Измерение влияния пищевых добавок с новым продуктом для выпечки на микробиоту кишечника и метаболизм холестерина

Первые результаты испытаний in vitro в рамках проекта PreBIOil продемонстрировали способность муки оливок модулировать микробную популяцию кишечника человека способом, сравнимым со способностью инулина, признанного полисахаридом с пребиотическим потенциалом. На основании этих результатов и других данных, опубликованных в литературе, был разработан хлебобулочный продукт PreBIOil. Продукт содержит муку из оливок, гречихи, гороха и каштана.

Общая цель исследования - оценить, может ли введение в рацион хлебобулочного изделия, приготовленного из оливковой муки, смешанной с гречневой, гороховой и каштановой мукой, изменить профиль кишечной микробиоты и холестерина плазмы, в частности ЛПНП. Исследование организовано как пищевая добавка, двойное слепое, рандомизированное, параллельное с контрольной группой, в которой будет сравниваться следующий продукт:

i) новое хлебобулочное изделие, разработанное в исследовании PreBIOil (испытание); ii) изоэнергетический контроль хлебобулочных изделий (контроль).

Описание пищевых добавок, добавленных в испытании. Испытываемый продукт представляет собой новый хлебобулочный продукт, приготовленный из смеси муки из оливок, гречихи, гороха и каштана и имеющий вид соленого печенья.

Участники должны ежедневно потреблять около 90 граммов тестового или контрольного продукта. Точное количество каждой партии продукта будет определено после оценки питательных характеристик готового продукта, чтобы обеспечить одинаковое потребление калорий двумя продуктами.

Усвояемость, способность к брожению и модуляция микробиоты Гречиха считается незлаковым продуктом, который помимо содержания клетчатки, минералов и витаминов, таких как В2 и В6, также представляет собой источник антиоксидантных соединений благодаря содержанию флавоноидов.

Гороховая мука содержит важные для питания человека компоненты (крахмал, белок и другие питательные вещества). Польза для здоровья, связанная с потреблением гороха, в первую очередь связана с концентрацией и свойствами крахмала, белка, клетчатки, витаминов, минералов и фитохимических веществ. Клетчатка, содержащаяся в покровах и в клеточных стенках семядолей, способствует функции желудочно-кишечного тракта. Содержание крахмала в гороховой муке характеризуется более низким гликемическим индексом. Белки гороха могут продуцировать пептиды с антиоксидантной активностью. Содержание витаминов и минералов в горохе может играть важную роль в профилактике дефицитных заболеваний, в частности связанных с дефицитом селена и фолиевой кислоты. Горох содержит множество фитохимических веществ. К ним относятся полифенолы, которые могут обладать антиоксидантными и противораковыми свойствами, сапонины, обладающие гипохолестеролемической и противораковой активностью, и олигосахариды галактозы, которые могут оказывать пребиотическое действие на толстую кишку.

Питательные компоненты каштановой муки состоят из углеводов, белков и жиров в таком составе, чтобы обеспечить энергетическую ценность около 350-400 ккал/100 г. Было признано, что каштаны положительно влияют на метаболизм кишечных бактерий и являются источником длинноцепочечных жирных кислот C18:1 и C18:2, а также витаминов (витамин Е). Возможное присутствие полифенолов ограничено внешней оболочкой, обычно отделяемой от плодов при производстве муки. Мука, ​​полученная из оливковой пасты, не описана в научной литературе по особым питательным свойствам для рациона человека. Однако оливки являются неотъемлемой частью средиземноморской диеты, в которой они употребляются как столовые оливки и оливковое масло. Оливковый плод содержит 50 % воды, 22 % жира, около 19 % углеводов и около 2 % белка; содержание полифенолов колеблется в пределах 1-3%. Оливки потребляются или как оливковое масло или столовые оливки. Для оливок характерна сильная горечь, вызванная в основном дальолеуропеином. Олеуропеин может достигать 140 мг/г сухого веса в незрелых оливках и уменьшается по мере созревания плодов. Столовые оливки обрабатывают для смягчения горького вкуса с помощью таких процессов, как мацерация содой и ферментация в рассоле. Однако в процессе подслащивания горечь теряет некоторые важные соединения, присутствующие в оливках, такие как полифенолы и клетчатка. Нет никаких доказательств способности полифенолов оливкового масла первого холодного отжима снижать риск сердечно-сосудистых заболеваний, но большая часть возможных эффектов компонентов оливок по отдельности или в сочетании с полифенолами до сих пор не изучена. Кроме того, большая часть водорастворимой фракции, содержащейся в оливках, между которыми находятся волокна и полифенолы с доказанной полезной активностью для здоровья человека, не удаляется в процессе производства масла. Имеются данные о том, что некоторые фенольные фракции в виде секоиридоидов плохо всасываются слизистой оболочкой кишечника и затем доступны для кишечной микрофлоры. По сути, масло в целом будет иметь наибольший потенциал, поскольку пища может благотворно модулировать состав и активность микроорганизмов, симбиотических в кишечнике человека, как это наблюдалось экспериментально для других видов фруктов.

С помощью моделирования ферментации в толстой кишке in vitro было замечено, что оливковая паста даже после выпекания при 180 ° C в течение 30 минут способна модулировать микробиоту кишечника человека с пребиотическим эффектом или вызывать значительное увеличение бифидобактерий. Такое моделирование in vitro проводили путем инкубации в течение 24 ч в системе периодической ферментации с контролем рН и температуры после инокуляции фекалиями, полученными от пяти здоровых людей. Анализ общих полифенолов (основных антиоксидантов, присутствующих в испытуемом продукте), присутствующих в муке из оливок, в смеси муки и в испытуемом продукте, выявил потерю общих полифенолов в результате выпечки, равную 40%.

Клинические результаты Клинические результаты показали, что ежедневное потребление 100 г гречневой крупы в виде муки определяет увеличение соотношения ЛПВП/холестерин и улучшает толерантность к глюкозе, а совсем недавно было замечено, что потребление гречневого печенья снижает сывороточный уровень маркера воспаления, миелопероксидазы (МПО) в дополнение к снижению общего холестерина с лучшей жизненной емкостью легких. Недавний метаанализ нескольких интервенционных исследований диеты человека с добавлением бобовых, включая горох, показал их способность снижать уровень холестерина ЛПНП в сыворотке.

Интервенционные исследования диеты с использованием оливкового масла, побочных продуктов переработки оливок и продуктов на их основе проводились с участием здоровых добровольцев и субъектов с различной степенью сердечно-сосудистого риска. Из этих исследований были указаны суточные дозы вводимых общих полифенолов (от нескольких мг/сут до 30 мг/сут, до 100 мг/сут) в зависимости от вида оливкового масла, а также обогащение экстрактами. Эти вмешательства во многих случаях длились около месяца, и в большинстве исследований измеряли эффекты антиоксидантных и противовоспалительных изменений в системе кровообращения, а также значения липидов плазмы и другие параметры, связанные с окислительным стрессом. В частности, в исследовании «EUROLIVE» на большой выборке здоровых людей наблюдалось, что фенолы оливкового масла способны защищать липиды крови от окисления, повышать концентрацию холестерина ЛПВП и соотношение между восстановленным и окисленным глутатионом, однако никаких изменений dell'F2-изопростана не происходит.

В 2011 году Европейское агентство по безопасности пищевых продуктов (EFSA) одобрило заявление о том, что полифенолы оливкового масла, особенно гидрокситирозол, защищают ЛПНП от окисления в дозе, превышающей или равной 5 мг/кг/день. Другие исследования также показали, что полифенолы оливкового масла связаны со снижением СРБ, снижением экспрессии атерогенных генов в клетках крови и снижением артериального давления. Хотя есть доказательства способности полифенолов оливкового масла снижать риск сердечно-сосудистых заболеваний, большая часть возможных эффектов компонентов оливы по отдельности или в синергии до сих пор не изучена. Более того, большая часть волокон и полифенолов, содержащихся в маслине, не экстрагируется в процессе экстракции масла, а выводится как побочный продукт.

Обоснование исследования. Гречневая мука содержит клетчатку и флавоноиды, гороховая мука содержит углеводы с низким гликемическим индексом, белок, а также является источником антиоксидантов, каштановая мука содержит пребиотические вещества и витамины. Оливковая мука представляет собой плоды оливы с ее водорастворимыми компонентами (например. Волокна и полифенолы), а также в растворимой фракции полиненасыщенных и мононенасыщенных жирных кислот, токоферолах и каротиноидах, которые лишь частично пропускают оливковое масло первого холодного отжима. Эти компоненты разработаны в основном как компоненты оливкового масла первого холодного отжима и научно доказано, что они способствуют улучшению метаболизма липидов и липидного каркаса плазмы, здоровью сердца и защите от окислительного стресса.

На основании имеющихся клинических и экспериментальных исследований было высказано предположение, что потребление хлебобулочных изделий, приготовленных из смеси муки из маслины, гречихи, гороха и каштанов, может оказывать положительное влияние на липидные биомаркеры плазмы и кишечную микробиоту (например, повышение бифидобактерий) у взрослых участников с содержанием холестерина в плазме от среднего до высокого уровня, даже если он еще не является патологическим.

Заявление о соответствии Это исследование будет проводиться в соответствии с Протоколом и в соответствии с Надлежащей клинической практикой (GCP), как описано в ICH GCP от 1996 г., Своде федеральных правил США (CFR) и Хельсинкской декларации. Подписанием настоящего протокола исследователь соглашается соблюдать данные требования.

Цели исследования

Общая цель исследования - оценить, способно ли введение в рацион нового хлебобулочного изделия, содержащего смесь муки из масличной пасты, гречихи, гороха, каштанов, измениться:

Основные цели:

1. Профиль фекальной микробиоты;
2. Плазменные уровни общего холестерина, ЛПНП, соотношение/общие ЛПНП и ЛПВП;
3. Уровень триглицеридов в плазме;
4. Аполипопротеины ApoA-I, ApoB и Lp (а).

Второстепенные цели:

1. Антропометрические показатели 2. Вторичные метаболиты полифенолов в биологических жидкостях человека 3. Профили метаболитов в плазме и моче, оцененные с помощью анализа масс-спектрометрии (МС); 4. Уровень глюкозы в крови и уровень инсулина натощак; 5. С-реактивный белок (PRC); 6. Высокочувствительный С-реактивный белок (hsPRC); 7. мочевой изопростан F2; 8. окисленные ЛПНП в плазме.

Презентация экспериментального дизайна Участники-добровольцы будут определены и набраны в амбулаторной части Casa di Cura Eremo di Arco (TN). Участники будут проинформированы о целях и методах исследования и будут предварительно отобраны на основе критериев включения/исключения. Участник подпишет информированное согласие и войдет в студию после посещения Т-1, проведенного в амбулаторной части Casa di Cura Eremo di Arco (TN), где будет выполнен клинический и биохимический анализ состояния здоровья. Чтобы обеспечить надлежащий мониторинг пищевых привычек, правомочный участник после первого посещения заполнит пищевой дневник.

Если субъекты будут иметь право на участие в исследовании на основании всех критериев включения и исключения, они будут рандомизированы для получения либо плацебо, либо активной интеграции на визите T0.

Клиническое обследование и сбор крови и мочи будут проводиться после голодания в течение примерно 10 часов в начале периода запуска (посещение Т-1). Клинические анализы, образцы крови, сбор кала и мочи будут проводиться во время посещений T0, T1. Дополнительный пищевой дневник (4 дня подряд) заполняется при посещениях Т0 и перед Т1. Побочные явления, прием лекарств и добавок будут записываться участниками в специальный дневник.

Участников, включенных в исследование, также попросят заполнить сенсорную оценку каждого продукта, предлагаемого вслепую, при первом вкусе и в конце 8 недель приема добавок для каждого продукта.

Процедура исследования Набор участников Участники будут определены и набраны в амбулаторной части Casa di cura Eremo di Arco (TN) Участники будут проинформированы о целях и методах исследования и будут предварительно отобраны на основе критериев включения/исключения . Если он соответствует требованиям, участник подпишет информированное согласие и войдет в студию с посещением Т-1, которое будет проводиться во время клинического и биохимического состояния здоровья. Субъекты, которые будут иметь право на участие в исследовании на основании всех критериев включения/исключения, будут включены в исследование и рандомизированы для получения первой пищевой добавки (тестовой или контрольной) для посещения T0 (через две недели после вводного ).

Дополнение

После оценки приемлемости участники будут рандомизированы для получения интеграции хлебобулочного изделия с тестируемым или контрольным продуктом:

Разовые суточные дозы будут упакованы в упаковки, кодированные квалифицированной группой. Дополнение продлится восемь недель, двойное слепое, параллельное. с одним из двух продуктов (приписывается рандомизации).

Последующее наблюдение Проект будет состоять из восьминедельного периода приема добавок, клинических обследований и сбора крови и мочи после ночного голодания (исключая потребление воды) в течение примерно 10 часов до посещения Т-1. Клинические анализы, забор крови, сбор кала и анализы мочи будут проводиться визитами в Т0, Т1: Т0 - день первой интеграции, Т1 - через восемь недель после начала лечения. Дневник питания будет составляться для посещения Т-1 и распространяться перед посещениями Т0 и Т1 для посещений для сбора данных Т0 и Т1.

Клиническая оценка Электрокардиограмма. ЭКГ будет выполняться при скрининге (T-1). Записи ЭКГ будут рассмотрены и интерпретированы амбулаторным отделением дома престарелых Hermitage of Arco.

Артериальное давление будет измеряться в соответствии с рекомендациями по гипертонии ISH/ВОЗ 2004 г. Антропометрические индексы Вес и рост будут измеряться по стандартной шкале. Меры будут проводиться на субъектах без обуви, пальто или теплой одежды. Индекс массы тела, ИМТ, рассчитывается как кг/м2.

Окружность талии (пуповина) будет измеряться в порядке, установленном Национальным институтом здравоохранения, Национальным институтом сердца, легких и крови. Рассчитывается соотношение окружности талии и бедер (WHR).

Анкеты Вся информация будет собрана и записана в утвержденных анкетах, включая личную идентификацию, историю болезни и информацию о факторах риска сердечно-сосудистых заболеваний, использовании лекарств, физической активности и пищевых привычках. Также каждый участник будет вести четырехдневный пищевой дневник.

Участников, включенных в исследование, также попросят заполнить сенсорную оценку каждого продукта, предложенного при первой слепой дегустации и в конце 8 недель приема добавок.

Забор крови и мочи Кровь (≤ 30 мл) берут из периферической вены после 10 часов голодания. Будет собрана 24-часовая моча, измерен объем, и образец будет храниться при температуре -80 ° C.

Сбор образцов фекалий Образцы фекалий будут обработаны в течение 12 часов после сбора образцов. Аликвоты каждого образца фекалий будут заморожены непосредственно при температуре -80°C для анализа метаболического профиля.

Лабораторные тесты лабораторным анализом Casa di Cura Eremo di Arco Образцы крови будут центрифугированы в соответствии с требованиями тестов, которые должны быть выполнены сразу после сбора крови. Плазму или сыворотку отделяют, часть сразу же тестируют, а оставшуюся фракцию хранят при -80°С.

Общий холестерин, холестерин ЛПВП, триглицериды и глюкоза будут оцениваться ферментативным методом. Холестерин ЛПНП будет измеряться аналитически ферментативным методом.

Уровни инсулина будут оцениваться с помощью электрохемиолюминесценции. Анализ крови и количество тромбоцитов будет оцениваться импеденциометрическим методом. С-реактивный белок (СРБ) будет измеряться турбидиметрическим анализом. Высокочувствительный С-реактивный белок (вчПЦР) будет измеряться турбидиметрическим анализом.

Аполипопротеин AI (ApoA-I), ApoB и Lp (а) определяли методом иммунотурбидиметрии.

Тест на подтверждение отсутствия глюкозурии будет сделан путем измерения концентрации глюкозы в моче.

Лабораторные тесты Fondazione Edmund Mach [EMF] Метаболический профиль мочи и плазмы. F2-изопростаны будут измеряться в моче как мера окислительного стресса с помощью специального набора EIA после очистки твердофазной хроматографией (колонки SepPack).

Анализ окисленных ЛПНП в плазме будет проводиться с помощью набора ELISA.

Образцы мочи и крови (плазма и сыворотка) будут подвергнуты как анализу целевой метаболомики (UPLC-MS/MS для нелетучих соединений и GC-MS/MS для летучих соединений), так и анализу нецелевой метаболомики (ULPC -Q -TOF-MS и Nano -FTMS-Q-TOF (нелетучие вещества) и GC-TOF для летучих соединений). Для профилей целевых метаболитов плазмы будет использоваться набор Biocrates AbsoluteIDQ ® P180 на основе MS, позволяющий получать точные количественные данные о 180 метаболитах человека, связанных с риском развития диабета. Кроме того, будет применен специальный целевой анализ липидного профиля сывороточных желчных кислот, короткоцепочечных жирных кислот (короткоцепочечных жирных кислот, SCFAs) и количественного определения метаболитов полифенолов микробного происхождения в биологических жидкостях (включая фекалии) с помощью UPLC/ QQQ-МС/МС.

Анализ фекальной микробиоты. Изменения фекальной микробиоты конкретных бактериальных популяций будут оцениваться методом гибридизации in situ с флуоресцентными зондами (FISH).

Также изменения фекальной микробиоты будут оцениваться с использованием метагеномного подхода с использованием пиросеквенирования 454. Короче говоря, после сбора образцов стула (n = 128, 2 образца стула в разное время T0, T1 от 64 субъектов до и после употребления каждого пищевого теста и плацебо) будет извлечена бактериальная геномная ДНК с использованием набора SPIN FastDNA (MPbio ) специфичны для фекалий. Используя праймеры, специфичные для бактериального гена 16S рРНК (гипервариабельная область V1-V3), будет проведена ПЦР-амплификация с последующим пиросеквенированием амплифицированных V1-V3 на 454.

Будет использоваться GS FLX Titanium Chemistry с адаптерами Multiplex Identifier (MID) для получения последовательностей длиной 600 п.н., которые будут проанализированы путем сравнения общедоступной базы данных филогенетических данных 16S рРНК с помощью конвейера QIIME, который позволяет относить человека к родовому уровню. микробиота кишечника. Всего будет произведено около 20 000 последовательностей для каждого образца фекалий. В качестве контроля качества и анализа микробной экологии будет использоваться многомерная статистика, чтобы сопоставить изменения в составе фекальной микробиоты после употребления пищевых продуктов или плацебо.

Рандомизация вслепую Участники будут случайным образом, но равномерно распределены по полу и возрасту, на одну из двух процедур: тестирование хлебобулочных изделий или контрольный продукт даже с использованием специального программного обеспечения. Клинические исследователи, исследователи и лабораторный персонал не будут осведомлены о рандомизации.

Лечение Добавку вводят в ежедневный рацион путем употребления хлебобулочного изделия (теста) на ежедневное потребление 90 г продукта, содержащего муку из оливок, из гречихи, из гороха, каштанов. Пища будет обеспечивать аналоговый контроль потребления калорий. Исследуемые продукты (тестовые или контрольные) будут поставляться в упаковках, которые будут маркированы на местном языке с кодовым номером исследования. название производителя, количество пациентов, количество учебных визитов. Продукты будут розданы участникам с визита T0.

Продолжительность исследования и планирование После оценки приемлемости участники будут рандомизированы в две группы (испытательная или контрольная), которые будут принимать пищевые добавки в течение 8 недель.

Общая продолжительность исследования, включая начальный период (обкатку) и лечение, составит 10 недель.

Набор начнется позже и в течение трех месяцев после утверждения Комитетом по этике.

Обкатка начнется в течение двух недель после первого визита (T-1). Субъекты будут набраны в течение 10 месяцев, и исследование будет завершено в течение 12 месяцев с момента первого набора.

Критерии прекращения исследования В соответствии с Хельсинкской декларацией, стандартами надлежащей клинической практики ICH и «Правилами Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) США» человек имеет право отказаться от участия в исследовании в любое время и в по любой причине, без ущерба для будущей медицинской помощи со стороны врача или учреждения. Исследователи также имеют право отозвать субъектов исследования (см. ниже). В случае, если лицо (или лицо, уполномоченное законом) решит уйти в отставку, будут предприняты все усилия, чтобы как можно лучше заполнить и сообщить о наблюдениях. Окончательная всесторонняя оценка должна быть сделана во время изъятия субъекта, при этом причина изъятия должна быть зарегистрирована, и в любом случае должна быть предпринята попытка провести последующую оценку.

Субъекты могут быть исключены из исследования по следующим причинам:

Нарушение протокола со стороны экспериментатора Незначительное соблюдение субъектом Отказ субъекта от продолжения лечения или комментарии Недопустимая токсичность Решение исследователя о том, что закрытие отвечает наилучшим медицинским интересам субъекта Неясное событие заболевания или осложнения Использование сопутствующие лекарственные препараты, несовместимые с исследованием. Беременность Злоупотребление алкоголем или наркотиками Те, кто прекратит или будет исключен из исследования, не будут заменены.

Процедура прекращения

Если человек останавливается до завершения исследования, причина и дата прекращения будут записаны. Дата последней дозы пищи в исследовании должна быть записана. В случае досрочного расторжения должны быть выполнены следующие процедуры:

Клинические тесты (систолическое и диастолическое, частота сердечных сокращений, вес и рост для расчета ИМТ и окружности талии и бедер).

Взятие крови и кала и сбор мочи. Анкета частоты приема пищи (еженедельно). В случае, если человек не может вернуться для последующего визита, следователи попытаются связаться с человеком по телефону, чтобы отследить любые неблагоприятные события.

Если человек отзовет согласие на получение еды в студии, вам будет предложено остаться в исследовании без лечения для сбора данных о безопасности.

Процедуры проверки надежности исследуемого продукта. Продукты (испытательные или контрольные) будут поставляться в упаковках, маркированных на местном языке с указанием номера кода исследования, номера кода центра, названия производителя, количества участников, количество посещений исследования, номер партии, инструкции по хранению и сроки годности. Продукты будут розданы участникам с визита T0.

Коды рандомизации Коды рандомизации по полу и возрасту для каждого участника будут храниться в запечатанном конверте квалифицированной группой сенсорного качества (QS отдела питания и качества пищевых продуктов Центра исследований и инноваций Фонда Эдмунда Маха).

Контроль источника данных Все данные, собранные в ходе исследования, будут получены из первоисточников и будут зафиксированы в письменных документах и ​​электронных медицинских записях субъекта. Результаты клинических, лабораторных исследований и ЭКГ заносятся в электронную медицинскую карту обследуемого. Никакие данные не будут вставлены непосредственно в «форму истории болезни» (CRF) без передачи из первоисточника, такого как бумажные или электронные записи.

Сопутствующая лекарственная терапия Любое лекарство, принятое у субъекта в течение одного месяца до начала исследования и/или введенное во время исследования, будет рассматриваться как сопутствующая терапия. Такое лечение должно быть задокументировано на соответствующей странице ИРК и в медицинских картах субъектов. Любые изменения в сопутствующей терапии во время исследования должны быть четко зарегистрированы, а причина изменений должна быть задокументирована.

Врачу каждого участника будет отправлено письмо с указанием того, какие методы лечения несовместимы с исследованием. Во время исследования не допускается использование следующих препаратов: препараты, разжижающие кровь, антигипертензивные, гиполипидемические препараты, бета-блокаторы, системные кортикостероиды, нейролептики, антибиотики, слабительные, витаминные добавки, антиоксиданты и минералы, пищевые волокна, пребиотики (например, инулин, олигофруктоза) и пробиотики. Поэтому, если субъекту требуется лекарственная терапия, несовместимая с исследованием, лечащий врач уведомляет субъекта о прекращении исследования и информирует об этом руководителя исследования и следует процедурам досрочного прекращения.

Оценка соответствия. Чтобы оценить соблюдение режима приема пищевых добавок, будут измеряться фенолы в моче у субъектов, которые будут принимать пищевые добавки при T0, T1. Кроме того, вся неиспользованная или пустая упаковка в конце каждой недели будет возвращена экспериментаторам.

Методы Безопасность. В ходе предыдущих исследований проблем с безопасностью, связанных с потреблением продуктов из оливок, гречки, гороховой муки, каштановой муки, не было.

За исследованием будет следить медицинский и парамедицинский персонал Casa di Cura Eremo of Arco. Нежелательные явления будут по-прежнему регистрироваться на протяжении всего исследования. Субъекту будет незамедлительно сообщено об аномальных лабораторных значениях, которые вызывают клинические признаки или симптомы или требуют терапевтического вмешательства, если субъект явно выразил желание получить такое сообщение в форме информированного согласия. Субъект может выйти из исследования заранее, если потребность в терапевтическом вмешательстве несовместима с исследованием, или если возникнут нежелательные явления, вызывающие изменение критериев включения этого субъекта в исследование. Субъект по-прежнему может выйти из исследования в любое время, если исследование связано с дискомфортом после процедуры досрочного прекращения.

Статистический анализ Основные характеристики перечислены по типу дополнения: непрерывные переменные выражены как среднее +/- стандартное отклонение или медианы с межквартильными диапазонами и в процентах для категориальных переменных. Данные с асимметричным распределением перед анализом будут подвергаться логарифмической обработке. Различия между двумя добавками будут оцениваться с помощью одномерных и многомерных статистических методов. Среда до и после вмешательства будет сравниваться с общей линейной моделью (ANOVA) для повторных измерений или для парных данных. Вы будете выполнять простые и множественные линейные регрессии, чтобы определить отношения между независимыми переменными; также мы проведем тест, чтобы оценить различия в соответствии, обнаруженные в типах добавок. Результаты выражены как среднее +/- SEM, и различия будут считаться значимыми, если P <0,05. Данные с асимметричным распределением перед анализом будут подвергаться логарифмической обработке.

Основной анализ будет основан на сравнении различий средних уровней после употребления тестируемого продукта и после употребления контрольного продукта. Различия между средними значениями в конце каждого приема (T1) по отношению к относительному среднему исходному значению (T0) также будут измеряться.

Различия во времени между группами лечения будут оцениваться с помощью дисперсионного анализа для повторных измерений. Уровень значимости будет считаться <0,05 в двух ответвлениях.

Размер выборки для каждой добавки был определен как 32, чтобы определить снижение холестерина ЛПНП в плазме, равное примерно 15,44 мг/дл со стандартным отклонением 14,28 мг/дл с использованием уравнения Снедекора и Кокрана с α, равным 0,05 и 1. -β равно 0,9 (Dell et al., 2002). Согласно этой формуле минимальное количество предметов для зачисления равно 28. Принимая во внимание возможное отсев, 32 человека получали добавки с тестируемым продуктом и 32 человека получали добавки с контрольным продуктом, всего 64 добровольца в этом исследовании.

Оценка проводится на основе значительного снижения уровня холестерина ЛПНП в плазме, на основе показателей (среднее значение и стандартное отклонение) уровня холестерина ЛПНП, о которых сообщалось в параллельном исследовании, опубликованном в Европейском журнале питания. Параметр холестерина ЛПНП, в дополнение к признанному влиянию на здоровье человека, является более ограничительным и требует времени наблюдения, превышающего степень модификации кишечной микрофлоры.

Прямой доступ к исходным данным/документам Регулирующие органы могут пожелать провести проверки клинических исследований для оценки соответствия принципам GCP. Регулирующие органы также могут пожелать провести проверку (во время судебного разбирательства или после его завершения). Если инспекция требуется регулирующим органом и/или Комитетом по этике клинических испытаний c/o APSS Trento, исследователь должен дать согласие на предоставление доступа регулирующим органам к документации, относящейся к исследованию.

Управление данными и записи Источник данных и документации определяется как первое место, где данные записываются. Любые оригиналы документов и не должны храниться и предоставляться в одном и том же месте. Исследователь должен хранить оригиналы документов на каждого лица, участвующего в исследовании.

Данные, собранные в CRF во время испытания, будут документироваться анонимно и обозначаться цифрами или символами. Если в исключительных обстоятельствах по соображениям безопасности или регулирования необходимо установить личность человека, OlioCRU Ltd и исследователь обязаны сохранять конфиденциальность такой информации.

Все данные, введенные в CRF, должны быть разборчивы и записаны черными чернилами. Если вам требуется исправление, его следует внести, удалив запись с одной строкой и введя правильную информацию рядом с самим элементом. Исправление должно быть подписано и датировано следователем или назначенным квалифицированным лицом.