Měření dopadu doplňku stravy s novým pečivem na střevní mikroflóru a metabolismus cholesterolu

První výsledky in vitro testování projektu PreBIOil načrtly schopnost olivové mouky modulovat mikrobiální populaci lidského střeva způsobem srovnatelným s inulinem uznaným jako polysacharid s kapacitou prebiotik. Na základě těchto výsledků a dalších v literatuře byl formulován pekárenský produkt PreBIOil. Výrobek obsahuje mouku z oliv, pohanky, hrachu a kaštanu.

Celkovým cílem studie je posoudit, zda zavedení pekařského výrobku připraveného z olivové mouky smíchaného s pohankovou, hrachovou a kaštanovou moukou do stravy může změnit profil střevní mikrobioty a plazmatického cholesterolu, zejména LDL. Studie je nastavena jako suplementace stravy, dvojitě zaslepená, randomizovaná, paralelní s kontrolní skupinou, ve které bude srovnáván následující produkt:

i) studie PreBIOil (test) navržená pro nový pekařský výrobek; ii) kontrola pekařských výrobků izoenergetická (kontrola).

Popis potraviny doplněné ve zkoušce Testovaný výrobek je nový pečený výrobek vyrobený ze směsi mouky z oliv, pohanky, hrachu a kaštanu a má vzhled slané sušenky.

Účastníci budou muset denně zkonzumovat asi 90 gramů testovaného nebo kontrolního produktu. Přesné množství každé šarže produktu bude stanoveno po posouzení nutričních charakteristik hotového produktu, aby byl zajištěn stejný příjem kalorií s oběma produkty.

Stravitelnost, fermentovatelnost a modulace mikrobioty Pohanka je považována za neobilovinu, která kromě obsahu vlákniny, minerálů a vitamínů, jako je B2 a B6, představuje díky obsahu flavonoidů také zdroj antioxidačních sloučenin.

Hrachová mouka obsahuje důležité složky lidské výživy (škrob, bílkoviny a další živiny). Zdravotní přínosy spojené s konzumací hrachu primárně pocházejí z koncentrace a vlastností škrobu, bílkovin, vlákniny, vitamínů, minerálů a fytochemikálií. Vláknina obsažená ve skořápce a v buněčných stěnách děložního lístku přispívá k funkci trávicího traktu. Obsah škrobu v hrachové mouce se vyznačuje nižším glykemickým indexem. Proteiny z hrachu mohou produkovat peptidy s antioxidační aktivitou. Obsah vitamínů a minerálů v hrachu může hrát důležitou roli v prevenci onemocnění z nedostatku, zejména těch, které souvisí s nedostatkem selenu a folátu. Hrách obsahuje různé fytochemikálie. Patří mezi ně polyfenoly, které mohou mít antioxidační a protirakovinné účinky, saponiny, které jsou přítomny hypocholesterolemickou a protirakovinnou aktivitou, a oligosacharidy galaktózy, které mohou mít prebiotické výhody v tlustém střevě.

Nutriční složky kaštanové mouky se skládají ze sacharidů, bílkovin a tuku ve složení tak, aby poskytovalo energetickou hodnotu cca 350-400 kcal/100 g. Kaštany byly odhlasovány pro pozitivní vliv na metabolismus střevních bakterií a jsou zdrojem mastných kyselin s dlouhým řetězcem C18: 1 a C18: 2 a vitamínů (vitamín E). Možná přítomnost polyfenolů je omezena na vnější slupky, které se obvykle oddělují od ovoce při výrobě mouky. Mouka pocházející z olivové pasty není ve vědecké literatuře popsána pro specifické nutriční vlastnosti pro lidskou stravu. Olivy jsou však nedílnou součástí středomořské stravy, ve které se konzumují jako stolní olivy a olivový olej. Olivový plod obsahuje 50 % vody, 22 % tuku, asi 19 % sacharidů a asi 2 % bílkovin; obsah polyfenolů se pohybuje v rozmezí 1-3 %. Olivy se konzumují jako olivový olej nebo stolní olivy. Olivy se vyznačují silnou hořkostí, způsobenou většinou dall'oleuropein. Oleuropein může dosáhnout 140 mg/g sušiny v nezralých olivách a klesá a jak ovoce dozrává Stolní olivy se upravují tak, aby se zmírnila hořká chuť pomocí procesů, jako je macerace sody a fermentace ve slaném nálevu. V procesu slazení však hořkost ztratila některé důležité sloučeniny přítomné v olivách, jako jsou polyfenoly a vláknina. Neexistují žádné důkazy o schopnosti polyfenolů extra panenského olivového oleje snižovat riziko kardiovaskulárních onemocnění, ale velká část možných účinků složek oliv samotných nebo v synergii s polyfenoly je stále neprozkoumaná. Navíc velká část ve vodě rozpustné frakce obsažené v olivách, mezi nimiž jsou vlákna a polyfenoly s prokazatelně prospěšnými účinky na lidské zdraví, se v procesu výroby oleje neodstraní. Existují důkazy, že některé fenolické frakce jako sekoiridoidy jsou špatně absorbovány střevní sliznicí a jsou pak dostupné pro mikroflóru tlustého střeva. Největší potenciál by měl v podstatě olej jako celek, protože potravina může příznivě modulovat složení a aktivitu mikroorganismů symbiotických lidských střev, jak bylo experimentálně pozorováno u jiných druhů ovoce.

Pomocí simulace in vitro fermentace tlustého střeva bylo pozorováno, že olivová pasta i po pečení při 180°C po dobu 30 minut je schopna modulovat lidskou střevní mikroflóru s prebiotickým účinkem nebo indukovat významný nárůst bifidobakterií. Taková simulace in vitro byla provedena inkubací po dobu 24 hodin ve vsádkovém fermentačním systému s kontrolou pH a teploty, po inokulaci stolicí získanou od pěti zdravých jedinců. Analýza celkových polyfenolů (hlavních antioxidantů přítomných v testovaném produktu) přítomných v olivové mouce, ve směsi mouky a v testovaném produktu odhalila ztrátu celkových polyfenolů v důsledku pečení ve výši 40 %.

Klinické výsledky Klinické výsledky ukázaly, že denní konzumace 100 g pohanky ve formě mouky určovala zvýšení poměru HDL/cholesterol a zlepšila glukózovou toleranci a nedávno bylo pozorováno, že konzumace sušenek vyrobených z pohanky snížila sérové ​​hladiny markeru zánětu, myeloperoxidázy (MPO) vedle snížení celkového cholesterolu s lepší vitální kapacitou plic. Nedávná metaanalýza několika intervenčních studií o lidské stravě doplněním luštěnin, včetně hrachu, ukázala jejich schopnost snižovat sérové ​​hladiny LDL cholesterolu.

Intervenční studie stravy s olivovými oleji, vedlejšími produkty zpracování oliv a produkty na bázi oliv byly provedeny se zdravými dobrovolníky a subjekty s různým stupněm kardiovaskulárního rizika. Z těchto studií byly indikovány denní dávky celkových zavedených polyfenolů (od několika mg/den do 30 mg/den, až 100 mg/den) v závislosti na typu olivového oleje a také obohacení o extrakty. Tyto intervence trvaly v mnoha případech zhruba měsíc a většina studií měřila vliv antioxidačních a protizánětlivých změn v oběhovém systému spolu s hodnotami plazmatických lipidů a dalšími parametry souvisejícími s oxidačním stresem. Zejména ve studii „EUROLIVE“ na velkém vzorku zdravých jedinců bylo pozorováno, že fenoly olivového oleje byly schopny chránit krevní lipidy před oxidací, zvyšovat koncentraci HDL cholesterolu a vztah mezi redukovaným a oxidovaným glutathionem, nicméně žádné změny dell'F2-isoprostan.

V roce 2011 Evropský úřad pro bezpečnost potravin (EFSA) schválil tvrzení, že polyfenoly olivového oleje, zejména hydroxytyrosol, chrání LDL před oxidací v dávce vyšší nebo rovné 5 mg/kg/den. Další studie také ukázaly, že polyfenoly olivového oleje souvisí se snížením CRP, sníženou expresí aterogenních genů v krevních buňkách a snížením krevního tlaku. Ačkoli existují důkazy o schopnosti polyfenolů olivového oleje snižovat riziko kardiovaskulárních onemocnění, velká část možných účinků složek oliv samotných nebo v synergii je stále neprozkoumaná. Navíc velká část vláken a polyfenolů obsažených v olivách není extrahována v procesu extrakce oleje a eliminována jako vedlejší produkt.

Zdůvodnění studie Pohanková mouka dodává vlákninu a flavonoidy, hrachová mouka obsahuje sacharidy s nízkým glykemickým indexem, bílkoviny a je také zdrojem antioxidantů, kaštanová mouka přináší prebiotické látky a vitamíny. Olivová mouka je plodem olivovníku se svými ve vodě rozpustnými složkami (např. Vláknina a polyfenoly) a v rozpustné frakci polynenasycených a mononenasycených mastných kyselin, tokoferolů a karotenoidů, které pouze částečně přecházejí na extra panenské olivy. Tyto složky jsou navrženy většinou jako složky extra panenského olivového oleje a vědecky prokázaly, že přispívají ke zlepšení metabolismu lipidů a plazmatických lipidů, ke zdraví srdce a ochraně proti oxidativnímu stresu.

Na základě dostupných klinických a experimentálních studií bylo navrženo, že konzumace pečeného produktu vyrobeného ze směsi mouky z olivové pasty, pohanky, hrášku a kaštanů může mít pozitivní účinky na biomarkery lipidové plazmy a střevní mikrobiotu (např. bifidobakterií) u dospělých účastníků se středními až vysokými hladinami cholesterolu v plazmě, i když ještě nejsou patologické.

Prohlášení o shodě Tato studie bude provedena v souladu s Protokolem a v souladu se správnou klinickou praxí (GCP), jak je popsáno v ICH GCP pro rok 1996, US Code of Federal Regulations (CFR) a Helsinské deklaraci. Podpisem tohoto protokolu se výzkumník zavazuje dodržovat tyto požadavky.

Cíle studia

Celkovým cílem studie je posoudit, zda zavedení nového pekařského výrobku obsahujícího směs mouky z olivové pasty, pohanky, hrachu, kaštanů do jídelníčku může změnit:

Primární cíle:

1. Profil fekální mikrobioty;
2. Plazmatické hladiny celkového cholesterolu, LDL, poměr / celkový LDL a HDL;
3. Plazmatické hladiny triglyceridů;
4. Apolipoprotein ApoA-I, ApoB a Lp (a).

Sekundární cíle:

1. Antropometrické indexy 2 Sekundární metabolity polyfenolů v lidských biotekutinách 3. Profily metabolitů v plazmě a moči stanovené analýzou hmotnostní spektrometrie (MS); 4. Hladiny glukózy v krvi a inzulinu nalačno; 5. C-reaktivní protein (PRC); 6. Vysoce citlivý C-reaktivní protein (hsPRC); 7. močový isoprostan F2; 8. oxidovaný LDL v plazmě.

Prezentační experimentální design V ambulantní části Casa di Cura Eremo di Arco (TN) budou identifikováni a přijati účastníci dobrovolníci. Účastníci budou informováni o účelech a metodách studie a budou předem vybráni na základě kritérií pro zařazení/vyloučení. Účastník podepíše informovaný souhlas a vstoupí do studia po návštěvě T-1, provedené v ambulantní části Casa di Cura Eremo di Arco (TN), kde mu bude provedeno klinické a biochemické zjištění zdravotního stavu. Aby bylo možné řádně sledovat stravovací návyky, oprávněný účastník po první návštěvě vyplní stravovací deník.

Pokud budou subjekty způsobilé pro studii na základě všech kritérií pro zařazení a vyloučení, budou randomizovány tak, aby dostávaly buď placebo nebo aktivní integraci při návštěvě T0.

Klinické vyšetření a odběr krve a moči se provede po lačnění po dobu asi 10 hodin na začátku počátečního období (návštěva T-1). Při návštěvách T0, T1 budou provedeny klinické testy, odběry krve, odběr stolice a moči. Další stravovací deník (4 po sobě jdoucí dny) bude vyplněn při návštěvách T0 a před T1. Nežádoucí příhody, užívání léků a doplňků budou účastníci zaznamenávat do speciálního deníku.

Účastníci zahrnutí do studie budou také požádáni o vyplnění senzorického hodnocení každé nabízené potraviny naslepo, první ochutnání a na konci 8 týdnů suplementace u každého produktu

Postup studie Nábor účastníků Účastníci budou identifikováni a přijati v ambulantní části Casa di cura Eremo di Arco (TN) Účastníci budou informováni o účelech a metodách studie a budou předem vybráni na základě kritérií pro zařazení/vyloučení . V případě způsobilosti účastník podepíše informovaný souhlas a vstoupí do studia s návštěvou T-1, která bude provedena během klinického a biochemického zdravotního stavu. Subjekty, které budou způsobilé pro studii na základě všech kritérií pro zařazení/vyloučení, budou zahrnuty do studie a randomizovány tak, aby dostaly první potravinový doplněk (test nebo kontrola), aby navštívily T0 (o dva týdny později při záběhu ).

Suplementace

Po posouzení způsobilosti budou účastníci náhodně vybráni, aby obdrželi integraci s pekařským produktem s testovacím nebo kontrolním produktem:

Jednotlivé denní dávky budou baleny do balíčků zakódovaných kvalifikovanou skupinou. Suplementace bude trvat osm týdnů, dvojitě zaslepená, paralelně. s jedním ze dvou produktů (přisuzovaných randomizaci).

Pokračování Projekt se bude skládat z období osmi týdnů suplementace, klinických vyšetření a odběru krve a moči bude proveden po celonočním hladovění (bez spotřeby vody) v délce asi 10 hodin na návštěvu T-1. Klinické testy, odběr krve, odběr stolice a vyšetření moči budou provedeny návštěvy T0, T1: T0 je den první integrace, T1 bude osm týdnů po zahájení léčby. Potravinový deník bude sestaven pro návštěvu T-1 a distribuován před návštěvami T0 a T1 pro návštěvy se sběrem dat T0 a T1.

Klinické hodnocení Elektrokardiogram. Při screeningu bude provedeno EKG (T-1). Záznamy EKG budou přezkoumány a interpretovány ambulantní částí pečovatelského domu Hermitage of Arco.

Krevní tlak bude měřen podle pokynů pro hypertenzi ISH / WHO 2004 Antropometrické indexy Hmotnost a výška budou měřeny na standardní stupnici. Opatření budou prováděna na subjektech bez obuvi, kabátu nebo teplého oblečení. Index tělesné hmotnosti, BMI, se vypočítá jako kg/m2.

Obvod pasu (pupeční) bude měřen způsobem stanoveným Národním institutem zdraví, Národním institutem srdce, plic a krve. Vypočítá se poměr obvodu pasu a boků (WHR).

Dotazníky Všechny informace budou shromážděny a zaznamenány do ověřených dotazníků, včetně osobní identifikace, anamnézy a informací o rizikových faktorech kardiovaskulárních onemocnění, užívání léků, fyzické aktivitě a stravovacích návycích. Každý účastník si také napíše čtyřdenní stravovací deník.

Účastníci zařazení do studie budou také požádáni o vyplnění senzorického hodnocení každé nabízené potraviny při první slepé degustaci a na konci 8 týdnů suplementace.

Odběr vzorků krve a moči Krev (≤ 30 ml) bude odebrána z periferní žíly po 10 hodinách hladovění. Moč bude odebírána 24 hodin, změřený objem a vzorek bude uchováván při -80 °C.

Odběr vzorků stolice Vzorky stolice budou zpracovány do 12 hodin od odběru vzorků. Alikvoty každého vzorku stolice se zmrazí přímo na -80 °C pro analýzu metabolomického profilu.

Laboratorní testy laboratorní analýzou Casa di Cura Eremo di Arco Vzorky krve budou centrifugovány podle požadavků testů, které budou provedeny ihned po odběru krve. Plazma nebo sérum budou odděleny, zčásti okamžitě testovány a zbývající frakce uložena při -80 °C.

Celkový cholesterol, HDL cholesterol, triglyceridy a glukóza budou hodnoceny enzymatickou metodou. LDL cholesterol bude měřen analyticky enzymatickou metodou.

Hladiny inzulínu budou hodnoceny elektrochemioluminescenzou. Krevní obraz a počet krevních destiček budou hodnoceny metodou impedentiometric. C-reaktivní protein (CRP) bude měřen turbidimetrickým testem. Vysoce citlivý C-reaktivní protein (hsPCR) bude měřen turbidimetrickým testem.

Apolipoprotein AI (ApoA-I), ApoB a Lp (a) byly stanoveny imunoturbidimetrem.

Test na ověření nepřítomnosti glukosurie bude proveden měřením koncentrace glukózy v moči.

Laboratorní testy Fondazione Edmund Mach [EMF] Metabolomický profil moči a plazmy. F2-isoprostany budou měřeny v moči jako míra oxidačního stresu, pomocí specifického kitu EIA, po čištění chromatografií na pevné fázi (kolony SepPack).

Analýza LDL oxidovaného v plazmě bude provedena pomocí soupravy ELISA.

Vzorky moči a krve (plazmy a séra) budou podrobeny jak analýze cílené metabolomiky (UPLC-MS / MS pro netěkavé látky, tak GC-MS / MS pro těkavé látky), která analyzuje necílenou metabolomiku (ULPC -Q -TOF-MS a Nano -FTMS-Q-TOF netěkavé a GC-TOF pro těkavé sloučeniny). Pro profily cílených plazmatických metabolitů bude použita souprava Biocrates AbsoluteIDQ ® Kit P180 založená na MS, generující přesná kvantitativní data o 180 lidských metabolitech spojených s rizikem diabetu. Kromě toho bude specifická cílená analýza aplikována na lipidový profil sérových žlučových kyselin, mastných kyselin s krátkým řetězcem (mastné kyseliny s krátkým řetězcem, SCFA) a kvantifikaci metabolitů polyfenolů mikrobiálního původu v biotekutách (včetně stolice) pomocí UPLC / QQQ-MS / MS.

Analýza fekální mikroflóry. Změny ve fekální mikrobiotě specifických bakteriálních populací budou hodnoceny metodou in situ hybridizace s fluorescenčními sondami (FISH).

Také změny ve fekální mikrobiotě budou hodnoceny pomocí metagenomického přístupu pomocí pyrosekvenování 454. Stručně řečeno, po odběru vzorků stolice (n = 128, 2 vzorky stolice v různých časech T0, T1 od 64 subjektů před a po konzumaci každého potravinového testu a placeba) bude extrahována bakteriální genomová DNA pomocí soupravy SPIN FastDNA (MPbio ) specifické pro výkaly. S použitím primerů specifických pro bakteriální gen 16S rRNA (hypervariabilní oblast V1-V3) bude provedena PCR amplifikací a poté podrobením amplifikované V1-V3 při 454 pyrosekvenování.

Použije GS FLX Titanium Chemistry s adaptéry Multiplex Identifier (MID) k získání sekvencí o délce 600 bp, které budou analyzovány porovnáním databáze 16S rRNA fylogenetické, veřejně dostupné, prostřednictvím potrubí QIIME, které umožňuje přiřazení k úrovni rodu člověka střevní mikrobiota. Celkem bude vyrobeno asi 20 000 sekvencí pro každý vzorek stolice. Jako kontrola kvality a analýza mikrobiální ekologie bude použita vícerozměrná statistika, aby bylo možné korelovat změny ve složení fekální mikroflóry po konzumaci testovaných potravin nebo placeba.

Randomizace zaslepení Účastníci budou náhodně, ale rovnoměrně rozděleni podle pohlaví a věku do jednoho ze dvou ošetření: test pekařského produktu nebo kontrolní produkt, a to i pomocí specifického softwaru. Kliničtí výzkumníci, vyšetřovatelé a laboratorní personál budou vůči randomizaci zaslepeni.

Léčba Suplementace bude zavedena do denní stravy konzumací pekařského výrobku (test) na denní spotřebu 90 gramů výrobku s moukou z oliv, z pohanky, z hrášku, kaštanů. Jídlo poskytne analogovou kontrolu příjmu kalorií. Produkty, které jsou předmětem studie (test nebo kontrola), budou dodávány v baleních, která budou v místním jazyce označena číselným kódem studie. jméno výrobce, počet pacientů, počet studijních návštěv. Produkty budou distribuovány účastníkům z návštěvy T0.

Délka studie a plánování Po posouzení způsobilosti budou účastníci randomizováni do dvou skupin (test produktu nebo kontrola), které budou následovat po 8 týdnech doplňování stravy.

Celková doba trvání studie, včetně počátečního období (záběhu) a léčby bude 10 týdnů.

Nábor bude zahájen později a do tří měsíců od schválení etickou komisí.

Záběh začne do dvou týdnů od první návštěvy (T-1). Subjekty budou přijímány po dobu 10 měsíců a studie bude dokončena do 12 měsíců od doby prvního náboru.

Kritéria pro přerušení studie V souladu s Helsinskou deklarací, standardy správné klinické praxe ICH a "Food and Drug Administration (FDA) Regulations" Spojených států má osoba právo ze studie kdykoli odstoupit a z jakéhokoli důvodu, aniž by tím byla dotčena budoucí lékařská péče ze strany lékaře nebo instituce. Vyšetřovatelé mají také právo odebrat studijní předměty (viz níže). V případě, že se osoba (nebo osoba zplnomocněná osoba) rozhodne odejít do důchodu, bude vynaloženo veškeré úsilí k co nejlepšímu doplnění a nahlášení pozorování. Konečné komplexní posouzení by mělo být provedeno v době stažení předmětu, kde musí být zapsán důvod pro stažení, a v každém případě by měl být učiněn pokus o provedení následného hodnocení.

Subjekty mohou být ze studie odstraněny z následujících důvodů:

Porušení protokolu ze strany experimentátora Nesmysluplné dodržování ze strany subjektu Odmítnutí subjektu pokračovat v léčbě nebo komentáře Nepřijatelná toxicita Rozhodnutí výzkumníka, že uzavření je v nejlepším lékařském zájmu subjektu Nejasný případ onemocnění nebo komplikací Použití souběžné léky, které nejsou kompatibilní se studií. Těhotenství Zneužívání alkoholu nebo drog Osoby, které přeruší studii nebo budou staženy ze studie, nebudou nahrazeny.

Postup pro ukončení

Pokud se jednotlivec zastaví před dokončením studie, bude zaznamenán důvod a datum ukončení. Je třeba zaznamenat datum poslední dávky potravy ve studii. V případě předčasného ukončení je třeba provést následující postupy:

Klinické testy (systolický a diastolický, srdeční frekvence, hmotnost a výška pro výpočet BMI a obvodu pasu a boků).

Odběr krve a stolice a odběr moči. Dotazník frekvence jídla (týdně). V případě, že se jedinec nemůže vrátit na následnou návštěvu, vyšetřovatelé tápali, zda dotyčnou osobu kontaktovat telefonicky, aby sledovali případné nežádoucí příhody.

Pokud osoba odvolá souhlas s přijímáním jídla ve studiu, budete vyzváni, abyste zůstali ve studii bez léčby za účelem shromažďování údajů o bezpečnosti.

Postupy spolehlivosti zkoumaného produktu Produkty (test nebo kontrola) budou poskytovány v balíčcích označených v místním jazyce s kódovým číslem studie, číslem kódu místa, jménem výrobce, počtem účastníků, počet návštěv studie, číslo šarže, pokyny pro skladování a data expirace. Produkty budou distribuovány účastníkům z návštěvy T0.

Randomizace kódů Kódy randomizace podle pohlaví a věku pro každého účastníka budou uloženy v zapečetěné obálce kvalifikovanou skupinou senzorické kvality (QS oddělení výživy a kvality potravin Výzkumného a inovačního centra Nadace Edmunda Macha).

Kontrola zdrojů dat Všechna data shromážděná během studie budou získána z primárních zdrojů a budou zaznamenána v písemných dokumentech a elektronických lékařských záznamech jako subjekt. Výsledky klinických, laboratorních výsledků a EKG budou zaznamenány do elektronické kartotéky zdravotnického záznamu subjektu. Žádná data nebudou vložena přímo do „formuláře případové zprávy“ (CRF), aniž by byla přenesena z primárního zdroje, jako jsou papírové záznamy nebo elektronické.

Souběžná medikamentózní terapie Jakákoli medikace odebraná subjektu během jednoho měsíce před začátkem studie a/nebo podaná během studie bude považována za souběžnou terapii. Takové ošetření musí být zdokumentováno na příslušné stránce CRF a lékařských záznamech subjektů. Jakékoli změny souběžné terapie během studie musí být jasně zaznamenány a důvod změny by měl být zdokumentován.

Lékaři každého účastníka bude zaslán dopis, ve kterém bude specifikováno, jaké jsou souběžné léčby neslučitelné se studií. Během studie nebude povoleno užívání následujících léků: léky na ředění krve, antihypertenziva, hypolipidemika, betablokátory, systémové kortikosteroidy, neuroleptika, antibiotika, laxativa, vitamínové doplňky, antioxidanty a minerály, vláknina, prebiotika (např. inulin, oligofruktóza) a probiotika. Pokud tedy subjekt vyžaduje lékové terapie neslučitelné se studií, ošetřujícím lékařem je subjekt informován, aby studii ukončil a informoval vedoucího studie a dodržoval postupy pro předčasné ukončení.

Hodnocení shody Pro posouzení shody se suplementací budou měřeny fenoly v moči u subjektů, které budou doplněny potravinovými testy v T0, T1. Kromě toho budou všechny nepoužité nebo prázdné obaly na konci každého týdne vráceny experimentátorům.

Metody Zabezpečení Během předchozích studií nebyly zaznamenány žádné bezpečnostní problémy související s konzumací produktů vyrobených z oliv, pohanky, hrachové mouky, kaštanové mouky.

Studie bude monitorována lékařským a zdravotnickým personálem Casa di Cura Eremo z Arca. Nežádoucí příhody budou během studie stále zaznamenávány. Abnormální laboratorní hodnoty, které vyvolávají klinické příznaky nebo symptomy nebo vyžadují terapeutickou intervenci, budou subjektu neprodleně oznámeny, pokud subjekt výslovně vyjádřil, že si přeje přijímat takové sdělení ve formě informovaného souhlasu. Subjekt bude mít možnost ze studie předem odstoupit, pokud potřeba terapeutického zásahu není kompatibilní se studií, nebo pokud se u vás objeví nežádoucí příhody, které způsobí změnu kritérií pro zařazení tohoto subjektu do studie. Subjekt bude mít stále možnost kdykoli ze studie odstoupit v případě, že je studie způsobena nepohodlím po postupu pro předčasné ukončení.

Statistická analýza Základní rysy jsou uvedeny podle typu doplnění: spojité proměnné jsou vyjádřeny jako průměr +/- směrodatná odchylka nebo mediány s mezikvartilovými rozpětími a v procentech u kategoriálních proměnných. Data s asymetrickým rozdělením budou před analýzou následovat zpracování protokolu. Rozdíly mezi těmito dvěma doplňky budou vyhodnoceny pomocí jednorozměrných a vícerozměrných statistických metod. Médium před a po intervenci bude porovnáno s obecným lineárním modelem (ANOVA) pro opakovaná měření nebo pro spárovaná data. Budete provádět jednoduché a vícenásobné lineární regrese k určení vztahů mezi nezávislými proměnnými; také provedeme test, abychom vyhodnotili rozdíly ve shodě zjištěné u typů suplementace. Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr +/- SEM a rozdíly budou považovány za významné, když P <0,05. Data s asymetrickým rozdělením budou před analýzou následovat zpracování protokolu.

Hlavní analýza bude založena na srovnání rozdílů středních hladin po konzumaci testovaného produktu a po konzumaci kontroly. Budou také měřeny rozdíly mezi průměrnými hodnotami na konci každé suplementace (T1) ve vztahu k relativní průměrné základní hodnotě (T0).

Rozdíly v čase mezi léčebnými rameny budou vyhodnoceny analýzou rozptylu pro opakovaná měření. Hladina významnosti bude uvažována <0,05 ve dvou bodech.

Velikost vzorku pro každou suplementaci byla stanovena na 32, aby se detekoval pokles LDL cholesterolu v plazmě rovný asi 15,44 mg/dl se standardní odchylkou 14,28 mg/dl pomocí rovnice Snedecor a Cochran s α rovným 0,05 a 1 -p rovné 0,9 (Dell et al., 2002). Podle tohoto vzorce je minimální počet předmětů k zápisu roven 28. Vezmeme-li v úvahu možné předčasné ukončení, 32 osob pro suplementaci testovaným produktem a 32 osob pro suplementaci kontrolním produktem pro celkem 64 dobrovolných subjektů v této studii.

Hodnocení se provádí na základě četnosti poklesu LDL cholesterolu v plazmě, na základě měření (průměr a směrodatná odchylka) LDL cholesterolu hlášených v paralelní studii publikované v European Journal of Nutrition. Parametr LDL cholesterol, kromě toho, že je uznáván účinek na lidské zdraví, je restriktivnější a vyžaduje delší dobu pozorování než rozsah modifikace střevní mikroflóry.

Přímý přístup ke zdrojovým datům/dokumentům Regulační orgány mohou chtít provádět kontroly klinického výzkumu za účelem vyhodnocení souladu se zásadami GCP. Regulační orgány mohou také chtít provést kontrolu (během hodnocení nebo po jeho skončení). Pokud je inspekce vyžadována regulačním orgánem a/nebo Etickou komisí pro klinická hodnocení c/o APSS Trento, musí výzkumník souhlasit s poskytnutím přístupu regulačním orgánům k dokumentaci související se studií.

Správa dat a záznamy Zdroj dat a dokumentace je definován jako první místo, kde se data zaznamenávají. Jakékoli originální dokumenty a neměly by být uchovávány a zpřístupňovány na stejném místě. Výzkumník si musí ponechat originály dokumentů pro každou osobu účastnící se studie.

Údaje shromážděné na CRF během pokusu budou zdokumentovány anonymním způsobem a budou označeny čísly nebo symboly. Pokud je za výjimečných okolností z bezpečnostních nebo regulačních důvodů nutné identifikovat osobu, OlioCRU Ltd a výzkumník jsou povinni zachovat důvěrnost těchto informací.

Všechny údaje zapsané do CRF musí být čitelné a zaznamenané černým inkoustem. Pokud požadujete opravu, měla by být provedena smazáním položky s jedním řádkem a zadáním správných informací vedle položky samotné. Opravu musí parafovat a datovat zkoušející nebo určená kvalifikovaná osoba.