположенных хозяев. Гомеостаз кишечника зависит от взаимодействия между иммунными и эпителиальными клетками. Эпителиальные клетки представляют собой первую линию защиты, они тесно связаны с подлежащей лимфоидной тканью, ассоциированной с кишечником, и их изменение приводит к потере тканевого гомеостаза.

Ванин-1 (Vnn1 у мышей, VNN1 у людей) представляет собой эпителиальную пантеиназу, которая регулирует клеточный ответ на стресс.

Этот эктофермент гидролизует пантеин, производное витамина B5, с образованием цистеамина в тканях и регенерацией пантотената. Предыдущие исследования показали, что мыши Vnn1 KO были более устойчивы к экспериментальному колиту, а введение цистамина (окисленная форма цистеамина) восстанавливало их восприимчивость к колиту. Кроме того, анализ экспрессии VNN1 у пациентов с ВЗК показывает, что высокая экспрессия VNN1 связана с тяжелыми клиническими проявлениями. Таким образом, анализ экспрессии VNN1 может представлять собой хороший прогностический маркер.

В недавно опубликованной статье мы охарактеризовали среди ретроспективной когорты из 500 пациентов с ВЗК и контролей новые SNP (однонуклеотидные полиморфизмы) в промоторе VNN1 и показали их связь с заболеваемостью ВЗК и высокой экспрессией VNN1. Это предполагает, что ген VNN1 может быть новым маркером предрасположенности к ВЗК.

У мышей экспрессия Vnn1 жестко регулируется активацией факторов транскрипции PPARa и PPARg. Интересно, что один из SNP, идентифицированных у пациентов, участвует в сайте связывания PPARg. Интересно, что препараты, относящиеся к семейству 5-АСК, которые обычно используются при ВЗК, обладают потенциалом агониста PPARгамма. Таким образом, количественная оценка уровней VNN1 у пациентов, получающих терапию 5-АСК, может помочь прогнозировать ответ на терапию и выбрать пациентов с наибольшей пользой для этой терапии.

Цель этого нового проекта — расширить наш первоначальный анализ. Исследование будет проспективным, моноцентрическим и контролируемым. Его основная цель - оценить уровень экспрессии VNN1 в слизистой оболочке толстой кишки между пациентами с ВЗК и контрольными субъектами, чтобы подтвердить корреляцию между высокой экспрессией VNN1 и ВЗК. В связи с его перспективным характером мы также попытаемся связать уровень экспрессии VNN1 с конкретными эндофенотипами (тяжестью и/или локализацией поражений, качеством ответа на терапию). Наконец, мы проведем скрининг пациентов на ранее идентифицированные SNP, чтобы интегрировать эту информацию в интерпретацию результатов анализа экспрессии.

Это исследование запланировано на 2 года. Будут сформированы две группы пациентов: одна группа будет включать пациентов с ВЗК, наблюдаемых в "Service de Gastro-entérologie du Pr Grimaud à l'Hôpital Nord", а другая группа будет составлять контрольную когорту, включая лиц, которым была предложена скрининговая колоноскопия для семейная история рака толстой кишки или полипов, или синдрома раздраженного кишечника.

Исследователь должен будет заполнить анкету для каждого включенного пациента, собрав информацию о возрасте, поле, прошлой истории болезни, принимаемых лекарствах, симптомах пищеварения и показаниях колоноскопии.

У пациентов с ВЗК будет первый набор биопсий (n = 10) и образцы крови, собранные под общей анестезией во время колоноскопии, запланированной в обычном последующем наблюдении за их ВЗК; второй набор аналогичных образцов будет собран в течение следующих 12 месяцев, если эндоскопический контроль оправдан с медицинской точки зрения. У контрольных субъектов будет только один набор образцов биопсии и крови, собранных под общей анестезией во время колоноскопии. В конкретном случае пациентов с ВЗК, которым требуется хирургическое вмешательство, небольшой фрагмент резекции будет взят ex vivo как на здоровых, так и на патологических участках.

Образец крови будет служить для количественного определения активности сывороточной пантетиназы VNN1 и генетического исследования SNP.

Биопсия толстой кишки будет получена в двух экземплярах из 5 различных областей подвздошной кишки, одна для гистопатологического анализа, а другая для анализа транскрипции с помощью qRT-PCR.

Хирургические образцы будут использоваться для определения транскрипционной активности, активности тканевой пантетиназы и построения банка TMA (Tissue MicroArrays) для иммуногистохимии.

Ожидаемые преимущества заключаются в проверке нового прогностического маркера ВЗК для оценки тяжести заболевания или, возможно, для оценки терапевтического ответа.