Ulosteen mikrobiston transplantaatio ärtyvän suolen oireyhtymässä

1. Tausta

   Ärtyvän suolen oireyhtymä (IBS) on krooninen, heikentävä, toiminnallinen maha-suolikanavan sairaus, jonka arvioitu esiintyvyys Euroopassa on 10–15 % (Ford et al.). Nämä oireet voivat olla heikentäviä ja heikentää merkittävästi elämänlaatua erityisesti vakavammin sairailla.

   Muutokset suoliston mikrobiotan toiminnassa ja koostumuksessa otetaan yhä useammin huomioon mahdollisina etiologisina tekijöinä. (Collins et ai.). Yksi tämän käsitteen vahvimmista indikaattoreista on merkittävästi lisääntynyt IBS:n ​​kehittymisriski akuutin gastroenteriittijakson jälkeen. Prospektiiviset tutkimukset ovat osoittaneet, että 3–36 % enteroinfektioista johtaa uusiin, pysyviin IBS-oireisiin. (Gwee et al., Neal et ai.) Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että suoliston mikrobiston monimuotoisuus, stabiilisuus ja metabolinen aktiivisuus ovat muuttuneet IBS-potilailla verrattuna terveisiin yksilöihin (Jeffrey et al.). Vaikka IBS:lle ei ole tunnistettu erillistä mikrobien allekirjoitusta, useat tutkimukset ovat osoittaneet suoliston mikrobikoostumuksen, joka on rikastettu Firmicutesilla sekä vähentyneen Bacteroides-määrien kanssa (Jeffery et al, Rajilic-Stojanovic et al.).

   Ulosteen mikrobisiirto (FMT) on osoittautunut turvalliseksi, edulliseksi ja tehokkaaksi hoidoksi toistuvaan Clostridium difficile -infektioon ja saavuttanut jopa 90 %:n paranemisasteen joissakin tutkimuksissa, joilla on erittäin hyvä sivuvaikutus ja haittavaikutusprofiili (van. Nood et ai.). Tässä tutkimuksessa tutkijat haluavat tutkia, johtaako suoliston terveiden mikrobiotaprofiilien palauttaminen terveiltä luovuttajilta saatujen ulosteiden avulla parempiin kliinisiin tuloksiin IBS-potilailla.

   Autologista ulosteen mikrobiotasiirtoa, jossa käytetään osallistujien omien ulosteiden uudelleeninfuusiota, on aiemmin käytetty lumelääkkeenä FMT:tä käyttävissä tutkimuksissa (Vrieze et al.)

2. Opintojen suunnittelu

   Tutkimuksen suunnittelu on prospektiivinen satunnaistettu, lumekontrolloitu tutkimus, joka suoritetaan yhdessä paikassa. Tutkimus käsittää yhteensä neljä käyntiä 8 viikon aikana. Ensimmäinen käynti on seulontakäynti, jossa arvioidaan kelpoisuutta tutkimukseen. Toinen käynti on hoitokäynti, jossa potilaat saavat FMT:n käyttämällä terveen luovuttajan tai lumelääkettä. Tässä tutkimuksessa lumelääkkeenä käytetään autologista ulosteen mikrobiotasiirtoa. Seurantakäynnit tehdään 4 ja 8 viikon kuluttua hoidon jälkeen.

   Tutkimukseen otetaan mukaan jopa 50 IBS-potilasta. Kaikilla potilailla on vakiintunut IBS-diagnoosi Rooma III -kriteerien mukaisesti. Koehenkilöt rekrytoidaan Corkin gastroenterologian avohoidossa olevista IBS-potilaista. Koehenkilöt jaetaan satunnaisesti joko hoitoryhmään tai lumelääkekontrolliryhmään.

3. Lahjoittajien valinta:

   Luovuttajan uloste hankitaan terveiltä luovuttajilta. Luovuttajia haastatellaan sen varmistamiseksi, että he ovat hyvässä kunnossa, ja heille suoritetaan seulontakysely, jolla tunnistetaan mahdollinen ulosteen mukana siirtyvä tartuntariski. Tietyt poissulkemiskriteerit ovat voimassa, ja luovuttajien uloste ja seerumi testataan. Luovutusprosessi on turvallinen luovuttajalle (Bakken ym.). Luovuttajaehdokkaana käytetään ensisijaisesti valittua tervettä yksilöä, jolla on monipuolinen mikrobikoostumus, ellei vastaanottaja halua määrätä nimetyn luovuttajan käyttöä.

   3.1 Luovuttajien poissulkemiskriteerit

   Tartuntataudin aiheuttajan riski Tunnettu Ihmisen immuunikatovirus, hepatiitti B tai C. Tunnettu altistuminen HIV:lle tai virushepatiittille Tunnettu nykyinen tartuntatauti Suuren riskin elämäntapatekijät Tekijät, jotka lisäävät Creutzfeldt-Jakobin taudin riskiä. Ruoansulatuskanavan rinnakkaissairaudet Aiemmat tulehdukselliset suolistosairaudet Aiemmat IBS-sairaudet Aiemmat maha-suolikanavan maligniteetit tai polypoosit Aiemmat suuret maha-suolikanavan leikkaukset Tekijät, jotka voivat vaikuttaa tai vaikuttavat suoliston mikrobiotan koostumukseen. Antibiootit edellisten 3 kuukauden aikana Tärkeimmät immunosuppressiiviset lääkkeet Systeemiset antineoplastiset lääkkeet Muita vastaanottajakohtaisia ​​huomioita Mahdollisen allergeenin äskettäinen nauttiminen, jos vastaanottajalla on tunnettu allergia. Systeeminen autoimmuniteetti Atooppiset sairaudet Krooninen kipuoireyhtymä Lihavuus.

   3.2 Luovuttajien testaus

   Seuraavat seulontatestit suoritetaan kaikille mahdollisille luovuttajille:

   Ulostetestaus Clostridium difficile polymeraasiketjureaktiolla (PCR) PCR Shigellalle, Salmonellalle, E.coli verotoksiinille, Campylobacter Cryptosporidium Ovalle ja loisille Serologinen testaus HIV, tyypin 1 ja 2 hepatiitti A IgM Hepatiitti B pinta-antigeeni, hepatiitti B ydinvasta-aine ja hepatiitti B pintavasta-aine.

   Hepatiitti C seuloi ihmisen T-soluleukemiaviruksen (HTLV) Rapid Plasma Reagin ja fluoresoiva treponemaalinen vasta-aine imeytyy.

4. FMT-menettelyprotokolla:

Seuraavia menettelyjä tulee noudattaa luovuttajan ja vastaanottajan valmistelussa sekä luovuttajan ulosteen valmistelussa ja antamisessa.

1. Luovuttajan valmistelu Voidaan käyttää hellävaraista osmoottista laksatiivia toimenpidettä edeltävänä iltana. Anna ulostenäyte toimenpiteen aamuna.
2. Vastaanottajan valmistelu Suolen normaalivalmiste ennen kolonoskopiaa FMT:tä edeltävänä päivänä.

3. Ulosteen valmistelu Kun luovuttaja on kulkenut ulosteen läpi, se siirretään välittömästi anaerobiseen kuoppaan käsittelyä varten.

   Uloste laimennetaan ja suodatetaan, jolloin saadaan nestemäinen liete. Nestemäinen uloste laitetaan sitten anaerobiseen pulloon ja siirretään antokohtaan.

4. Ulosteiden hallinta. Uloste tulee antaa mahdollisimman pian sen valmistamisen jälkeen, enintään 2 tunnin kuluttua.

   FMT suoritetaan endoskooppisesti. Kaikille potilaille tehdään kolonoskopia ja nestemäinen uloste infusoidaan endoskoopin läpi.

   Ihannetapauksessa kaikille potilaille tehdään saman istunnon aikana myös pohjukaissuolen ulosteinfuusio esphogastrodoudenoskopialla. Jos potilas ei kuitenkaan suostu tähän, sitä ei pidetä protokollan rikkomisena.

5. Opiskelumenettelyt:

   Tutkimus suoritetaan tässä pöytäkirjassa kuvatulla tavalla ja ICH:n Good Clinical Practice -ohjeiston sekä Helsingin julistuksen [Liite A] mukaisesti. Tietoinen suostumus hankitaan ennen tutkimukseen liittyvien toimenpiteiden suorittamista.

   5.1.1 Seulontakäynti (käynti 1)

   Kaikille mahdollisille koehenkilöille selvitetään tutkimuksen tavoite ja suoritettavat menettelyt. Tutkittavia pyydetään sitten lukemaan aihetietolomake ja lukemaan ja allekirjoittamaan tietoinen suostumuslomake, ja he saavat allekirjoitetun kopion. Seuraavat arvioinnit suoritetaan käynnillä 1 Tietoinen suostumus Väestötiedot Lääketieteellinen ja lääkityshistoria Rooma III -kyselylomake Kelpoisuuskriteerien arviointi Elintoiminnot Fyysinen tutkimus, ruumiinpaino, pituus ja BMI-arviointi Ruokailutiheyskyselylomake IBS-oireiden arviointipisteet Sairaalan ahdistuneisuus ja masennusasteikko Kansainvälinen fyysinen aktiivisuus Indeksi Verinäytteet Ulostenäytteet

   Jos potilas täyttää kelpoisuusvaatimukset, hän palaa 28 päivän kuluessa ulosteen mikrobiotan siirtoon.

   5.1.2 Hoitokäynti (käynti 2)

   Vierailulla 2 potilaille tehdään ulosteen mikrobisiirto. Ennen toimenpidettä kaikille potilaille on suoritettava normaali suolen valmistelu. Käynnissä 2 seuraavat arvioinnit suoritetaan kaikille potilaille ennen FMT:tä. Lyhyt haastattelu edellisistä viikoista elintoimintojen ja fyysisen tutkimuksen aikana. Kelpoisuuden arviointi Tietoinen suostumus endoskopiaan.

   Luovuttajan uloste annetaan potilaalle endoskooppisesti. Kaikille potilaille tehdään kolonoskopia ja luovuttajan uloste infusoidaan kolonoskopin läpi. Päätös pohjukaissuolen ja paksusuolen infuusion suorittamisesta määräytyy potilaan mieltymysten mukaan. Jos potilas suostuu, hänelle tehdään myös esphogastrodoudenoskopia ja luovuttajan uloste infusoidaan gastroskoopin kautta potilaan pohjukaissuoleen.

   Toimenpiteen jälkeen patentin toipuminen hoidetaan standardien endoskopiaohjeiden mukaisesti.

   5.1.3 Käynti 3 ja 4 – seurantakäynnit.

   Käynnillä 3 ja 4 potilaat käyvät läpi seuraavan haastattelun edellisistä viikoista. Elintoiminnot ja fyysinen tutkimus sis. BMI Samanaikainen lääkitys Haittatapahtumien seuranta Verinäytteet kliinisiä ja tutkimuksia varten. Ulostenäyte (kerätty kotona ennen käyntiä). Ruokavälin kyselylomake IBS-oireiden arviointipisteet Globaali arviointikysymys. Sairaalan ahdistuneisuus ja masennusasteikko Kansainvälinen fyysisen aktiivisuuden indeksi

   5.2 Koehenkilöiden poistaminen tutkimuksesta

   Koehenkilöt poistetaan tutkimuksesta, jos tutkittava; päättää itsenäisesti vetäytyä opinnoista; jos hänelle kehittyy jokin sairaus, joka on ristiriidassa alkuperäisten kriteerien kanssa; Tutkijan harkinnan mukaan katsotaan milloin tahansa sopimattomaksi jatkamaan tutkimusta.

   5.3 Samanaikainen lääkitys

   Koehenkilöiltä kysytään heidän lääkityshistoriansa. Otettujen lääkkeiden tiedot kirjataan potilastapausmuistiinpanoihin ja tapausraporttilomakkeeseen

   5.4 Päätepisteiden arvioinnit

   Koehenkilöille suoritetaan seuraavat päätepisteiden arvioinnit: lääketieteellisen ja kirurgisen historian muutosten arviointi lähtötilanteen/hoitokäyntien jälkeen, IBS:n ​​vaikeusaste/QOL-pisteet, ulostenäytteen arviointi/analyysi, verinäyteanalyysi, fyysinen arviointi, samanaikainen lääkitys ja haittatapahtumat.

   Koehenkilön turvallisuuden varmistamiseksi tutkimuksen aikana suoritetaan seuraavat arvioinnit: elintoiminnot, haittatapahtumien seuranta, fyysinen tutkimus ja laboratorioarvioinnit

6. Biologiset näytteiden keräämiset ja analyysit:

6.1 Veri

Jokaisella käynnillä kerätään verta kliinistä hematologista ja biokemiallista analyysiä ja sytokiinianalyysiä varten.

Hematologiset ja biokemialliset paneelit tehdään hoidon standardin mukaisesti - Täysi verenkuva (mukaan lukien hemoglobiini, valkosolujen määrä, verihiutaleiden määrä, hematokriitti ja valkosolujen erotus), erytrosyyttien sedimentaationopeus (ESR), natrium, kalium, kloridi, urea , kreatiniini, proteiini, albumiini, crp, maksan toimintakokeet ja kvantitatiiviset immunoglobuliinit (IgA, Immunoglobulin G, IgM). Osallistujille tehdään myös HIV-, hepatiitti B-, hepatiitti C-, HTLV- ja kuppaseulonnat vierailulla 1. Tämä analyysi suoritetaan Corkin yliopistollisen sairaalan (CUH) laboratorioissa. Kaikki laboratoriotulokset tarkistetaan ja raportit allekirjoitetaan tutkijoiden kanssa ja kirjataan potilaiden tapausrepot-lomakkeeseen (CRF).

Tulehduksellisten immuunimerkkiaineiden, mukaan lukien sytokiinit, seerumianalyysiä varten tehdään tutkimusveret, jotka käsitellään University College Corkin (UCC) Alimentary Pharmabiotic Centren laboratorioissa.

6.2 Ulostenäyte

Ulostenäytteet otetaan jokaisella käynnillä. Bakteeri-DNA uutetaan kunkin kohteen ulostenäytteistä ja mikrobiotan koostumus määritetään sekvensoimalla monistettuja bakteerien ribosomaalisia ribonukleiinihappogeenejä (RNA) ennen ulosteen mikrobiotan siirtoa ja sen jälkeen. Ulostenäytteistä analysoidaan myös viruspartikkelit ja suoritetaan fageomitutkimukset.

6.3 Biopsia / suolistokudosten kerääminen, varastointi ja analyysi

Jos potilas suostuu, hänen endoskopiansa aikana suoritetaan FMT-biopsia suolistokudoksesta. Kudosnäytteet kerätään elatusaineeseen ja säilytetään 4 0 C:ssa, kunnes ne toimitetaan laboratorioon UCC:ssä. Mikrobiootan koostumusanalyysi suoritetaan suoraan pyrosekvensoimalla 20 000 - 40 000 16S rRNA -geeniamplikonia kohdetta kohden (julkaistu: 20571116). UCC:n bioinformatiikkatiimin suorittama sekvenssin luominen ja analyysi määrittää yksilöiden mikrobiotan koostumuksen.

6.4 Analyysit

Kaikkien kerättyjen näytteiden analyysit suoritetaan CUH- ja/tai UCC/Teagasc-laboratorioissa. Joissakin tapauksissa analyysit voidaan tehdä yhteistyössä UCC:n ulkopuolisen kolmannen osapuolen kanssa, mukaan lukien lääkeyhtiöt, mikä saattaa edellyttää näytteiden toimittamista tälle organisaatiolle. Nämä näytteet koodataan ja tunnistetaan vain anonymisoiduilla näytetunnistenumeroilla. Lisäksi näytteitä voidaan säilyttää ja käyttää analyyseihin tulevissa tutkimuksissa. Jälleen näytteet koodataan ja tunnistetaan vain käyttämällä anonymisoituja näytetunnistenumeroita.

7. Tilastot ja tutkimuksen teho:

Tässä tutkimuspopulaatiossa lumelääkevasteen ennustetaan olevan 40 %. Tutkimuksessa on riittävä teho havaita vähintään 15 %:n lisähyöty hoitoryhmässä lumelääkkeeseen verrattuna.

Ensisijaiset ja toissijaiset tavoitteet analysoidaan standardiparametristen ja ei-parametristen tilastotekniikoiden avulla FMT:n tehokkuuden testaamiseksi. Tutkimustavoite arvioidaan pitkälle kehitetyn biostatistisen analyysin avulla, jotta voidaan tunnistaa mikrobiotaprofiili, joka ennustaa vasteen FMT:hen.

8. Muutokset tutkimuksen tai suunniteltujen analyysien suorittamisessa:

Hätätilanteita lukuun ottamatta mitään merkittäviä muutoksia protokollaan (eli sellainen, joka vaikuttaa koehenkilöiden turvallisuuteen, tutkimuksen laajuuteen, tutkimuksen tieteelliseen laatuun) ei toteuteta ennen kuin riippumaton eettinen komitea (IEC) on tehnyt päätöksensä. tarkistanut, hyväksynyt ja dokumentoinut pöytäkirjan muutoksen kirjallisesti. Muutokset sisältävät muutoksia tutkijaan ja tutkijoihin tai toimipaikan osoitteeseen jne.

Kun muutos tehdään koehenkilöiden riskin poistamiseksi tai vähentämiseksi, se voidaan ottaa käyttöön ennen IEC:n tarkistusta ja hyväksyntää. Tutkijan tulee ilmoittaa IEC:lle muutoksesta kirjallisesti 5 työpäivän kuluessa täytäntöönpanosta.

Hätätilanteessa tutkijan on käynnistettävä kaikki tarpeellisiksi katsomansa lääketieteelliset toimenpiteet, kuitenkin kaikki tällaiset toimenpiteet (vähäiset tai merkityksettömät) muuttuvat (esim. Tilasto-, typografiset virheet, kirjoitusvirheet jne.) ei tehdä ennen kuin riippumaton eettinen toimikunta on tarkistanut ja hyväksynyt mainitun muutoksen ja tutkija on toimittanut muutoksesta kertovan muistion.

9. Tutkijan velvollisuus:

Tutkimus suoritetaan sovellettavan hyvän kliinisen käytännön 21 Code of Federal Regulations 50, 56 ja 312 mukaisesti; International Conference of Harmonization (ICH) Hyvä kliininen käytäntö julkaistu liittovaltion rekisterissä; 9. toukokuuta 97 (nide 62, numero 90, sivut 25691-25709).

Tutkija suorittaa tai valvoo suoraan kaikkien tässä kuvattujen tai tässä kuvattuihin liittyvien palvelujen suorittamista korkeimpien lääketieteellisen ja kliinisen tutkimuksen standardien mukaisesti. Opintovastuun siirtäminen dokumentoidaan kirjallisesti.

Tutkijan ja mahdollisen avustavan tutkijan vastuulla on ymmärtää ja noudattaa protokollaa ja varmistaa, että myös kaikki avustavan henkilökunnan jäsenet ymmärtävät ja noudattavat protokollaa.

10. Mainonta:

Riippumattoman eettisen toimikunnan tulee hyväksyä kaikki aiheiden mainokset, olivatpa ne ammatti- tai kuluttajajulkaisuissa, radiossa, televisiossa tai millä tahansa muulla tavalla.

11. Institutionaalinen katsaus:

Sivuston, tutkijan, protokollan, tietoisen suostumuksen lomakkeen ja kaikki muut tähän tutkimukseen liittyvät asiakirjat hyväksyy:

Corkin opetussairaaloiden Cork Research Ethics Committee, Lancaster Hall, 6 Little Hanover Street, Cork.

Tutkimus ei aloiteta ennen kuin IEC on hyväksynyt tutkimussuunnitelman ja tutkittavan suostumuslomakkeen sekä mahdolliset mainokset, päiväkirjat ja ohjeet koehenkilöille. IEC-hyväksyntä dokumentoidaan kirjallisesti tutkijalle.

12. Aiheen suostumus:

Riippumattoman eettisen toimikunnan hyväksyntä kirjalliselle tietoiselle suostumukselle hankitaan ennen sen käyttöä.

Tämä suostumuslomake on kaikkien ihmisten suojelua koskevien määräysten mukainen.

Jokainen koehenkilö allekirjoittaa ja päivämäärää tietoisen suostumuslomakkeen toimiakseen osallistujana tutkimukseen. Allekirjoitettu kopio suostumuslomakkeesta annetaan tutkittavalle ja allekirjoitettu kopio jää tutkijalle potilaan tapausmuistiinpanoihin.

Koehenkilöt voivat peruuttaa osallistumisen tutkimukseen milloin tahansa ilman haittaa. Lisäksi tutkija voi poistaa koehenkilöt tutkimuksesta, jos se on koehenkilöiden edun mukaista. Syy koehenkilön tutkimuksesta vetäytymiseen dokumentoidaan tutkittavan tapausmuistiinpanoissa.

13. Tiedonkeruu:

Kaikki kerätyt tiedot tallennetaan tutkittavien tapausraporttilomakkeeseen ja tietokonetietokantaan, niitä käsitellään ja säilytetään turvallisesti luottamuksellisissa olosuhteissa. Tutkimusasiakirjat tallennetaan Corkin yliopistollisen sairaalan lukitussa toimistossa olevaan lukittuun metalliseen arkistokaappiin ja tietokantoihin, jotka edellyttävät sisäänpääsykoodia.

Tutkija on vastuussa siitä, että kaikki lähdeasiakirjat (esim. tutkimus- ja/tai potilastiedot) täytetään ja niitä ylläpidetään tutkimusprotokollan ja hyvän kliinisen käytännön mukaisesti, ja ne ovat saatavilla paikan päällä.

Tämän tutkimuksen lähdedokumentteja ovat sairaalatiedot ja toimenpideraportit sekä tiedonkeruulomakkeet. Näitä asiakirjoja käytetään tietojen syöttämiseen CRF:iin.

Kaikkia tavanomaisia ​​varotoimia noudatetaan sen varmistamiseksi, että asiakirjat säilytetään turvallisesti luottamuksellisissa olosuhteissa. Kaikkien potilaiden näytteiden ja tutkimustietueiden tunnistetiedot paitsi allekirjoitettu suostumus koodataan ja tietokonetietokannat ottavat käyttöön koodeja potilaiden nimien sijaan. Lisäksi tietokoneen käyttö edellyttää sisäänpääsykoodia.

Jos tutkittava ei jostain syystä suorita tutkimusta loppuun, tapausmuistiinpanoihin merkitään selitys.

Tiedonsyöttö-/hallintamenetelmät ovat tutkimusprotokollan ja hyvän kliinisen käytännön mukaisia. Kaikkien opiskelijoiden tunnistetiedot tehdään yksilöllisten opintonumeroiden mukaan. Koehenkilöiden nimeä tai muita tunnistetietoja ei sisällytetä mihinkään sähköiseen tutkimustietotiedostoon tai CRF:ään

14. Institutionaalinen katsaus:

Sivuston, tutkijan, protokollan, tietoisen suostumuksen lomakkeen ja kaikki muut tähän tutkimukseen liittyvät asiakirjat hyväksyy:

Corkin opetussairaaloiden Cork Research Ethics Committee, Lancaster Hall, 6 Little Hanover Street, Cork.

Tutkimus ei aloiteta ennen kuin IEC on hyväksynyt tutkimussuunnitelman ja tutkittavan suostumuslomakkeen sekä mahdolliset mainokset, päiväkirjat ja ohjeet koehenkilöille. IEC-hyväksyntä dokumentoidaan kirjallisesti tutkijalle.

15. Rahoitus- ja vakuutuspolitiikka:

Tätä tutkimusta sponsoroi University College Corkin Alimentary Pharmabiotic Centre, ja sen korvaa University College Corkin vastuuvakuutus ihmistutkimuksesta.

16. Haitalliset ja vakavat haittatapahtumat:

Haittatapahtumia ja vakavia haittatapahtumia seurataan ja kirjataan koko tutkimuksen ajan potilasturvallisuuden varmistamiseksi.

Jokaisella käynnillä koehenkilöiltä kysytään mahdollisista haittatapahtumista, joita he ovat saaneet kokea viimeisen käynnin jälkeen.

Kaikki raportoidut haittatapahtumat (AE) koodataan käyttämällä COSTART5-sanakirjaa, ja luettelossa on dokumentoitu kesto, vakavuus, suhde tutkimushoitoon, koehenkilön tulos ja mahdollinen hoito.