Medindo o impacto da suplementação dietética com um novo produto de panificação na microbiota intestinal e no metabolismo do colesterol

Os primeiros resultados dos testes in vitro do projeto PreBIOil delinearam a capacidade de uma farinha de azeitonas de modular a população microbiana do intestino humano de maneira comparável à da inulina reconhecida como polissacarídeo com capacidade prebiótica. Com base nesses resultados, e em outros da literatura, foi formulado o produto de panificação PreBIOil. O produto contém farinha de azeitonas, trigo sarraceno, ervilha e castanha.

O objetivo geral do estudo é avaliar se a introdução na dieta de um produto de panificação preparado com farinha de azeitona, misturada com farinha de trigo sarraceno, ervilha e castanha pode alterar o perfil da microbiota intestinal e o colesterol plasmático, em particular o LDL. O estudo configura-se como suplementação dietética, duplo-cego, randomizado, paralelo com o grupo controle, no qual será comparado o seguinte produto:

i) um novo estudo de produto de panificação projetado PreBIOil (teste); ii) um isoenergético de controle de produto de panificação (controle).

Descrição do Alimento Suplementado no Experimento O produto teste é um novo produto de panificação formulado com uma mistura de farinha de azeitonas, trigo sarraceno, ervilha e castanha e tem a aparência de um biscoito salgado.

Os participantes serão obrigados a consumir diariamente cerca de 90 gramas de produto teste ou controle. As quantidades exatas de cada lote de produto serão determinadas após a avaliação das características nutricionais do produto acabado, a fim de fornecer a mesma ingestão calórica com os dois produtos.

Digestibilidade, fermentabilidade e modulação da microbiota O trigo sarraceno é considerado um não cereal que além de conter fibras, minerais e vitaminas, como B2 e B6, também representa fonte de compostos antioxidantes devido ao teor de flavonoides.

A farinha de ervilha contém componentes importantes para a dieta humana (amido, proteína e outros nutrientes). Os benefícios para a saúde associados ao consumo de ervilhas derivam principalmente da concentração e propriedades do amido, proteína, fibra, vitaminas, minerais e fitoquímicos. A fibra contida no tegumento e nas paredes celulares do cotilédone contribui para a função gastrointestinal. O teor de amido na farinha de ervilha é caracterizado por menor índice glicêmico. As proteínas da ervilha podem produzir peptídeos com atividade antioxidante. O conteúdo vitamínico e mineral das ervilhas pode desempenhar um papel importante na prevenção de doenças carenciais, em particular as relacionadas com as deficiências de selênio e folato. As ervilhas contêm uma variedade de fitoquímicos. Estes incluem polifenóis que podem ter propriedades antioxidantes e anticancerígenas, saponinas que apresentam atividades hipocolesterolêmicas e anticancerígenas e oligossacarídeos de galactose que podem exercer benefícios prebióticos no intestino grosso.

Os componentes nutricionais da farinha de castanha são constituídos por hidratos de carbono, proteínas e gorduras na sua composição de forma a fornecer um valor energético de cerca de 350-400 kcal/100 g. As castanhas foram votadas para ter um efeito positivo no metabolismo das bactérias intestinais e são uma fonte de ácidos graxos de cadeia longa C18: 1 e C18: 2 e vitaminas (vitamina E). A possível presença de polifenóis é limitada às cascas externas, geralmente separadas da fruta durante a produção da farinha. A farinha proveniente da pasta de azeitona não é descrita na literatura científica por propriedades nutricionais específicas para a dieta humana. No entanto, as azeitonas são parte integrante da dieta mediterrânea, na qual são consumidas como azeitonas de mesa e azeite. A azeitona contém 50% de água, 22% de gordura, cerca de 19% de hidratos de carbono e cerca de 2% de proteína; o teor de polifenol varia na faixa de 1-3%. As azeitonas são consumidas ou como azeite ou azeitonas de mesa. As azeitonas são caracterizadas por forte amargor, causado principalmente dall'oleuropein. A oleuropeína pode chegar a 140 mg/g de peso seco em azeitonas verdes e vai diminuindo à medida que o fruto amadurece As azeitonas de mesa são tratadas para atenuar o sabor amargo através de processos como maceração soda e fermentação em salmoura. No entanto, no processo de adoçar o amargor perde alguns compostos importantes presentes nas azeitonas, como polifenóis e fibras. Não há evidências sobre a capacidade dos polifenóis do azeite de oliva extra virgem reduzirem o risco de doenças cardiovasculares, mas grande parte dos possíveis efeitos dos componentes da azeitona isoladamente ou em sinergia com os polifenóis ainda são inexplorados. Além disso, grande parte da fração hidrossolúvel contida nas azeitonas, entre as quais as fibras e polifenóis com comprovadas atividades benéficas à saúde humana, não é removida no processo de produção do azeite. Há evidências de que algumas frações fenólicas como secoiridóides são pouco absorvidas pela mucosa intestinal e ficam então disponíveis para a microflora colônica. Essencialmente o óleo em sua totalidade teria o maior potencial como alimento pode modular beneficamente a composição e atividade de microrganismos simbióticos do intestino humano, conforme observado experimentalmente para outros tipos de frutas.

Através da simulação in vitro da fermentação colónica observou-se que a pasta de azeitona, mesmo após cozedura a 180°C durante 30', é capaz de modular a microbiota intestinal humana com efeito prebiótico ou induzir um aumento significativo de bifidobactérias. Tal simulação in vitro foi realizada por incubação por 24 h em sistema de fermentação batelada com controle de pH e temperatura, após inoculação com fezes obtidas de cinco indivíduos saudáveis. A análise de polifenóis totais (principais antioxidantes presentes no produto teste) presentes na farinha de azeitonas, na mistura da farinha e no produto teste detectou uma perda de polifenóis totais, em decorrência do cozimento igual a 40%.

Resultados Clínicos Resultados clínicos demonstraram que o consumo diário de 100 g de trigo sarraceno na forma de farinha determinou o aumento da relação HDL/colesterol e melhorou a tolerância à glicose e mais recentemente observou-se que o consumo de biscoitos de trigo sarraceno reduziu a nível sérico de um marcador de inflamação, a mieloperoxidase (MPO), além de redução do colesterol total com melhor capacidade vital pulmonar. Uma meta-análise recente de vários estudos de intervenção na dieta humana com suplementação de leguminosas, incluindo ervilhas, mostrou sua capacidade de diminuir os níveis séricos de colesterol LDL.

Estudos de intervenção sobre dieta com azeites, subprodutos do processamento de azeitonas e produtos à base de azeitonas têm sido realizados em voluntários saudáveis ​​e indivíduos com vários graus de risco cardiovascular. Destes estudos foram indicadas as doses diárias de polifenóis totais introduzidas (desde alguns mg/dia até 30 mg/dia, até 100 mg/dia) consoante o tipo de azeite e também o enriquecimento com extratos. Essas intervenções duraram em muitos casos cerca de um mês, e a maioria dos estudos mediu os efeitos das alterações antioxidantes e anti-inflamatórias no sistema circulatório, juntamente com os valores de lipídios plasmáticos e outros parâmetros relacionados ao estresse oxidativo. Em particular no estudo "EUROLIVE", em uma grande amostra de indivíduos saudáveis, observou-se que os fenóis do azeite foram capazes de proteger os lipídios do sangue da oxidação, aumentar a concentração de colesterol HDL e a relação entre glutationa reduzida e oxidada, contudo nenhuma modificação dell'F2-isoprostane.

Em 2011, a European Food Safety Authority (EFSA) aprovou a alegação de que os polifenóis do azeite, especialmente o hidroxitirosol, protegem o LDL da oxidação, em uma dose maior ou igual a 5 mg/kg/dia. Outros estudos também mostraram que os polifenóis do azeite estão relacionados à redução da PCR, redução da expressão gênica aterogênica nas células sanguíneas e diminuição da pressão arterial. Embora existam evidências sobre a capacidade dos polifenóis do azeite de reduzir o risco de doenças cardiovasculares, grande parte dos possíveis efeitos dos componentes da azeitona isoladamente ou em sinergia ainda são inexplorados. Além disso, grande parte das fibras e polifenóis contidos na azeitona não são extraídos no processo de extração do óleo e eliminados como subproduto.

Justificativa do Estudo A farinha de trigo sarraceno agrega fibras e flavonoides, a farinha de ervilha contém carboidratos de baixo índice glicêmico, proteína e também é fonte de antioxidantes, a farinha de castanha traz substâncias prebióticas e vitaminas. A farinha de azeitona é o fruto da azeitona com os seus componentes solúveis em água (ex. Fibras e polifenóis) e na fração solúvel de ácidos graxos poliinsaturados e monoinsaturados, tocoferóis e carotenóides que passam apenas parcialmente pela azeitona extra virgem. Esses componentes são projetados principalmente como componentes do azeite de oliva extra virgem e cientificamente deram evidências de contribuir para a melhoria do metabolismo lipídico e do quadro de lipídios plasmáticos, para a saúde do coração e proteção contra o estresse oxidativo.

Com base nos estudos clínicos e experimentais disponíveis, sugere-se que o consumo de um produto de panificação elaborado a partir de uma mistura de farinha de pasta de azeitona, trigo sarraceno, ervilhas e castanhas pode ter efeitos positivos nos biomarcadores lipídicos plasmáticos e na microbiota intestinal (por exemplo, aumento de bifidobactérias) em participantes adultos com conteúdo plasmático de colesterol em níveis médios a altos, mesmo que ainda não seja patológico.

Declaração de conformidade Este estudo será realizado em conformidade com o Protocolo e de acordo com as Boas Práticas Clínicas (GCP), conforme descrito no ICH GCP de 1996, o Código de Regulamentos Federais dos EUA (CFR) e a Declaração de Helsinque. Com a assinatura deste protocolo, o pesquisador concorda em cumprir esses requisitos.

Objetivos do estudo

O objetivo geral do estudo é avaliar se a introdução na dieta de um novo produto de panificação contendo uma mistura de farinhas de pasta de azeitona, trigo sarraceno, ervilhas, castanhas é capaz de alterar:

Objetivos primários:

1. O perfil da microbiota fecal;
2. Níveis plasmáticos de colesterol total, LDL, razão/LDL total e HDL;
3. Os níveis plasmáticos de triglicerídeos;
4. Apolipoproteína ApoA-I, ApoB e Lp (a).

Objetivos secundários:

1.Os índices antropométricos 2 Os metabolitos secundários dos polifenóis nos biofluidos humanos 3.Os perfis dos metabolitos no plasma e na urina avaliados por análise de espectrometria de massas (MS); 4. Os níveis de glicemia e insulina em jejum; 5. Proteína C reativa (PRC); 6. Proteína C reativa de alta sensibilidade (hsPRC); 7. isoprostano F2 urinário; 8. LDL oxidado no plasma.

Apresentação desenho experimental Participantes voluntários serão identificados e recrutados em uma parte ambulatorial da Casa di Cura Eremo di Arco (TN). Os participantes serão informados sobre os objetivos e métodos do estudo e serão pré-selecionados com base em critérios de inclusão/exclusão. O participante assinará o consentimento informado e entrará no estúdio após a visita ao T-1, realizada no ambulatório da Casa di Cura Eremo di Arco (TN), onde será realizado um estado de saúde clínico e bioquímico. Para permitir o acompanhamento adequado dos hábitos alimentares, o participante elegível, após a primeira visita, preencherá um diário alimentar.

Se os indivíduos forem elegíveis para o estudo com base em todos os critérios de inclusão e exclusão, serão randomizados para receber placebo ou a integração ativa na visita T0.

O exame clínico e a coleta de sangue e urina serão realizados em jejum de cerca de 10 horas no início do período inicial (visita T-1). Exames clínicos, coleta de sangue, coleta de fezes e urina serão realizados durante as visitas T0, T1. Diário alimentar adicional (4 dias consecutivos) será preenchido nas visitas T0 e antes de T1. Eventos adversos, uso de medicamentos e suplementos serão registrados pelos participantes em um diário especial.

Os participantes incluídos no estudo também serão solicitados a preencher uma avaliação sensorial de cada alimento oferecido às cegas, na primeira degustação e ao final de 8 semanas de suplementação para cada produto

Procedimento do estudo Recrutamento dos participantes Os participantes serão identificados e recrutados em um ambulatório da Casa di cura Eremo di Arco (TN) Os participantes serão informados sobre os propósitos e métodos do estudo e serão pré-selecionados com base nos critérios de inclusão/exclusão . Se elegível, o participante assinará o consentimento informado e entrará no estúdio com uma visita ao T-1, que será realizada durante um estado de saúde clínico e bioquímico. Os indivíduos que serão elegíveis para o estudo com base em todos os critérios de inclusão/exclusão, serão incluídos no estudo e randomizados para receber a primeira suplementação alimentar (teste ou controle) para visitar T0 (duas semanas depois pelo run-in ).

Suplementação

Após a avaliação da elegibilidade, os participantes serão randomizados para receber a integração com o produto de panificação com o produto teste ou controle:

As doses únicas diárias serão acondicionadas em embalagens codificadas por um grupo qualificado. A suplementação terá duração de oito semanas, duplo-cego, paralelas. com um dos dois produtos (atribuído à randomização).

Acompanhamento O projeto consistirá em um período de oito semanas de suplementação, exames clínicos e coleta de sangue e urina serão feitos após jejum noturno (excluindo consumo de água) de cerca de 10 horas para visita ao T-1. Serão realizados exames clínicos, coleta de sangue, coleta de fezes e exames de urina nas visitas a T0, T1: T0 é o dia da primeira integração, T1 será oito semanas após o início do tratamento. O diário alimentar será compilado para a visita T-1 e distribuído antes das visitas T0 e T1 para coleta de dados nas visitas T0 e T1.

Avaliação clínica Eletrocardiograma. Um ECG será realizado na triagem (T-1). Os traçados do ECG serão revisados ​​e interpretados pela parte ambulatorial da casa de repouso Hermitage of Arco.

A pressão arterial será medida de acordo com as diretrizes para hipertensão ISH/OMS 2004 Índices antropométricos Peso e altura serão medidos em uma balança padrão. As medidas serão realizadas em indivíduos sem sapatos, casacos ou roupas quentes. O índice de massa corporal, IMC, é calculado como kg/m2.

A circunferência da cintura (umbilical) será medida da maneira determinada pelos Institutos Nacionais de Saúde, Instituto Nacional do Coração, Pulmão e Sangue. A relação entre a circunferência da cintura e a relação quadril (RCQ) é calculada.

Questionários Todas as informações serão coletadas e registradas em questionários validados, incluindo identificação pessoal, histórico médico e informações sobre os fatores de risco para doenças cardiovasculares, uso de medicamentos, atividade física e hábitos alimentares. Além disso, um diário alimentar de quatro dias será escrito por cada participante.

Os participantes incluídos no estudo também serão solicitados a preencher uma avaliação sensorial de cada alimento oferecido na primeira degustação cega e ao final de 8 semanas de suplementação.

Amostragem de sangue e coleta de urina O sangue (≤ 30 ml) será colhido de uma veia periférica, após 10 horas de jejum. A urina de 24h será coletada, o volume medido e a amostra será armazenada a -80°C.

Coleta de amostras fecais As amostras fecais serão processadas em até 12 horas após a coleta. Alíquotas de cada amostra fecal serão congeladas diretamente a -80°C para análise do perfil metabolômico.

Testes laboratoriais pela análise laboratorial da Casa di Cura Eremo di Arco As amostras de sangue serão centrifugadas de acordo com os requisitos dos testes a serem realizados imediatamente após a coleta de sangue. O plasma ou soro será separado, em parte imediatamente testado e a fração restante armazenada a -80°C.

Colesterol total, colesterol HDL, triglicerídeos e glicose serão avaliados por método enzimático. O colesterol LDL será medido analiticamente com método enzimático.

Os níveis de insulina serão avaliados por eletroquimioluminescência. O hemograma e a contagem de plaquetas serão avaliados pelo método impantiométrico. A proteína C reativa (PCR) será dosada por ensaio turbidimétrico. A proteína C-reativa de alta sensibilidade (hsPCR) será dosada por ensaio turbidimétrico.

A apolipoproteína AI (ApoA-I), ApoB e Lp (a) foram determinadas por imunoturbidimetria.

O teste para verificação da ausência de glicosúria será feito medindo a concentração de glicose na urina.

Exames laboratoriais da Fondazione Edmund Mach [EMF] Perfil metabolômico urinário e plasmático. Os F2-isoprostanos serão dosados ​​na urina como medida de estresse oxidativo, por meio de kit EIA específico, após purificação por cromatografia em fase sólida (colunas SepPack).

A análise do LDL oxidado no plasma será realizada com o auxílio do kit ELISA.

As amostras de urina e sangue (plasma e soro) serão submetidas tanto à análise de metabolômica direcionada (UPLC-MS/MS para compostos não voláteis e GC-MS/MS para compostos voláteis) quanto à análise de metabolômica não direcionada (ULPC -Q -TOF-MS e Nano-FTMS-Q-TOF não voláteis e GC-TOF para os compostos voláteis). Para perfis de metabólitos plasmáticos direcionados, será usado o Biocrates AbsoluteIDQ ® Kit P180 baseado em MS, gerando dados quantitativos precisos sobre 180 metabólitos humanos relacionados ao risco de diabetes. Além disso, análises direcionadas específicas serão aplicadas ao perfil lipídico dos ácidos biliares séricos, ácidos graxos de cadeia curta (ácidos graxos de cadeia curta, SCFAs) e quantificação de metabólitos dos polifenóis de origem microbiana em biofluidos (incluindo fezes) com UPLC / QQQ-MS/MS.

Análise da microbiota fecal. Alterações na microbiota fecal de populações bacterianas específicas serão avaliadas pelo método de hibridização in situ com sondas fluorescentes (FISH).

Também as mudanças na microbiota fecal serão avaliadas usando uma abordagem de metagenômica usando pirosequenciamento 454. Em suma, após a coleta de amostras de fezes (n = 128, 2 amostras de fezes em diferentes momentos T0, T1 de 64 indivíduos antes e após o consumo de cada alimento teste e placebo) será extraído o DNA genômico bacteriano usando o kit SPIN FastDNA (MPbio ) específico para fezes. Utilizando primers específicos para o gene 16S rRNA bacteriano (região hipervariável V1-V3) será realizada a amplificação por PCR e então a amplificação do V1-V3 será realizada em 454 pirosequenciamento.

Irá utilizar o GS FLX Titanium Chemistry com adaptadores Multiplex Identifier (MID) para obter sequências de comprimento 600 bp que serão analisadas por comparação com a base de dados filogenética de 16S rRNA, disponível publicamente, através do pipeline QIIME que permite a atribuição ao nível de género de humano microbiota intestinal. Serão produzidas um total de cerca de 20.000 sequências para cada amostra fecal. Como controle de qualidade e análise da ecologia microbiana, será utilizada uma estatística multivariada para correlacionar as mudanças na composição da microbiota fecal após o consumo de alimento teste ou placebo.

Randomização cega Os participantes serão designados aleatoriamente, mas igualmente distribuídos por sexo e idade, para um dos dois tratamentos: teste de produto de panificação ou produto de controle, mesmo usando software específico. Os pesquisadores clínicos, investigadores e pessoal de laboratório serão cegos para a randomização.

Tratamento A suplementação será introduzida na alimentação diária através do consumo de um produto de panificação (teste) para um consumo diário de 90 gramas de produto contendo farinha de azeitonas, de trigo sarraceno, de ervilhas, castanhas. A comida fornecerá um controle analógico da ingestão de calorias. Os produtos em estudo (teste ou controle) serão fornecidos em embalagens que serão rotuladas no idioma local com o número do código do estudo. o nome do fabricante, o número de pacientes, o número de visitas do estudo. Os produtos serão distribuídos aos participantes da visita T0.

Duração do estudo e planejamento Após a avaliação da elegibilidade, os participantes serão randomizados em dois grupos (teste do produto ou controle) que seguirão 8 semanas de suplementação dietética.

A duração total do estudo, incluindo o período inicial (run-in) e o tratamento, será de 10 semanas.

O recrutamento começará mais tarde e dentro de três meses após a aprovação do Comitê de Ética.

O run-in começará dentro de duas semanas da primeira visita (T-1). Os indivíduos serão recrutados durante um período de 10 meses e o estudo será concluído em 12 meses a partir do momento do primeiro recrutamento.

Critérios para descontinuação do estudo De acordo com a Declaração de Helsinque, os padrões de boas práticas clínicas do ICH e os "Regulamentos da Food and Drug Administration (FDA)" dos Estados Unidos, uma pessoa tem o direito de se retirar do estudo a qualquer momento e por qualquer motivo, sem prejuízo de futuros cuidados médicos por parte do médico ou da instituição. Os investigadores também têm o direito de retirar os participantes do estudo (veja abaixo). Caso uma pessoa (ou um representante legalmente autorizado) decida se aposentar, todos os esforços serão feitos para completar e relatar as observações da melhor maneira possível. Uma avaliação final abrangente deve ser feita no momento da retirada do sujeito, onde o motivo da retirada deve ser registrado e, em qualquer caso, deve ser feita uma tentativa de realizar uma avaliação de acompanhamento.

Os Sujeitos podem ser removidos do estudo pelos seguintes motivos:

Violação do protocolo a partir do experimentador Cumprimento não significativo por parte do sujeito A recusa do sujeito em continuar o tratamento ou comentários Toxicidade inaceitável Decisão do pesquisador de que o fechamento é do melhor interesse médico do sujeito Evento pouco claro de doença ou complicações Uso de medicamentos concomitantes incompatíveis com o estudo. Gravidez Abuso de álcool ou drogas Aqueles que descontinuarem ou forem retirados do estudo não serão substituídos.

Procedimento para Rescisão

Se um indivíduo parar antes da conclusão do estudo, o motivo e a data limite serão registrados. A data da última dose de alimento no estudo deve ser registrada. Em caso de rescisão antecipada, os seguintes procedimentos devem ser realizados:

Exames clínicos (sistólica e diastólica, frequência cardíaca, peso e altura para cálculo do IMC e circunferência da cintura e do quadril).

Tomando sangue e fezes e coleta de urina. Um questionário de frequência alimentar (semanal). Caso o indivíduo não possa retornar para a consulta de acompanhamento, os investigadores tentarão entrar em contato com a pessoa por telefone para rastrear quaisquer eventos adversos.

Se uma pessoa retirar o consentimento para receber alimentação no estúdio, você será encorajado a permanecer no estudo sem receber tratamento para a coleta de dados de segurança.

Os procedimentos de confiabilidade do produto em estudo Os produtos (teste ou controle) serão fornecidos em embalagens rotuladas no idioma local com o número do código do estudo, o número do código do local, o nome do fabricante, o número de participantes, o número de visitas do estudo, número de lote, instruções de armazenamento e datas de validade. Os produtos serão distribuídos aos participantes da visita T0.

Aleatorização dos códigos Os códigos de randomização por sexo e idade, para cada participante, serão armazenados em envelope lacrado por grupo qualificado de Qualidade Sensorial (QS do Departamento de Nutrição e Qualidade Alimentar do Centro de Pesquisa e Inovação da Fundação Edmund Mach).

Controle da fonte de dados Todos os dados coletados durante o estudo serão obtidos de fontes primárias e serão registrados em documentos escritos e registros médicos eletrônicos como o sujeito. Os resultados dos resultados clínicos, laboratoriais e ECG serão registrados no prontuário eletrônico do paciente. Nenhum dado será inserido diretamente no "formulário de relato de caso" (CRF), sem que seja transferido da fonte primária, como prontuários em papel ou eletrônicos.

Terapia medicamentosa concomitante Qualquer medicação tomada do sujeito dentro de um mês antes do início do estudo e/ou administrada durante o estudo será considerada como terapia concomitante. Tal tratamento deve ser documentado na página apropriada do CRF e nos prontuários médicos dos sujeitos. Quaisquer alterações na terapia concomitante durante o estudo devem ser claramente registradas e o motivo da alteração deve ser documentado.

Uma carta será enviada ao médico de cada participante, especificando quais são os tratamentos concomitantes incompatíveis com o estudo. O uso dos seguintes medicamentos não será permitido durante o estudo: anticoagulantes, anti-hipertensivos, hipolipemiantes, betabloqueadores, corticosteróides sistêmicos, neurolépticos, antibióticos, laxantes, suplementos vitamínicos, antioxidantes e minerais, fibras alimentares, prebióticos (por exemplo inulina, oligofrutose) e probióticos. Portanto, se o sujeito requer terapias medicamentosas incompatíveis com o estudo, o sujeito é notificado pelo médico assistente para encerrar o estudo e informar o chefe do estudo e seguir os procedimentos para o término antecipado.

Classificação de Cumprimento Para avaliar o cumprimento da suplementação, serão medidos os fenóis urinários nos sujeitos que serão suplementados com testes alimentares em T0, T1. Além disso, todas as embalagens não utilizadas ou vazias ao final de cada semana serão devolvidas aos experimentadores.

Métodos Segurança Não houve problemas de segurança durante os estudos anteriores relacionados ao consumo de produtos feitos de azeitonas, trigo sarraceno, farinha de ervilha, farinha de castanha.

O estudo será monitorado pela equipe médica e paramédica da Casa di Cura Eremo de Arco. Os eventos adversos ainda serão registrados ao longo do estudo. Valores laboratoriais anormais que induzam sinais ou sintomas clínicos ou requeiram intervenção terapêutica serão prontamente notificados ao sujeito, caso o sujeito tenha manifestado explicitamente que deseja receber tal comunicação na forma de consentimento informado. O sujeito terá liberdade para se retirar do estudo com antecedência caso necessite de intervenção terapêutica não compatível com o estudo, ou caso apresente eventos adversos que provoquem alteração nos critérios de inclusão deste sujeito no estudo. O sujeito ainda estará livre para se retirar do estudo a qualquer momento, caso o estudo seja devido a desconforto após o procedimento de término antecipado.

Análise estatística As características básicas são listadas por tipo de suplementação: variáveis ​​contínuas são expressas como média +/- desvio padrão ou medianas com intervalos interquartis e como porcentagem para variáveis ​​categóricas. Os dados com uma distribuição assimétrica seguirão um processamento de log antes da análise. As diferenças entre os dois suplementos serão avaliadas com métodos estatísticos univariados e multivariados. O meio antes e depois da intervenção será comparado com o Modelo Linear Geral (ANOVA) para medidas repetidas ou para dados pareados. Você realizará regressões lineares simples e múltiplas para determinar as relações entre variáveis ​​independentes; também faremos o teste para avaliar as diferenças de adesão detectadas nos tipos de suplementação. Os resultados são expressos como média +/- SEM e as diferenças serão consideradas significativas quando P <0,05. Os dados com uma distribuição assimétrica seguirão um processamento de log antes da análise.

A análise principal será baseada na comparação das diferenças nos níveis médios após o consumo do produto teste e após o consumo do controle. Também serão mensuradas as diferenças entre os valores médios ao final de cada suplementação (T1) em relação ao valor médio relativo basal (T0).

As diferenças de tempo entre os braços de tratamento serão avaliadas por análise de variância para medidas repetidas. O nível de significância será considerado <0,05 em duas caudas.

O tamanho da amostra para cada suplementação foi determinado em 32 para detectar uma diminuição do colesterol LDL no plasma igual a cerca de 15,44 mg/dl com desvio padrão de 14,28 mg/dl usando a equação de Snedecor e Cochran com α igual a 0,05 e 1 -β igual a 0,9 (Dell et al., 2002). De acordo com esta fórmula, o número mínimo de disciplinas a inscrever é igual a 28. Levando em consideração possíveis desistências, 32 pessoas para suplementação com o produto teste e 32 pessoas para suplementação com produto controle para um total de 64 sujeitos voluntários neste estudo.

A avaliação é feita com base na abundância da diminuição do colesterol LDL no plasma, com base nas medidas (média e desvio padrão) do colesterol LDL relatadas em um estudo paralelo publicado no European Journal of Nutrition. O parâmetro colesterol LDL, além de ser um efeito reconhecido na saúde humana, é mais restritivo e requer tempos de observação maiores do que a extensão da modificação da microflora intestinal.

Acesso direto a dados/documentos de origem As autoridades reguladoras podem desejar realizar verificações em pesquisas clínicas para avaliar a conformidade com os princípios do GCP. As autoridades reguladoras também podem desejar realizar uma inspeção (durante o julgamento ou após sua conclusão). Se for uma inspeção exigida por uma autoridade reguladora e/ou pelo Comitê de Ética para Ensaios Clínicos c/o APSS Trento, o pesquisador deve concordar em fornecer acesso, às autoridades reguladoras, à documentação relacionada ao estudo.

Gerenciamento de Dados e Registros A fonte dos dados e documentação é definida como o primeiro local onde os dados são registrados. Quaisquer documentos originais e não devem ser guardados e disponibilizados no mesmo local. O pesquisador deve manter os documentos originais de cada participante do estudo.

Os dados coletados no CRF durante o julgamento serão documentados de forma anônima, sendo identificados por números ou símbolos. Se em circunstâncias excepcionais for necessário, por razões de segurança ou regulamentação, identificar a pessoa, a OlioCRU Ltda e o pesquisador são obrigados a manter tais informações confidenciais.

Todos os dados inseridos no CRF devem estar legíveis e registrados em tinta preta. Caso necessite de uma correção, esta deve ser feita apagando a entrada com uma única linha e inserindo as informações corretas ao lado do próprio item. A correção deve ser rubricada e datada pelo investigador ou por uma pessoa qualificada designada.