Studio dei marcatori infiammatori (VNN1) nella malattia di Crohn e nella colite ulcerosa. (VANIN)

Le malattie infiammatorie intestinali (IBD) includono il morbo di Crohn e la colite ulcerosa. L'origine precisa di IBD è sconosciuta fino ad ora. Oggi, l'attuale ipotesi sulla patogenesi della malattia è che l'IBD derivi da una risposta immunitaria della mucosa disregolata alla flora microbica intestinale in ospiti geneticamente suscettibili. L'omeostasi intestinale dipende dalle interazioni tra cellule immunitarie ed epiteliali. Le cellule epiteliali sono la prima linea di difesa, sono strettamente collegate al tessuto linfoide associato all'intestino sottostante e la loro alterazione provoca la perdita dell'omeostasi tissutale.

La vanina-1 (Vnn1 nei topi, VNN1 negli esseri umani) è una panteinasi epiteliale che regola la risposta cellulare allo stress.

Questo ectoenzima idrolizza la panteteina derivata dalla vitamina B5 per fornire cisteamina ai tessuti e rigenerare il pantotenato. Precedenti studi hanno dimostrato che i topi Vnn1 KO erano più resistenti alla colite sperimentale e la somministrazione di cistamina (forma ossidata di cisteamina) ripristinava la loro suscettibilità alla colite. Inoltre, l'analisi dell'espressione di VNN1 nei pazienti con IBD mostra che un'elevata espressione di VNN1 è associata a gravi caratteristiche cliniche. Pertanto, l'analisi dell'espressione di VNN1 potrebbe rappresentare un buon marcatore prognostico.

In un recente articolo pubblicato, abbiamo caratterizzato in una coorte retrospettiva di 500 pazienti con IBD e controlli nuovi SNP (polimorfismi a singolo nucleotide) nel promotore VNN1 e mostrato la loro associazione con l'incidenza di IBD e l'alta espressione di VNN1. Ciò ha suggerito che il gene VNN1 potrebbe essere un nuovo marker di predisposizione dell'IBD.

Nel topo, l'espressione di Vnn1 è strettamente regolata dall'attivazione dei fattori di trascrizione PPARa e PPARg. È interessante notare che uno degli SNP identificati nei pazienti partecipa a un sito di legame PPARg. È interessante notare che i farmaci correlati alla famiglia di 5-ASA che sono comunemente usati nell'IBD, hanno un potenziale agonista PPARgamma. Pertanto, quantificare i livelli di VNN1 nei pazienti sottoposti a terapia con 5-ASA potrebbe aiutare a prevedere la risposta alla terapia e selezionare i pazienti con il massimo beneficio per questa terapia.

Lo scopo di questo nuovo progetto è quello di estendere la nostra analisi iniziale. Lo studio sarà prospettico, monocentrico e controllato. Il suo obiettivo primario è valutare il livello di espressione di VNN1 nella mucosa del colon tra pazienti con IBD e soggetti di controllo per confermare la correlazione tra alta espressione di VNN1 e IBD. In relazione alla sua natura prospettica, si cercherà anche di associare il livello di espressione di VNN1 a specifici endofenotipi (gravità e/o localizzazione delle lesioni, qualità della risposta alla terapia). Infine, esamineremo i pazienti per gli SNP precedentemente identificati per integrare queste informazioni nell'interpretazione dei risultati dell'analisi di espressione.

Questo studio è pianificato su 2 anni. Saranno costituiti due gruppi di pazienti: un gruppo comprenderà pazienti IBD seguiti nel "Servizio di Gastro-entérologie du Pr Grimaud à l'Hôpital Nord" e l'altro gruppo costituirà la coorte di controllo comprendente persone a cui è stata proposta una colonscopia di screening per storia familiare di cancro al colon o polipi, o per la sindrome dell'intestino irritabile.

Lo sperimentatore dovrà compilare un questionario per ogni paziente incluso, raccogliendo informazioni su età, sesso, storia medica passata, farmaci assunti, sintomi digestivi e indicazione della colonscopia.

I pazienti con IBD avranno una prima serie di biopsie (n = 10) e campioni di sangue raccolti in anestesia generale durante una colonscopia pianificata nel loro consueto follow-up IBD; una seconda serie di campioni simili verrà raccolta entro i prossimi 12 mesi se un controllo endoscopico è giustificato dal punto di vista medico. I soggetti di controllo avranno un solo set di biopsia e campioni di sangue raccolti in anestesia generale durante la loro colonscopia. Nel caso particolare di pazienti con IBD che necessitano di intervento chirurgico, un piccolo pezzo della resezione sarà prelevato ex-vivo sia su aree sane che patologiche.

Il campione di sangue servirà per la quantificazione dell'attività panteteinasica serica del VNN1 e per lo studio genetico degli SNP.

Le biopsie del colon saranno ottenute in duplicato da 5 diverse aree ileocoloniche, una per l'analisi istopatologica e l'altra per l'analisi trascrizionale mediante qRT-PCR.

I campioni chirurgici saranno utilizzati per l'attività trascrizionale, l'attività panteteinasica tissutale e la costituzione della banca TMA (Tissue MicroArrays) per l'immunoistochimica.

I benefici attesi sono la convalida di un nuovo marcatore prognostico IBD per la gravità della malattia o potenzialmente per la valutazione della risposta terapeutica.