Uuden leivintuotteen ravintolisien vaikutuksen mittaaminen suoliston mikrobiotaan ja kolesteroliaineenvaihduntaan

Ensimmäiset tulokset PreBIOil-projektin in vitro -testauksesta ovat rajanneet oliivijauhon kyvyn moduloida ihmisen suolen mikrobipopulaatiota tavalla, joka on verrattavissa inuliiniin, joka on tunnistettu polysakkaridiksi, jolla on kapasiteettia prebiootti. Näiden tulosten ja muiden kirjallisuuksien perusteella on formuloitu leipomotuote PreBIOil. Tuote sisältää oliivi-, tattari-, herne- ja kastanjajauhoja.

Tutkimuksen kokonaistavoitteena on arvioida, voiko tattari-, herne- ja kastanjajauhoon sekoitettuun oliivijauhosta valmistetun leipomotuotteen lisääminen ruokavalioon muuttaa suoliston mikrobiston profiilia ja plasman kolesterolia, erityisesti LDL:ää. Tutkimus on toteutettu ravintolisänä, kaksoissokkoutettuna, satunnaistettuna, rinnakkain kontrolliryhmän kanssa, jossa verrataan seuraavaa tuotetta:

i) uusi leipomotuote suunniteltu tutkimus PreBIOil (testi); ii) leipomotuotteen isoenergeettinen ohjaus (kontrolli).

Kokeessa täydennetyn ruoan kuvaus Testituote on uusi leivottu tuote, joka on formuloitu oliivien, tattari-, herne- ja kastanjajauhoseoksella ja on suolaisen keksin näköinen.

Osallistujien tulee kuluttaa päivittäin noin 90 grammaa testi- tai kontrollituotetta. Kunkin tuote-erän tarkat määrät määritetään valmiin tuotteen ravitsemuksellisten ominaisuuksien arvioinnin jälkeen, jotta molemmilla tuotteilla saavutetaan sama kalorien saanti.

Digestoituvuus, käymiskyky ja mikrobiston modulaatio Tattari katsotaan ei-viljaksi, joka sisältää kuidun, kivennäisaineiden ja vitamiinien, kuten B2 ja B6, lisäksi myös antioksidanttiyhdisteiden lähdettä flavonoidipitoisuuden ansiosta.

Hernejauho sisältää tärkeitä komponentteja ihmisen ruokavaliolle (tärkkelys, proteiini ja muut ravintoaineet). Herneiden nauttimiseen liittyvät terveyshyödyt johtuvat ensisijaisesti tärkkelyksen, proteiinin, kuidun, vitamiinien, kivennäisaineiden ja fytokemikaalien pitoisuudesta ja ominaisuuksista. Sirkkalehden sisäkalvon ja soluseinien sisältämä kuitu edistää ruoansulatuskanavan toimintaa. Hernejauhon tärkkelyspitoisuudelle on ominaista alhaisempi glykeeminen indeksi. Herneen proteiinit voivat tuottaa peptidejä, joilla on antioksidanttiaktiivisuutta. Herneiden vitamiini- ja kivennäisainepitoisuudella voi olla tärkeä rooli puutossairauksien, erityisesti seleenin ja folaatin puutteeseen liittyvien sairauksien ehkäisyssä. Herneet sisältävät erilaisia ​​fytokemikaaleja. Näitä ovat polyfenolit, joilla voi olla antioksidantteja ja syöpää estäviä, saponiinit, joilla on hypokolesteroleemiaa ja syövän vastaisia ​​vaikutuksia, ja galaktoosioligosakkaridit, jotka voivat aiheuttaa prebioottisia etuja paksusuolessa.

Kastanjajauhon ravintokomponentit koostuvat hiilihydraateista, proteiineista ja rasvasta koostumuksessa siten, että energia-arvo on noin 350-400 kcal / 100 g. Kastanjoilla on äänestetty positiivinen vaikutus suolistobakteerien aineenvaihduntaan, ja ne ovat pitkäketjuisten rasvahappojen C18:1 ja C18:2 sekä vitamiinien (E-vitamiini) lähde. Polyfenolien mahdollinen esiintyminen rajoittuu ulompiin kuoriin, jotka yleensä erotetaan hedelmistä jauhojen valmistuksen aikana. Oliivipastasta peräisin olevia jauhoja ei ole kuvattu tieteellisessä kirjallisuudessa ihmisen ruokavalion erityisten ravitsemuksellisten ominaisuuksien osalta. Oliivit ovat kuitenkin olennainen osa Välimeren ruokavaliota, jossa niitä käytetään syötäväksi tarkoitettuina oliiveina ja oliiviöljynä. Oliivihedelmä sisältää 50 % vettä, 22 % rasvaa, noin 19 % hiilihydraatteja ja noin 2 % proteiinia; polyfenolipitoisuus vaihtelee välillä 1-3 %. Oliivit kulutetaan joko oliiviöljynä tai syötäväksi tarkoitettuina oliiveina. Oliiveille on ominaista voimakas katkeruus, joka johtuu enimmäkseen dall'oleuropeiinista. Oleuropeiini voi saavuttaa 140 mg/g kuivapainoa kypsymättömissä oliiveissa, ja se vähenee ja hedelmän kypsyessä Syötäväksi tarkoitettuja oliiveja käsitellään kitkerän maun lieventämiseksi prosesseilla, kuten maserointi sooda ja käyminen suolavedessä. Makeuttamisprosessissa katkeruus kuitenkin menetti joitakin tärkeitä oliiveissa olevia yhdisteitä, kuten polyfenoleja ja kuituja. Ei ole näyttöä extra-neitsytoliiviöljyn polyfenolien kyvystä vähentää sydän- ja verisuonisairauksien riskiä, ​​mutta suuri osa oliivin ainesosien mahdollisista vaikutuksista yksinään tai synergiassa polyfenolien kanssa on vielä tutkimatta. Lisäksi suuri osa oliivien sisältämästä vesiliukoisesta fraktiosta, jonka välissä olevat kuidut ja polyfenolit, joilla on todistetusti hyödyllisiä vaikutuksia ihmisten terveyteen, ei poistu öljyntuotannon aikana. On näyttöä siitä, että jotkin fenolifraktiot, kuten sekoiridoidit, imeytyvät huonosti suolen limakalvoon ja ovat sitten käytettävissä paksusuolen mikroflooralle. Pohjimmiltaan öljyllä kokonaisuudessaan olisi suurin potentiaali ruoka-aineena, joka voi moduloida hyödyllisesti ihmisen symbioottisten mikro-organismien koostumusta ja aktiivisuutta, kuten on havaittu kokeellisesti muun tyyppisillä hedelmillä.

Paksusuolen fermentaation in vitro -simuloinnin avulla on havaittu, että oliivitahna pystyy jopa 180 °C:ssa 30 minuutin paistamisen jälkeen moduloimaan ihmisen suoliston mikrobiota prebioottisella vaikutuksella tai aiheuttamaan merkittävän bifidobakteerien lisääntymisen. Tällainen simulointi in vitro suoritettiin inkuboimalla 24 tuntia panosfermentointijärjestelmässä pH:n ja lämpötilan säätelyssä, minkä jälkeen viideltä terveeltä yksilöltä saatuja ulosteita oli siirrostettu. Oliivijauhossa, jauhoseoksessa ja testituotteessa olevien polyfenolien kokonaismäärän (testituotteessa esiintyvät pääasialliset antioksidantit) analyysi havaitsi kokonaispolyfenolien häviön paistamisen seurauksena 40 %.

Kliiniset tulokset Kliiniset tulokset ovat osoittaneet, että 100 g tattari jauhojen muodossa päivittäinen kulutus on vaikuttanut HDL/kolesterolisuhteen nousuun ja glukoosin sietokyvyn paranemiseen, ja viime aikoina on havaittu, että tattarista valmistettujen keksien kulutus on vähentänyt tulehduksen merkkiaineen, myeloperoksidaasin (MPO) seerumin tasoa sekä kokonaiskolesterolin alenemista ja paremman keuhkojen elinvoiman. Hiljattain tehty meta-analyysi useista interventiotutkimuksista, jotka koskivat ihmisen ruokavaliota palkokasveilla, mukaan lukien herneillä, osoittivat niiden kyvyn alentaa seerumin LDL-kolesterolitasoja.

Interventiotutkimuksia ruokavaliosta, jossa käytetään oliiviöljyjä, oliivien jalostuksen sivutuotteita ja oliivipohjaisia ​​tuotteita, on tehty terveillä vapaaehtoisilla ja koehenkilöillä, joilla on eriasteinen kardiovaskulaarinen riski. Näistä tutkimuksista on ilmoitettu käyttöön otettujen kokonaispolyfenolien päivittäiset annokset (muutamasta mg:sta 30 mg:aan vuorokaudessa, jopa 100 mg:aan päivässä) oliiviöljyn tyypistä riippuen sekä myös uutteiden rikastaminen. Nämä interventiot kestivät monissa tapauksissa noin kuukauden ja suurimmassa osassa tutkimuksia mitattiin verenkiertoelimistön antioksidanttisten ja tulehdusta ehkäisevien muutosten vaikutuksia sekä plasman lipidien arvoja ja muita oksidatiiviseen stressiin liittyviä parametrejä. Erityisesti tutkimuksessa "EUROLIVE", suurella terveiden yksilöiden otoksella, havaittiin, että oliiviöljyn fenolit kykenivät suojaamaan veren lipidejä hapettumiselta, lisäämään HDL-kolesterolin pitoisuutta sekä pelkistyneen ja hapettuneen glutationin välistä suhdetta, ei kuitenkaan muutoksia dell'F2-isoprostane.

Euroopan elintarviketurvallisuusviranomainen (EFSA) on vuonna 2011 hyväksynyt väitteen, jonka mukaan oliiviöljyn polyfenolit, erityisesti hydroksityrosoli, suojaavat LDL:ää hapettumiselta annoksella, joka on suurempi tai yhtä suuri kuin 5 mg/kg/vrk. Muut tutkimukset ovat myös osoittaneet, että oliiviöljyn polyfenolit liittyvät CRP:n vähenemiseen, aterogeenisen geenin ilmentymisen vähenemiseen verisoluissa ja verenpaineen laskuun. Vaikka on olemassa näyttöä oliiviöljyn polyfenolien kyvystä vähentää sydän- ja verisuonitautien riskiä, ​​suuri osa oliivin ainesosien mahdollisista vaikutuksista yksinään tai synergiassa on vielä tutkimatta. Lisäksi suurta osaa oliivin sisältämistä kuiduista ja polyfenoleista ei uuteta öljyn uuttoprosessissa, vaan ne eliminoidaan sivutuotteena.

Tutkimuksen perustelut Tattarijauho lisää kuitua ja flavonoideja, hernejauho sisältää matalan glykeemisen indeksin hiilihydraatteja, proteiinia ja on myös antioksidanttien lähde, kastanjajauho tuo prebioottisia aineita ja vitamiineja. Jauho-oliivi on oliivin hedelmä vesiliukoineen aineineen (esim. kuidut ja polyfenolit) sekä monityydyttymättömien ja kertatyydyttymättömien rasvahappojen, tokoferolien ja karotenoidien liukoisessa fraktiossa, jotka vain osittain läpäisevät ekstraneitsytoliivit. Nämä komponentit on suunniteltu enimmäkseen ekstra-neitsytoliiviöljyn ainesosiksi, ja ne ovat tieteellisesti osoittaneet edistävänsä lipidiaineenvaihduntaa ja plasman lipidirakennetta, sydämen terveyttä ja suojaa oksidatiiviselta stressiltä.

Saatavilla olevien kliinisten ja kokeellisten tutkimusten perusteella on ehdotettu, että oliivipastasta, tattarista, herneistä ja kastanjoista saatujen jauhojen seoksesta valmistetun leivonnaisen nauttimisella voi olla positiivisia vaikutuksia lipidiplasman biomarkkereihin ja suoliston mikrobiotaan (esimerkiksi lisääntyminen bifidobakteerit) aikuisilla osallistujilla, joiden plasman kolesterolipitoisuus on keskitasoa tai korkea, vaikka se ei olisi vielä patologista.

Vaatimustenmukaisuuslausunto Tämä tutkimus suoritetaan pöytäkirjan ja hyvän kliinisen käytännön (GCP) mukaisesti, kuten on kuvattu vuoden 1996 ICH GCP:ssä, US Code of Federal Regulationsissa (CFR) ja Helsingin julistuksessa. Allekirjoittamalla tämän pöytäkirjan tutkija sitoutuu noudattamaan näitä vaatimuksia.

Tutkimuksen tavoitteet

Tutkimuksen yleisenä tavoitteena on arvioida, pystyykö uuden leipomotuotteen, joka sisältää jauhoseosta oliivipastasta, tattarista, herneistä, kastanjoista, lisääminen ruokavalioon:

Ensisijaiset tavoitteet:

1. Ulosteen mikrobiotan profiili;
2. Plasman kokonaiskolesteroli-, LDL-, suhde/kokonais-LDL- ja HDL-arvot;
3. plasman triglyseridien tasot;
4. Apolipoproteiini ApoA-I, ApoB ja Lp (a).

Toissijaiset tavoitteet:

1. Antropometriset indeksit 2 Polyfenolien sekundaariset metaboliitit ihmisen bionesteissä 3. Plasman ja virtsan metaboliittien profiilit arvioituna massaspektrometrialla (MS); 4. Veren glukoosi- ja paastoinsuliinitasot; 5. C-reaktiivinen proteiini (PRC); 6. Erittäin herkkä C-reaktiivinen proteiini (hsPRC); 7. virtsan isoprostaani F2; 8. hapettunut LDL plasmassa.

Esittely kokeellinen suunnittelu Osallistujien vapaaehtoiset tunnistetaan ja rekrytoidaan Casa di Cura Eremo di Arcon (TN) avohoidossa. Osallistujille tiedotetaan tutkimuksen tavoitteista ja menetelmistä, ja heidät valitaan esivalinnassa mukaanotto-/poissulkemiskriteerien perusteella. Osallistuja allekirjoittaa tietoisen suostumuksen ja astuu studioon Casa di Cura Eremo di Arcon (TN) avohoidossa suoritetun T-1-käynnin jälkeen, jossa suoritetaan kliininen ja biokemiallinen terveydentila. Ruokailutottumusten asianmukaisen seurannan mahdollistamiseksi kelpoinen osallistuja täyttää ensimmäisen käynnin jälkeen ruokapäiväkirjaa.

Jos koehenkilöt ovat kelvollisia tutkimukseen kaikkien sisällyttämis- ja poissulkemiskriteerien perusteella, heidät satunnaistetaan saamaan joko lumelääkettä tai aktiivista integraatiota käynnillä T0.

Kliininen tutkimus sekä veren ja virtsan keräys suoritetaan noin 10 tunnin paaston jälkeen aloitusjakson alussa (käynti T-1). Kliiniset tutkimukset, verinäytteet, ulosteiden ja virtsan keräys suoritetaan käyntien T0, T1 aikana. Lisäruokapäiväkirjaa (4 peräkkäistä päivää) täytetään käynneillä T0 ja ennen T1:tä. Haittatapahtumat, lääkkeiden ja lisäravinteiden ottaminen kirjataan osallistujien toimesta erityiseen päiväkirjaan.

Tutkimukseen osallistuvia pyydetään myös täyttämään aistinvarainen arvio jokaisesta ruoasta, joka tarjotaan sokeana, ensimakuna ja 8 viikon lisäravinteen lopussa jokaisesta tuotteesta.

Tutkimusmenettely Osallistujien rekrytointi Osallistujat tunnistetaan ja rekrytoidaan Casa di cura Eremo di Arcon (TN) avohoidossa. Osallistujille tiedotetaan tutkimuksen tavoitteista ja menetelmistä, ja heidät valitaan esivalinnassa mukaanotto-/poissulkemiskriteerien perusteella. . Mikäli osallistuja on kelvollinen, hän allekirjoittaa tietoisen suostumuksen ja astuu studioon T-1-käynnillä, joka suoritetaan kliinisen ja biokemiallisen terveydentilan aikana. Koehenkilöt, jotka ovat kelvollisia tutkimukseen kaikkien sisällyttämis-/poissulkemiskriteerien perusteella, otetaan mukaan tutkimukseen ja satunnaistetaan saamaan ensimmäinen ravintolisä (testi tai kontrolli) T0-vierailulle (kaksi viikkoa myöhemmin ennen sisäänajoa). ).

Täydennys

Kun kelpoisuus on arvioitu, osallistujat satunnaistetaan saamaan integraatio leipomotuotteeseen testi- tai kontrollituotteen kanssa:

Päivittäiset kerta-annokset pakataan pätevän ryhmän koodaamiin pakkauksiin. Täydennys kestää kahdeksan viikkoa, kaksoissokko, rinnakkain. toisella kahdesta tuotteesta (johtuu satunnaistamisesta).

Seuranta Projekti koostuu kahdeksan viikon lisäravintojaksosta, kliinisistä tutkimuksista sekä veren ja virtsan keräämisestä noin 10 tunnin yön yli paaston (ilman vedenkulutusta) jälkeen T-1-käynnillä. Kliiniset tutkimukset, verenotto, ulosteiden kerääminen ja virtsakokeet tehdään käynteillä T0, T1: T0 on ensimmäisen integraation päivä, T1 on kahdeksan viikkoa hoidon aloittamisen jälkeen. Ruokapäiväkirja laaditaan käyntiä varten T-1 ja jaetaan ennen käyntejä T0 ja T1 tiedonkeruukäyntejä T0 ja T1 varten.

Kliininen arviointi Elektrokardiogrammi. EKG tehdään seulonnassa (T-1). EKG-jäljitykset tarkastelee ja tulkitsee Arcon vanhainkodin Hermitagen avohoitoosasto.

Verenpaine mitataan verenpainetaudin ISH / WHO 2004 antropometristen indeksien mukaisesti Paino ja pituus mitataan standardiasteikolla. Toimenpiteet suoritetaan henkilöille, joilla ei ole kenkiä, takkeja tai lämpimiä vaatteita. Painoindeksi, BMI, lasketaan kg/m2.

Vyötärön ympärysmitta (napa) mitataan National Institutes of Healthin, National Heart-, Lung- ja Blood Instituten määrittelemällä tavalla. Vyötärö- ja lantion ympärysmitan suhde (WHR) lasketaan.

Kyselylomakkeet Kaikki tiedot kerätään ja kirjataan validoituihin kyselylomakkeisiin, mukaan lukien henkilötiedot, sairaushistoria ja tiedot sydän- ja verisuonitautien riskitekijöistä, lääkkeiden käytöstä, fyysisestä aktiivisuudesta ja ruokailutottumuksista. Lisäksi jokainen osallistuja kirjoittaa neljän päivän ruokapäiväkirjan.

Tutkimukseen osallistuneita pyydetään myös täyttämään aistinvarainen arvio jokaisesta tarjotusta ruoasta ensimmäisessä sokkomaistelussa ja 8 viikon lisäravinteen lopussa.

Veri- ja virtsanäytteenotto Veri (≤ 30 ml) otetaan ääreislaskimosta 10 tunnin paaston jälkeen. Virtsa kerätään 24 h, tilavuus mitataan ja näyte säilytetään -80 °C:ssa.

Ulostenäytteiden kerääminen Ulostenäytteet käsitellään 12 tunnin kuluessa näytteenoton jälkeen. Jokaisen ulostenäytteen alikvootit pakastetaan suoraan -80 °C:seen metabolomisen profiilin analysointia varten.

Casa di Cura Eremo di Arcon laboratorioanalyysin laboratoriokokeet Verinäytteet sentrifugoidaan välittömästi verenoton jälkeen suoritettavien testien vaatimusten mukaisesti. Plasma tai seerumi erotetaan, osa testataan välittömästi ja jäljelle jäänyt fraktio varastoidaan -80 °C:ssa.

Kokonaiskolesteroli, HDL-kolesteroli, triglyseridit ja glukoosi arvioidaan entsymaattisella menetelmällä. LDL-kolesteroli mitataan analyyttisesti entsymaattisella menetelmällä.

Insuliinitasot arvioidaan elettrochemioluminescenzalla. Verikuva ja verihiutaleiden määrä arvioidaan impedentiometrisellä menetelmällä. C-reaktiivinen proteiini (CRP) mitataan turbidimetrisellä määrityksellä. Erittäin herkkä C-reaktiivinen proteiini (hsPCR) mitataan turbidimetrisellä määrityksellä.

Apolipoproteiini AI (ApoA-I), ApoB ja Lp (a) määritettiin immunoturbidimetrialla.

Testi glukosurian puuttumisen todentamiseksi tehdään mittaamalla glukoosipitoisuus virtsasta.

Fondazione Edmund Machin [EMF] laboratoriokokeet Virtsan ja plasman metabolominen profiili. F2-isoprostaanit mitataan virtsasta oksidatiivisen stressin mittana erityisellä EIA-sarjalla sen jälkeen, kun se on puhdistettu kromatografialla kiinteässä faasissa (sarakkeet SepPack).

Plasmassa hapettuneen LDL:n analyysi suoritetaan ELISA-sarjan avulla.

Virtsa- ja verinäytteet (plasma ja seerumi) alistetaan sekä kohdennetun metabolomiikan analyysiin (UPLC-MS / MS haihtumattomille yhdisteille ja GC-MS / MS haihtuville yhdisteille), jotka analysoivat ei-kohdennettua metabolomiikkaa (ULPC). -Q -TOF-MS ja Nano -FTMS-Q-TOF haihtumattomille ja GC-TOF haihtuville yhdisteille). Kohdennettujen plasmametaboliittien profiileihin käytetään MS-pohjaista Biocrates AbsoluteIDQ ® Kit P180 -sarjaa, joka tuottaa tarkat kvantitatiiviset tiedot 180 ihmisen metaboliitista, jotka liittyvät diabeteksen riskiin. Lisäksi kohdennettua analyysiä sovelletaan seerumin sappihappojen, lyhytketjuisten rasvahappojen (lyhytketjuiset rasvahapot, SCFA:t) lipidiprofiiliin ja mikrobialkuperää olevien polyfenolien metaboliittien kvantifiointiin bionesteissä (mukaan lukien ulosteet) UPLC:llä / QQQ-MS/MS.

Ulosteen mikrobiotan analyysi. Muutoksia tiettyjen bakteeripopulaatioiden ulosteen mikrobiotassa arvioidaan käyttämällä in situ -hybridisaatiomenetelmää fluoresoivien koettimien (FISH) kanssa.

Myös ulosteen mikrobiotassa tapahtuvia muutoksia arvioidaan metagenomiikkalähestymistavalla käyttäen pyrosekvensointia 454. Lyhyesti sanottuna ulostenäytteiden keräämisen jälkeen (n = 128, 2 ulostenäytettä eri aikoina T0, T1 64 koehenkilöltä ennen ja jälkeen jokaisen ruokatestin ja lumelääkkeen nauttimisen) erottaa bakteerien genomisen DNA:n SPIN FastDNA -sarjan (MPbio) avulla. ) erityisesti ulosteille. Käyttämällä alukkeita, jotka ovat spesifisiä bakteerin 16S-rRNA-geenille (hypervariaabeli alue V1-V3), se suoritetaan PCR-monistuksella ja sitten monistetun V1-V3:n altistaminen 454-pyrosekvensoinnilla.

Käyttää GS FLX Titanium Chemistrya adaptereilla Multiplex Identifier (MID) -sekvenssejä saadakseen 600 bp:n pituisia sekvenssejä, jotka analysoidaan vertaamalla julkisesti saatavilla olevaa 16S rRNA:n fylogeneettistä tietokantaa QIIME:n kautta, joka mahdollistaa määrittämisen ihmisen sukutasolle. suoliston mikrobiota. Se tuotetaan yhteensä noin 20 000 sekvenssiä jokaista ulostenäytteestä. Laadunvalvontana ja mikrobiekologian analyysinä sitä käytetään monimuuttujatilastollisena korreloimaan ulosteen mikrobiotan koostumuksen muutoksia elintarviketestauksen tai lumelääkkeen käytön jälkeen.

Satunnaissokkoutuneet Osallistujat jaetaan satunnaisesti, mutta tasaisesti sukupuolen ja iän mukaan jompaankumpaan kahdesta hoidosta: leipomotuotteen testi tai kontrollituote, vaikka tiettyä ohjelmistoa käytettäisiin. Kliiniset tutkijat, tutkijat ja laboratorion henkilökunta sokeutuvat satunnaistukselle.

Hoito Täydennys otetaan käyttöön päivittäisessä ruokavaliossa leipomotuotteen (testi) kulutuksen avulla, jolloin päivittäinen kulutus on 90 grammaa tuotetta, joka sisältää oliivijauhoja, tattarista, herneistä, kastanjoista. Ruoka tarjoaa analogisen säätelevän kalorien saannin. Tutkittavat tuotteet (testi tai kontrolli) toimitetaan pakkauksissa, jotka on merkitty paikallisella kielellä tutkimuksen koodinumerolla. valmistajan nimi, potilaiden lukumäärä, opintokäyntien lukumäärä. Tuotteet jaetaan osallistujille T0-vierailulta.

Tutkimuksen kesto ja suunnittelu Kun kelpoisuus on arvioitu, osallistujat satunnaistetaan kahteen ryhmään (tuotetesti tai kontrolli), jotka seuraavat 8 viikon ravintolisää.

Tutkimuksen kokonaiskesto, mukaan lukien aloitusjakso (run-in) ja hoito, on 10 viikkoa.

Rekrytointi alkaa myöhemmin ja kolmen kuukauden kuluessa eettisen toimikunnan hyväksynnästä.

Sisäänajo alkaa kahden viikon sisällä ensimmäisestä käynnistä (T-1). Koehenkilöt rekrytoidaan 10 kuukauden aikana ja tutkimus valmistuu 12 kuukauden kuluessa ensimmäisestä rekrytointihetkestä.

Tutkimuksen keskeyttämisen kriteerit Helsingin julistuksen, ICH:n hyvän kliinisen käytännön standardien ja Yhdysvaltojen "Food and Drug Administration (FDA) Regulationsin" mukaisesti henkilöllä on oikeus vetäytyä tutkimuksesta milloin tahansa ja mistä tahansa syystä, sanotun kuitenkaan rajoittamatta lääkärin tai laitoksen tulevaa lääketieteellistä hoitoa. Tutkijoilla on myös oikeus peruuttaa tutkimuskohteet (ks. alla). Mikäli henkilö (tai henkilö laillisesti valtuutettu edustaja) päättää jäädä eläkkeelle, havainnot pyritään täydentämään ja raportoimaan mahdollisimman hyvin. Lopullinen kokonaisarviointi on tehtävä tutkittavan peruuttamisen yhteydessä, jolloin peruuttamisen syy on rekisteröitävä ja joka tapauksessa on yritettävä suorittaa seurantaarviointi.

Koehenkilöt voidaan poistaa tutkimuksesta seuraavista syistä:

Pöytäkirjan rikkominen kokeen tekijältä Ei mielekästä noudattamista koehenkilön taholta Koehenkilön kieltäytyminen jatkamasta hoitoa tai kommentit Ei-hyväksyttävä myrkyllisyys Tutkijan päätös, jonka mukaan sulkeminen on tutkittavan lääketieteellisen edun mukaista Epäselvä sairaus tai komplikaatiot samanaikaiset lääkkeet, jotka eivät ole yhteensopivia tutkimuksen kanssa. Raskaus Alkoholin tai huumeiden väärinkäyttö Tutkimuksen keskeyttäneitä tai poissuljettuja ei korvata.

Irtisanomisen menettely

Jos yksittäinen pysähdys ennen tutkimuksen päättymistä, syy ja lopetuspäivä kirjataan. Tutkimuksen viimeisen ruoka-annoksen päivämäärä on kirjattava. Ennenaikaisen irtisanomisen yhteydessä on suoritettava seuraavat toimenpiteet:

Kliiniset testit (systolinen ja diastolinen, syke, paino ja pituus BMI:n sekä vyötärön ja lantion ympärysmitan laskemiseksi).

Veren ja ulosteiden ottaminen ja virtsan kerääminen. Ruokatiheyskysely (viikoittain). Mikäli henkilö ei voi palata seurantakäynnille, tutkijat ovat hapuilleet ottavat yhteyttä henkilöön puhelimitse mahdollisten haittatapahtumien jäljittämiseksi.

Jos henkilö peruuttaa suostumuksensa saada ruokaa studiossa, sinua rohkaistaan ​​pysymään tutkimuksessa ilman hoitoa turvallisuustietojen keräämiseksi.

Tutkittavan tuotteen luotettavuusmenettelyt Tuotteet (testi tai kontrolli) toimitetaan pakkauksissa, joihin on merkitty paikallisella kielellä tutkimuksen koodinumero, toimipaikan koodin numero, valmistajan nimi, osallistujien lukumäärä, tutkimuskäyntien lukumäärä, erän määrä, säilytysohjeet ja viimeinen käyttöpäivämäärä. Tuotteet jaetaan osallistujille T0-vierailulta.

Koodien satunnaistaminen Jokaisen osallistujan sukupuolen ja iän mukaiset satunnaistuskoodit säilytetään suljetussa kirjekuoressa pätevän Sensorisen laadun ryhmän toimesta (Edmund Mach -säätiön tutkimus- ja innovaatiokeskuksen ravitsemus- ja elintarvikkeiden laadun osasto).

Tietolähteiden valvonta Kaikki tutkimuksen aikana kerätyt tiedot hankitaan primäärilähteistä ja kirjataan tutkittavana kirjallisiin asiakirjoihin ja sähköisiin potilaskertomuksiin. Kliinisten, laboratoriotulosten ja EKG:n tulokset tallennetaan tutkittavan sähköiseen sairauskertomustiedostoon. Mitään tietoja ei lisätä suoraan "tapausraporttilomakkeeseen" (CRF) siirtämättä niitä ensisijaisesta lähteestä, kuten paperisista tai sähköisistä tiedoista.

Samanaikainen lääkehoito Kaikki lääkkeet, jotka on otettu tutkittavalta kuukauden aikana ennen tutkimuksen alkamista ja/tai annettu tutkimuksen aikana, katsotaan samanaikaiseksi hoidoksi. Tällainen hoito on dokumentoitava CRF:n ja koehenkilöiden sairauskertomusten asianmukaiselle sivulle. Kaikki samanaikaiseen hoitoon tutkimuksen aikana tehdyt muutokset on kirjattava selkeästi ja muutoksen syy tulee dokumentoida.

Jokaisen osallistujan lääkärille lähetetään kirje, jossa kerrotaan, mitkä ovat tutkimuksen kanssa yhteensopimattomia hoitoja. Seuraavien lääkkeiden käyttö ei ole sallittua tutkimuksen aikana: verenohennuslääkkeet, verenpainelääkkeet, lipidejä alentavat lääkkeet, beetasalpaajat, systeemiset kortikosteroidit, neuroleptit, antibiootit, laksatiivit, vitamiinilisät, antioksidantit ja kivennäisaineet, ravintokuitu, prebiootit (esim. inuliini, oligofruktoosi) ja probiootit. Siksi jos koehenkilö tarvitsee tutkimuksen kanssa yhteensopimattomia lääkehoitoja, hoitava lääkäri kehottaa koehenkilöä lopettamaan tutkimuksen ja ilmoittamaan asiasta tutkimuksen johtajalle ja noudattamaan ennenaikaisen lopettamisen menettelyjä.

Vaatimustenmukaisuusluokitus Lisäravinteiden noudattamisen arvioimiseksi niistä mitataan virtsan fenolit koehenkilöiltä, ​​joita täydennetään ruokatesteillä T0, T1. Lisäksi kaikki käyttämättömät tai tyhjät pakkaukset jokaisen viikon lopussa palautetaan kokeilun tekijöille.

Menetelmät Turvallisuus Aiemmissa oliiveista, tattarista, hernejauhoista, kastanjajauhoista valmistettujen tuotteiden kulutukseen liittyvissä tutkimuksissa ei ollut turvallisuusongelmia.

Tutkimusta seuraa Arcon Casa di Cura Eremon lääkintähenkilöstö ja ensihoitaja. Haittatapahtumat kirjataan edelleen koko tutkimuksen ajan. Poikkeavista laboratorioarvoista, jotka aiheuttavat kliinisiä oireita tai oireita tai jotka vaativat terapeuttista interventiota, ilmoitetaan välittömästi tutkittavalle, jos tutkittava on nimenomaisesti ilmaissut haluavansa saada tällaisen ilmoituksen tietoisen suostumuksen muodossa. Koehenkilö voi vetäytyä tutkimuksesta etukäteen, jos terapeuttisen toimenpiteen tarve ei ole yhteensopiva tutkimuksen kanssa tai jos koet haittavaikutuksia, jotka muuttavat tämän kohteen tutkimukseen sisällyttämisen kriteerejä. Tutkittava voi edelleen vapaasti vetäytyä tutkimuksesta milloin tahansa, jos tutkimus johtuu epämukavuudesta ennenaikaisen lopettamisen menettelyn jälkeen.

Tilastollinen analyysi Perusominaisuudet on lueteltu täydennystyypeittäin: jatkuvat muuttujat ilmaistaan ​​keskiarvona +/- keskihajonna tai mediaaneina kvartiilien välisillä vaihteluväleillä ja kategorisilla muuttujilla prosentteina. Tiedot, joilla on epäsymmetrinen jakautuminen, seuraavat lokikäsittelyä ennen analyysiä. Näiden kahden lisäosan väliset erot arvioidaan yksimuuttuja- ja monimuuttujatilastomenetelmillä. Väliainetta ennen ja jälkeen interventiota verrataan yleiseen lineaariseen malliin (ANOVA) toistuvien mittausten tai parillisten tietojen osalta. Suoritat yksinkertaisia ​​ja useita lineaarisia regressioita määrittääksesi riippumattomien muuttujien väliset suhteet; Lisäksi suoritamme testin arvioidaksemme täydennystyypeissä havaitut erot noudattamisessa. Tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona +/- SEM ja eroja pidetään merkittävinä, kun P <0,05. Tiedot, joilla on epäsymmetrinen jakautuminen, seuraavat lokikäsittelyä ennen analyysiä.

Pääanalyysi perustuu keskimääräisten tasojen erojen vertailuun testituotteen kulutuksen ja kontrollin kulutuksen jälkeen. Myös keskiarvojen erot kunkin lisäyksen lopussa (T1) suhteessa suhteelliseen keskimääräiseen perusarvoon (T0) mitataan.

Hoitohaarojen väliset aikaerot arvioidaan toistuvien mittausten varianssianalyysillä. Merkittävyystasoksi katsotaan <0,05 kahdessa pyrstössä.

Kunkin lisäravinteen näytteen kooksi on määritetty 32 LDL-kolesterolin alenemisen havaitsemiseksi plasmassa, joka vastaa noin 15,44 mg/dl standardipoikkeaman ollessa 14,28 mg/dl käyttämällä yhtälöä Snedecor ja Cochran, jonka α on 0,05 ja 1 -β yhtä suuri kuin 0,9 (Dell et ai., 2002). Tämän kaavan mukaan ilmoittautuneiden vähimmäismäärä on 28. Ottaen huomioon mahdolliset keskeyttämiset, 32 henkilöä testituotteella ja 32 henkilöä kontrollivalmisteella yhteensä 64 vapaaehtoiselle koehenkilölle tässä tutkimuksessa.

Arviointi tehdään plasman LDL-kolesterolin alenemisen runsauden perusteella, European Journal of Nutrition -lehdessä julkaistussa rinnakkaistutkimuksessa raportoitujen LDL-kolesterolin mittojen (keskiarvo ja standardipoikkeama) perusteella. Parametri LDL-kolesteroli, sen lisäksi, että se vaikuttaa ihmisten terveyteen, on tunnustettu rajoittavampi ja vaatii pidempiä havainnointiaikoja kuin suoliston mikroflooran muutoksen laajuus.

Suora pääsy lähdetietoihin/asiakirjoihin Sääntelyviranomaiset saattavat haluta suorittaa kliinisen tutkimuksen tarkastuksia GCP-periaatteiden noudattamisen arvioimiseksi. Sääntelyviranomaiset voivat myös haluta suorittaa tarkastuksen (tutkimuksen aikana tai sen päätyttyä). Jos valvontaviranomainen ja/tai kliinisten tutkimusten eettinen komitea c/o APSS Trento vaatii tarkastuksen, tutkijan on suostuttava antamaan pääsy tutkimukseen liittyviin asiakirjoihin, valvontaviranomaisille.

Tiedonhallinta ja tietueet Tietojen ja dokumentaation lähteeksi määritellään ensimmäinen paikka, johon tiedot tallennetaan. Kaikki alkuperäiset asiakirjat, eikä niitä tule säilyttää ja asettaa saataville samassa paikassa. Tutkijan tulee säilyttää jokaisen tutkimukseen osallistuvan henkilön alkuperäiset asiakirjat.

CRF:lle kokeen aikana kerätyt tiedot dokumentoidaan anonyymisti, ja ne tunnistetaan numeroilla tai symboleilla. Jos poikkeuksellisissa olosuhteissa on turvallisuus- tai säännöstelysyistä tarpeen henkilön tunnistaminen, OlioCRU Oy ja tutkija ovat velvollisia pitämään tiedot luottamuksellisina.

Kaikkien CRF:ään syötettyjen tietojen on oltava luettavissa ja kirjattava mustalla musteella. Jos tarvitset korjausta, se tulee tehdä poistamalla merkintä yhdellä rivillä ja kirjoittamalla oikeat tiedot itse kohteen viereen. Tutkijan tai pätevän henkilön on varustettava korjauksen nimikirjaimet ja päiväys.