Medición del impacto de la suplementación dietética con un nuevo producto de panadería en la microbiota intestinal y el metabolismo del colesterol

Los primeros resultados de los ensayos in vitro del proyecto PreBIOil han delineado la capacidad de una harina de aceitunas para modular la población microbiana del intestino humano de manera comparable a la de la inulina reconocida como polisacárido con capacidad prebiótica. Con base en estos resultados, y en otros de la literatura, se ha formulado el producto de panadería PreBIOil. El producto contiene harina de aceitunas, trigo sarraceno, guisantes y castañas.

El objetivo general del estudio es evaluar si la introducción en la dieta de un producto de panadería elaborado con harina de oliva mezclada con harina de alforfón, guisantes y castañas puede modificar el perfil de la microbiota intestinal y el colesterol plasmático, en particular el LDL. El estudio se configura como suplementación dietética, doble ciego, aleatorizado, paralelo al grupo control, en el que se comparará el siguiente producto:

i) un nuevo producto de panadería diseñado estudio PreBIOil (prueba); ii) un producto de panadería de control isoenergético (control).

Descripción del Alimento Complementado en el Ensayo El producto de ensayo es un producto horneado nuevo formulado con una mezcla de harina de aceituna, trigo sarraceno, guisante y castaña y tiene el aspecto de una galleta salada.

Se requerirá que los participantes consuman diariamente alrededor de 90 gramos del producto de prueba o de control. Las cantidades exactas de cada lote de producto se determinarán tras la evaluación de las características nutricionales del producto terminado con el fin de proporcionar el mismo aporte calórico con los dos productos.

Digestibilidad, fermentabilidad y modulación de la microbiota El trigo sarraceno es considerado un no cereal que además de contener fibra, minerales y vitaminas, como la B2 y la B6, también representa una fuente de compuestos antioxidantes por su contenido en flavonoides.

La harina de guisantes contiene componentes importantes para la dieta humana (almidón, proteínas y otros nutrientes). Los beneficios para la salud asociados con el consumo de guisantes se derivan principalmente de la concentración y las propiedades del almidón, las proteínas, la fibra, las vitaminas, los minerales y los fitoquímicos. La fibra contenida en el tegumento y en las paredes celulares del cotiledón contribuye a la función gastrointestinal. El contenido de almidón en la harina de guisantes se caracteriza por un índice glucémico más bajo. Las proteínas del guisante pueden producir péptidos con actividad antioxidante. El contenido de vitaminas y minerales de los guisantes puede desempeñar un papel importante en la prevención de enfermedades carenciales, en particular las relacionadas con las deficiencias de selenio y folato. Los guisantes contienen una variedad de fitoquímicos. Estos incluyen polifenoles que pueden tener actividad antioxidante y anticancerígena, saponinas que presentan actividades hipocolesterolémicas y anticancerígenas, y oligosacáridos de galactosa que pueden ejercer beneficios prebióticos en el intestino grueso.

Los componentes nutricionales de la harina de castañas consisten en hidratos de carbono, proteínas y grasas en la composición como para aportar un valor energético de unas 350-400 kcal/100 g. Se ha votado que las castañas tienen un efecto positivo en el metabolismo de las bacterias intestinales y son una fuente de ácidos grasos de cadena larga C18: 1 y C18: 2 y vitaminas (vitamina E). La posible presencia de polifenoles se limita a las pieles exteriores, generalmente separadas de la fruta durante la elaboración de la harina. La harina procedente de la pasta de aceituna no está descrita en la literatura científica por sus propiedades nutricionales específicas para la dieta humana. Sin embargo, las aceitunas son una parte integral de la dieta mediterránea en la que se consumen como aceitunas de mesa y aceite de oliva. El fruto del olivo contiene un 50 % de agua, un 22 % de grasas, un 19 % de hidratos de carbono y un 2 % de proteínas; el contenido de polifenoles varía en el rango de 1-3%. Las aceitunas se consumen ya sea como aceite de oliva o aceitunas de mesa. Las aceitunas se caracterizan por un fuerte amargor, causado principalmente por la dall'oleuropeína. La oleuropeína puede alcanzar los 140 mg/g de peso seco en aceitunas verdes y va disminuyendo a medida que madura el fruto. Las aceitunas de mesa son tratadas para mitigar el sabor amargo mediante procesos como la maceración soda y la fermentación en salmuera. Sin embargo, en el proceso de endulzamiento se pierde el amargor por encima de algunos compuestos importantes presentes en las aceitunas, como los polifenoles y la fibra. No existe evidencia sobre la capacidad de los polifenoles del aceite de oliva virgen extra para reducir el riesgo de enfermedad cardiovascular, pero aún no se han explorado gran parte de los posibles efectos de los componentes de la aceituna solos o en sinergia con los polifenoles. Además, gran parte de la fracción hidrosoluble contenida en las aceitunas, entre las que se encuentran las fibras y polifenoles con demostradas actividades beneficiosas para la salud humana, no se elimina en el proceso de elaboración del aceite. Hay evidencia de que algunas fracciones fenólicas como los secoiridoides son pobremente absorbidos por la mucosa intestinal y luego están disponibles para la microflora colónica. Esencialmente, el aceite en su totalidad tendría el mayor potencial como alimento, pudiendo modular beneficiosamente la composición y actividad de los microorganismos simbióticos del intestino humano, como se ha observado experimentalmente para otros tipos de frutas.

Mediante simulación in vitro de fermentación colónica se ha observado que la pasta de aceituna, incluso tras un horneado a 180°C durante 30', es capaz de modular la microbiota intestinal humana con efecto prebiótico o inducir un aumento significativo de bifidobacterias. Dicha simulación in vitro se llevó a cabo mediante incubación durante 24 h en un sistema de fermentación por lotes con control de pH y temperatura, previa inoculación con heces obtenidas de cinco individuos sanos. El análisis de polifenoles totales (principales antioxidantes presentes en el producto de prueba) presentes en la harina de aceitunas, en la mezcla de la harina y en el producto de prueba sí detectó una pérdida de polifenoles totales, como consecuencia del horneado igual al 40%.

Resultados clínicos Los resultados clínicos han demostrado que el consumo diario de 100 g de trigo sarraceno en forma de harina ha determinado el aumento de la relación HDL/colesterol y la mejora de la tolerancia a la glucosa y más recientemente se ha observado que el consumo de galletas a base de trigo sarraceno ha reducido la nivel sérico de un marcador de inflamación, mieloperoxidasa (MPO) además de una reducción del colesterol total con mejor capacidad vital pulmonar. Un metaanálisis reciente de varios estudios de intervención en la dieta humana con suplementos de legumbres, incluidos los guisantes, mostró su capacidad para disminuir los niveles séricos de colesterol LDL.

Se han realizado estudios de intervención sobre dieta con aceites de oliva, subproductos de la elaboración de aceitunas y productos a base de aceitunas con voluntarios sanos y sujetos con diversos grados de riesgo cardiovascular. De estos estudios se han indicado las dosis diarias de polifenoles totales introducidas (desde unos pocos mg/día a 30 mg/día, hasta 100 mg/día) en función del tipo de aceite de oliva y también enriquecimiento con extractos. Estas intervenciones tuvieron en muchos casos una duración de alrededor de un mes, y la mayoría de los estudios midieron los efectos de los cambios antioxidantes y antiinflamatorios en el sistema circulatorio, junto con los valores de lípidos plasmáticos y otros parámetros relacionados con el estrés oxidativo. En particular, en el estudio "EUROLIVE", en una amplia muestra de individuos sanos, se observó que los fenoles del aceite de oliva eran capaces de proteger los lípidos sanguíneos de la oxidación, aumentar la concentración de colesterol HDL y la relación entre glutatión reducido y oxidado, sin embargo no hay cambios dell'F2-isoprostano.

En 2011 la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) aprobó la afirmación de que los polifenoles del aceite de oliva, especialmente el hidroxitirosol, protegen las LDL de la oxidación, a una dosis superior o igual a 5 mg/kg/día. Otros estudios también han demostrado que los polifenoles del aceite de oliva están relacionados con la reducción de la CRP, la reducción de la expresión de genes aterogénicos en las células sanguíneas y la disminución de la presión arterial. Aunque existen evidencias sobre la capacidad de los polifenoles del aceite de oliva para reducir el riesgo de enfermedades cardiovasculares, gran parte de los posibles efectos de los componentes de la aceituna solos o en sinergia aún están por explorar. Además, gran parte de las fibras y polifenoles contenidos en la aceituna no se extraen en el proceso de extracción del aceite y se eliminan como subproducto.

Justificación del Estudio La harina de trigo sarraceno aporta fibra y flavonoides, la harina de arveja contiene hidratos de carbono de bajo índice glucémico, proteína y también es fuente de antioxidantes, la harina de castaña aporta sustancias prebióticas y vitaminas. La harina de aceituna es el fruto de la aceituna con sus componentes hidrosolubles (ej. Fibras y polifenoles) y en la fracción soluble de ácidos grasos poliinsaturados y monoinsaturados, tocoferoles y carotenoides que solo pasa parcialmente la oliva virgen extra. Estos componentes están diseñados en su mayoría como componentes del aceite de oliva virgen extra y científicamente se ha demostrado que contribuyen a la mejora del metabolismo de los lípidos y el marco de los lípidos plasmáticos, a la salud del corazón y protegen contra el estrés oxidativo.

En base a los estudios clínicos y experimentales disponibles, se ha sugerido que el consumo de un producto horneado elaborado con una mezcla de harina de pasta de oliva, trigo sarraceno, guisantes y castañas puede tener efectos positivos sobre los biomarcadores plasmáticos lipídicos y la microbiota intestinal (por ejemplo, un aumento de bifidobacterias) en participantes adultos con contenido plasmático de colesterol en niveles medios a altos aunque aún no patológicos.

Declaración de declaración de cumplimiento Este estudio se llevará a cabo de conformidad con el Protocolo y de acuerdo con las Buenas Prácticas Clínicas (GCP), como se describe en ICH GCP para 1996, el Código de Regulaciones Federales (CFR) de EE. UU. y la Declaración de Helsinki. Con la firma de este protocolo, el investigador se compromete a cumplir con estos requisitos.

Objetivos del estudio

El objetivo general del estudio es evaluar si la introducción en la dieta de un nuevo producto de panadería que contiene una mezcla de harina de pasta de aceituna, trigo sarraceno, guisantes, castañas es capaz de cambiar:

Objetivos principales:

1. El perfil de la microbiota fecal;
2. Niveles plasmáticos de colesterol total, LDL, relación/LDL total y HDL;
3. Los niveles plasmáticos de triglicéridos;
4. Apolipoproteína ApoA-I, ApoB y Lp (a).

Objetivos secundarios:

1. Los índices antropométricos 2 Los metabolitos secundarios de polifenoles en biofluidos humanos 3. Los perfiles de metabolitos en plasma y orina evaluados por análisis de espectrometría de masas (MS); 4. Los niveles de glucosa en sangre e insulina en ayunas; 5. proteína C reactiva (PRC); 6. Proteína C reactiva de alta sensibilidad (hsPRC); 7. isoprostano F2 urinario; 8. LDL oxidado en plasma.

Presentación diseño experimental Los participantes voluntarios serán identificados y reclutados en una parte ambulatoria de la Casa di Cura Eremo di Arco (TN). Los participantes serán informados sobre los propósitos y métodos del estudio y serán preseleccionados en base a criterios de inclusión/exclusión. El participante, firmará el consentimiento informado y entrará en el estudio después de la visita a T-1, realizada en el ambulatorio de Casa di Cura Eremo di Arco (TN), donde se realizará un estado de salud clínico y bioquímico. Para permitir un adecuado seguimiento de los hábitos alimentarios, el participante elegible, después de la primera visita llenará un diario de alimentación.

Si los sujetos serán elegibles para el estudio según todos los criterios de inclusión y exclusión, serán aleatorizados para recibir placebo o la integración activa en la visita T0.

La exploración clínica, y la recogida de sangre y orina se realizarán en ayunas de unas 10 horas al inicio del periodo de puesta en marcha (visita T-1). Se realizarán pruebas clínicas, muestras de sangre, recogida de heces y orina durante las visitas T0, T1. El diario de alimentación adicional (4 días consecutivos) se completará en las visitas T0 y antes de T1. Los eventos adversos, la toma de medicamentos y suplementos serán registrados por los participantes en un diario especial.

A los participantes incluidos en el estudio también se les pedirá que completen una evaluación sensorial de cada alimento ofrecido a ciegas, la primera degustación y al final de las 8 semanas de suplementación para cada producto.

Procedimiento del estudio Reclutamiento de participantes Los participantes serán identificados y reclutados en una parte ambulatoria de Casa di cura Eremo di Arco (TN) Los participantes serán informados sobre los propósitos y métodos del estudio y serán preseleccionados según los criterios de inclusión/exclusión . En caso de ser elegible, el participante firmará el consentimiento informado e ingresará al estudio con una visita a T-1, que se realizará durante un estado de salud clínico y bioquímico. Los sujetos que serán elegibles para el estudio en base a todos los criterios de inclusión/exclusión, serán incluidos en el estudio y aleatorizados para recibir el primer complemento alimenticio (prueba o control) para visitar T0 (dos semanas después por el run-in ).

suplementación

Después de evaluar la elegibilidad, los participantes serán asignados al azar para recibir la integración con el producto de panadería con el producto de prueba o de control:

Las dosis únicas diarias se envasarán en envases codificados por un grupo cualificado. La suplementación tendrá una duración de ocho semanas, doble ciego, paralelo. con uno de los dos productos (atribuido a la aleatorización).

Seguimiento El proyecto consistirá en un período de ocho semanas de suplementación, los exámenes clínicos y la recolección de sangre y orina se realizarán después de un ayuno nocturno (sin consumo de agua) de unas 10 horas para visitar T-1. Los exámenes clínicos, la extracción de sangre, la recolección de heces y los exámenes de orina se realizarán visitas a T0, T1: T0 es el día de la primera integración, T1 será ocho semanas después del inicio del tratamiento. El diario de alimentos se compilará para la visita T-1 y se distribuirá antes de las visitas T0 y T1 para las visitas de recolección de datos T0 y T1.

Evaluación clínica Electrocardiograma. Se realizará un ECG en la selección (T-1). Los trazados del ECG serán revisados ​​e interpretados por la parte ambulatoria de la residencia de ancianos Hermitage de Arco.

La presión arterial se medirá de acuerdo con las pautas para la hipertensión ISH/OMS 2004 Índices antropométricos El peso y la altura se medirán en una escala estándar. Las medidas se realizarán en sujetos sin zapatos, abrigos o ropa de abrigo. El índice de masa corporal, IMC, se calcula como kg/m2.

La circunferencia de la cintura (umbilical) se medirá de una manera determinada por los Institutos Nacionales de Salud, el Instituto Nacional del Corazón, los Pulmones y la Sangre. Se calcula la relación entre la circunferencia de la cintura y la proporción de la cadera (WHR).

Cuestionarios Toda la información será recolectada y registrada en cuestionarios validados, incluyendo identificación personal, historial médico e información sobre los factores de riesgo de enfermedades cardiovasculares, uso de medicamentos, actividad física y hábitos alimenticios. Además, cada participante escribirá un diario de alimentación de cuatro días.

A los participantes incluidos en el estudio también se les pedirá que completen una evaluación sensorial de cada alimento ofrecido en la primera degustación a ciegas y al final de las 8 semanas de suplementación.

Toma de muestras de sangre y recogida de orina La sangre (≤ 30 ml) se extraerá de una vena periférica, tras 10 horas de ayuno. Se recogerá orina de 24 h, se medirá el volumen y la muestra se almacenará a -80 °C.

Recolección de muestras fecales Las muestras fecales se procesarán dentro de las 12 horas posteriores a la recolección de la muestra. Se congelarán alícuotas de cada muestra fecal directamente a -80 °C para el análisis del perfil metabolómico.

Pruebas de laboratorio por el análisis de laboratorio de la Casa di Cura Eremo di Arco Las muestras de sangre se centrifugarán de acuerdo con los requisitos de las pruebas que se realizarán inmediatamente después de la extracción de sangre. El plasma o suero se separará, en parte se analizará inmediatamente y la fracción restante se almacenará a -80 °C.

Se evaluará colesterol total, colesterol HDL, triglicéridos y glucosa con método enzimático. El colesterol LDL se medirá analíticamente con un método enzimático.

Los niveles de insulina se evaluarán mediante electroquimioluminiscencia. El hemograma y el recuento de plaquetas se evaluarán por método impedenciométrico. La proteína C reactiva (PCR) se medirá mediante ensayo turbidimétrico. La proteína C reactiva de alta sensibilidad (hsPCR) se medirá mediante ensayo turbidimétrico.

La apolipoproteína AI (ApoA-I), ApoB y Lp (a) se determinaron por inmunoturbidimetría.

La prueba para la comprobación de la ausencia de glucosuria se realizará midiendo la concentración de glucosa en la orina.

Pruebas de laboratorio de la Fondazione Edmund Mach [EMF] Perfil metabolómico urinario y plasmático. Los F2-isoprostanos se medirán en orina como medida de estrés oxidativo, mediante kit EIA específico, previa purificación por cromatografía en fase sólida (columnas SepPack).

El análisis de LDL oxidada en el plasma se realizará con la ayuda del kit ELISA.

Las muestras de orina y sangre (plasma y suero) se someterán tanto a análisis de metabolómica dirigida (UPLC-MS/MS para compuestos no volátiles y GC-MS/MS para compuestos volátiles) como a análisis de metabolómica no dirigida (ULPC -Q -TOF-MS y Nano -FTMS-Q-TOF no volátil y GC-TOF para los compuestos volátiles). Para los perfiles de metabolitos plasmáticos específicos, se utilizará el Biocrates AbsoluteIDQ ® Kit P180 basado en MS, que genera datos cuantitativos precisos sobre 180 metabolitos humanos relacionados con el riesgo de diabetes. Además, se aplicarán análisis específicos dirigidos al perfil lipídico de los ácidos biliares séricos, ácidos grasos de cadena corta (ácidos grasos de cadena corta, SCFA) y cuantificación de metabolitos de los polifenoles de origen microbiano en biofluidos (incluidas las heces) con UPLC/ QQQ-MS/MS.

Análisis de la microbiota fecal. Los cambios en la microbiota fecal de poblaciones bacterianas específicas se evaluarán mediante el método de hibridación in situ con sondas fluorescentes (FISH).

También se evaluarán los cambios en la microbiota fecal utilizando un enfoque de metagenómica utilizando pirosecuenciación 454. En definitiva, tras la recogida de muestras de heces (n = 128, 2 muestras de heces en diferentes tiempos T0, T1 de 64 sujetos antes y después del consumo de cada alimento test y placebo) se procederá a la extracción del ADN genómico bacteriano mediante el kit SPIN FastDNA (MPbio ) específico para heces. Utilizando cebadores específicos para el gen 16S rRNA bacteriano (región hipervariable V1-V3) se realizará mediante amplificación por PCR y luego sometiendo el V1-V3 amplificado a 454 pirosecuenciación.

Utilizará la química de titanio GS FLX con adaptadores Multiplex Identifier (MID) para obtener secuencias de 600 pb de longitud que se analizarán comparando la base de datos filogenética de 16S rRNA, disponible públicamente, a través de la canalización QIIME que permite la asignación al nivel de género de humano microbiota intestinal. Se producirán un total de unas 20.000 secuencias por cada muestra fecal. Como control de calidad y análisis de la ecología microbiana, se utilizará una estadística multivariante con el fin de correlacionar los cambios en la composición de la microbiota fecal tras el consumo de alimentos de prueba o placebo.

Aleatorización cegada Los participantes serán asignados al azar, pero distribuidos equitativamente por sexo y edad, a uno de dos tratamientos: prueba de productos de panadería o producto de control, incluso utilizando un software específico. Los investigadores clínicos, los investigadores y el personal de laboratorio no conocerán la aleatorización.

Tratamiento La suplementación se introducirá en la dieta diaria mediante el consumo de un producto de panadería (prueba) para un consumo diario de 90 gramos de producto que contenga harina de aceitunas, de trigo sarraceno, de guisantes, castañas. La comida proporcionará una ingesta de calorías de control analógico. Los productos objeto de estudio (prueba o control) se suministrarán en envases que estarán etiquetados en el idioma local con el número de código del estudio. el nombre del fabricante, el número de pacientes, el número de visitas del estudio. Los productos se repartirán a los participantes a partir de la visita T0.

Duración del estudio y planificación Después de que se evalúe la elegibilidad, los participantes serán asignados al azar en dos grupos (prueba de producto o control) que seguirán 8 semanas de suplemento dietético.

La duración total del estudio, incluido el período de inicio (run-in) y el tratamiento, será de 10 semanas.

La contratación comenzará más tarde y dentro de los tres meses siguientes a la aprobación por parte del Comité de Ética.

El rodaje comenzará dentro de las dos semanas siguientes a la primera visita (T-1). Los sujetos serán reclutados durante un período de 10 meses y el estudio se completará dentro de los 12 meses desde el momento del primer reclutamiento.

Criterios para la interrupción del estudio De acuerdo con la Declaración de Helsinki, los estándares de buena práctica clínica de la ICH y las "Regulaciones de la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA)" de los Estados Unidos, una persona tiene derecho a retirarse del estudio en cualquier momento y por cualquier motivo, sin perjuicio de futuras atenciones médicas por parte del médico o de la institución. Los investigadores también tienen derecho a retirar a los sujetos del estudio (ver más abajo). En caso de que una persona (o su representante legalmente autorizado) decida retirarse, se hará todo lo posible para completar e informar las observaciones de la mejor manera posible. Se debe realizar una evaluación final integral en el momento de la baja del sujeto donde se debe registrar el motivo de la baja y en todo caso se debe intentar realizar una evaluación de seguimiento.

Los Sujetos pueden ser eliminados del estudio por las siguientes razones:

Incumplimiento del Protocolo por parte del experimentador Cumplimiento no significativo por parte del sujeto Negativa del sujeto a continuar el tratamiento o comentarios Toxicidad inaceptable Decisión del investigador de que el cierre es en el mejor interés médico del sujeto Evento poco claro de enfermedad o complicaciones Uso de medicamentos concomitantes incompatibles con el estudio. Embarazo Abuso de alcohol o drogas Quien interrumpa o sea retirado del estudio no será reemplazado.

Procedimiento para Terminar

Si un individuo se detiene antes de completar el estudio, se registrará el motivo y la fecha de corte. Debe registrarse la fecha de la última dosis de alimento en el estudio. En caso de terminación anticipada, se deberán realizar los siguientes trámites:

Pruebas clínicas (sistólica y diastólica, frecuencia cardiaca, peso y talla para calcular IMC y perímetro de cintura y cadera).

Toma de sangre y heces y recolección de orina. Un cuestionario de frecuencia de alimentos (semanal). En el caso de que la persona no pueda regresar para la visita de seguimiento, los investigadores habrán tratado de contactar a la persona por teléfono para rastrear cualquier evento adverso.

Si una persona retira el consentimiento para recibir alimentos en el estudio, se le alentará a permanecer en el estudio sin recibir tratamiento para la recopilación de datos de seguridad.

Los procedimientos de confiabilidad del producto en estudio Los productos (prueba o control) se proporcionarán en paquetes etiquetados en el idioma local con el número de código del estudio, el número de código del sitio, el nombre del fabricante, el número de participantes, el número de visitas del estudio, el número de lote, instrucciones de almacenamiento y fechas de caducidad. Los productos se repartirán a los participantes a partir de la visita T0.

Códigos de aleatorización Los códigos de aleatorización por sexo y edad, para cada participante, serán almacenados en sobre cerrado por grupo cualificado de Calidad Sensorial (QS del Departamento de Nutrición y Calidad Alimentaria del Centro de Investigación e Innovación de la Fundación Edmund Mach).

Control de fuente de datos Todos los datos recopilados durante el estudio se obtendrán de fuentes primarias, y se registrarán en documentos escritos y registros médicos electrónicos como sujeto. Los resultados de los resultados clínicos, de laboratorio y ECG se registrarán en el archivo de historia clínica electrónica del sujeto. Ningún dato será insertado directamente en el “formulario de reporte de caso” (CRF), sin ser transferido desde la fuente primaria, como registros en papel o electrónicos.

Terapia farmacológica concomitante Se considerará como terapia concomitante toda medicación tomada del sujeto en el plazo de un mes antes del inicio del estudio y/o administrada durante el estudio. Dicho tratamiento debe documentarse en la página correspondiente del CRF y en los registros médicos de los sujetos. Cualquier cambio en la terapia concomitante durante el estudio debe registrarse claramente y debe documentarse el motivo del cambio.

Se enviará una carta al médico de cada participante especificando cuáles son los tratamientos concomitantes incompatibles con el estudio. No se permitirá el uso de los siguientes medicamentos durante el estudio: anticoagulantes, antihipertensivos, hipolipemiantes, betabloqueantes, corticoides sistémicos, neurolépticos, antibióticos, laxantes, suplementos vitamínicos, antioxidantes y minerales, fibra dietética, prebióticos (p. inulina, oligofructosa) y probióticos. Por lo tanto, si el sujeto requiere terapias farmacológicas incompatibles con el estudio, el médico tratante notifica al sujeto que termine el estudio e informa al jefe del estudio y sigue los procedimientos para la terminación anticipada.

Grado de Cumplimiento Para evaluar el cumplimiento de la suplementación, se medirán los fenoles urinarios en sujetos que serán suplementados con pruebas de alimentos en T0, T1. Además, todos los envases sin usar o vacíos al final de cada semana serán devueltos a los experimentadores.

Métodos Seguridad No hubo problemas de seguridad durante estudios previos relacionados con el consumo de productos elaborados a partir de aceitunas, trigo sarraceno, harina de guisantes, harina de castañas.

El estudio será supervisado por personal médico y paramédico de la Casa di Cura Eremo de Arco. Los eventos adversos aún se registrarán durante todo el estudio. Los valores de laboratorio anormales que induzcan signos o síntomas clínicos o requieran intervención terapéutica serán notificados de inmediato al sujeto, si el sujeto ha expresado explícitamente su deseo de recibir dicha comunicación en forma de consentimiento informado. El sujeto tendrá la libertad de retirarse del estudio con antelación si necesita una intervención terapéutica no compatible con el estudio, o si experimenta eventos adversos que provoquen un cambio en los criterios de inclusión de este sujeto en el estudio. El sujeto seguirá siendo libre de retirarse del estudio en cualquier momento, en caso de que el estudio se deba a molestias después del procedimiento de finalización anticipada.

Análisis estadístico Las características básicas se enumeran por tipo de suplementación: las variables continuas se expresan como media +/- desviación estándar o medianas con rangos intercuartílicos y como porcentaje para las variables categóricas. Los datos con una distribución asimétrica seguirán un procesamiento de registro antes del análisis. Las diferencias entre los dos suplementos se evaluarán con métodos estadísticos univariados y multivariados. El medio antes y después de la intervención se comparará con el Modelo Lineal General (ANOVA) para medidas repetidas o para datos apareados. Realizarás regresiones lineales simples y múltiples para determinar las relaciones entre variables independientes; también realizaremos la prueba para evaluar las diferencias de cumplimiento detectadas en los tipos de suplementación. Los resultados se expresan como media +/- SEM y las diferencias se considerarán significativas cuando P <0,05. Los datos con una distribución asimétrica seguirán un procesamiento de registro antes del análisis.

El análisis principal se basará en una comparación de las diferencias en los niveles medios después del consumo del producto de prueba y después del consumo del control. También se medirán las diferencias entre los valores medios al final de cada suplementación (T1) en relación con el valor basal medio relativo (T0).

Las diferencias de tiempo entre brazos de tratamiento se evaluarán mediante análisis de varianza para medidas repetidas. El nivel de significancia se considerará <0,05 en dos colas.

El tamaño de la muestra para cada suplementación se ha determinado a 32 para detectar una disminución del colesterol LDL en el plasma igual a aproximadamente 15,44 mg/dl con una desviación estándar de 14,28 mg/dl usando la ecuación de Snedecor y Cochran con α igual a 0,05 y 1 -β igual a 0,9 (Dell et al., 2002). Según esta fórmula el número mínimo de asignaturas a matricular es igual a 28. Teniendo en cuenta posibles abandonos, 32 personas para la suplementación con el producto de prueba y 32 personas para la suplementación con el producto de control para un total de 64 sujetos voluntarios en este estudio.

La evaluación se realiza sobre la base de la abundancia de la disminución del colesterol LDL en plasma, sobre la base de las medidas (media y desviación estándar) del colesterol LDL informadas en un estudio paralelo publicado en el European Journal of Nutrition. El parámetro colesterol LDL, además de ser un efecto sobre la salud humana reconocido, es más restrictivo y requiere tiempos de observación más largos que la medida de la modificación de la microflora intestinal.

Acceso directo a datos/documentos de origen Las autoridades reguladoras pueden desear realizar controles en la investigación clínica para evaluar el cumplimiento de los principios de las BPC. Las autoridades reguladoras también pueden desear realizar una inspección (durante el ensayo o después de su finalización). Si una inspección requerida por una autoridad reguladora y / o el Comité de Ética de Ensayos Clínicos c/o APSS Trento, el investigador debe aceptar proporcionar acceso, autoridades reguladoras, la documentación relacionada con el estudio.

Gestión de datos y registros La fuente de los datos y la documentación se define como el primer lugar donde se registran los datos. Cualquier documento original no debe conservarse ni estar disponible en el mismo lugar. El investigador debe conservar los documentos originales de cada persona que participe en el estudio.

Los datos recogidos en el CRF durante el ensayo se documentarán de forma anónima, y ​​se identificarán mediante números o símbolos. Si en circunstancias excepcionales fuera necesario, por razones de seguridad o de regulación, identificar a la persona, OlioCRU Ltd y el investigador están obligados a mantener la confidencialidad de dicha información.

Todos los datos ingresados ​​en el CRF serán legibles y registrados en tinta negra. Si necesita una corrección, debe hacerlo eliminando la entrada con una sola línea e ingresando la información correcta al lado del elemento mismo. La corrección debe ser rubricada y fechada por el investigador, o una persona calificada designada.