Mesurer l'impact de la supplémentation alimentaire avec un nouveau produit de boulangerie sur le microbiote intestinal et le métabolisme du cholestérol

Les premiers résultats des tests in vitro du projet PreBIOil ont délimité la capacité d'une farine d'olives à moduler la population microbienne de l'intestin humain d'une manière comparable à celle de l'inuline reconnue comme polysaccharide à capacité prébiotique. Sur la base de ces résultats, et d'autres dans la littérature, le produit de boulangerie PreBIOil a été formulé. Le produit contient de la farine d'olives, de sarrasin, de pois et de châtaigne.

L'objectif global de l'étude est d'évaluer si l'introduction dans l'alimentation d'un produit de boulangerie préparé avec de la farine d'olive, mélangée à de la farine de sarrasin, de pois et de châtaignes peut modifier le profil du microbiote intestinal et du cholestérol plasmatique, en particulier le LDL. L'étude est mise en place sous forme de complémentation alimentaire, en double aveugle, randomisée, parallèle au groupe témoin, dans laquelle le produit suivant sera comparé :

i) un nouveau produit de boulangerie a conçu l'étude PreBIOil (test); ii) un produit de boulangerie contrôle isoénergétique (témoin).

Description de l'aliment supplémenté dans l'essai Le produit testé est un produit de boulangerie nouveau formulé avec un mélange de farine d'olive, de sarrasin, de pois et de châtaigne et a l'aspect d'un biscuit salé.

Les participants devront consommer quotidiennement environ 90 grammes de produit de test ou de contrôle. Les quantités exactes de chaque lot de produit seront déterminées suite à l'évaluation des caractéristiques nutritionnelles du produit fini afin d'apporter le même apport calorique avec les deux produits.

Digestibilité, fermentescibilité et modulation du microbiote Le sarrasin est considéré comme une non-céréale qui, en plus de contenir des fibres, des minéraux et des vitamines, telles que B2 et B6, représente également une source de composés antioxydants en raison de la teneur en flavonoïdes.

La farine de pois contient des composants importants pour l'alimentation humaine (amidon, protéines et autres nutriments). Les avantages pour la santé associés à la consommation de pois proviennent principalement de la concentration et des propriétés de l'amidon, des protéines, des fibres, des vitamines, des minéraux et des composés phytochimiques. La fibre contenue dans le tégument et dans les parois cellulaires du cotylédon contribue à la fonction gastro-intestinale. La teneur en amidon de la farine de pois se caractérise par un index glycémique plus bas. Les protéines de pois peuvent produire des peptides à activité antioxydante. La teneur en vitamines et minéraux du pois peut jouer un rôle important dans la prévention des maladies de carence, en particulier celles liées aux carences en sélénium et en folate. Les pois contiennent une variété de composés phytochimiques. Ceux-ci comprennent des polyphénols qui peuvent avoir des propriétés antioxydantes et anticancéreuses, des saponines qui présentent des activités hypo colestérolémiques et anticancéreuses, et des oligosaccharides de galactose qui peuvent exercer des avantages prébiotiques dans le gros intestin.

Les composants nutritionnels de la farine de châtaigne sont constitués de glucides, de protéines et de graisses dans la composition de manière à fournir une valeur énergétique d'environ 350-400 kcal / 100 g. Les châtaignes ont été votées pour avoir un effet positif sur le métabolisme des bactéries intestinales et sont une source d'acides gras à longue chaîne C18 : 1 et C18 : 2 et de vitamines (vitamine E). La présence éventuelle de polyphénols est limitée aux pellicules extérieures, généralement séparées du fruit lors de la fabrication de la farine. La farine issue de la pâte d'olive n'est pas décrite dans la littérature scientifique pour des propriétés nutritionnelles spécifiques à l'alimentation humaine. Cependant, les olives font partie intégrante du régime méditerranéen dans lequel elles sont consommées sous forme d'olives de table et d'huile d'olive. L'olive contient 50 % d'eau, 22 % de matières grasses, environ 19 % de glucides et environ 2 % de protéines ; la teneur en polyphénols varie dans la plage de 1 à 3 %. Les olives sont consommées soit sous forme d'huile d'olive soit d'olives de table. Les olives sont caractérisées par une forte amertume, causée principalement dall'oleuropéine. L'oleuropéine peut atteindre 140 mg / g de poids sec dans les olives non mûres et diminue et à mesure que le fruit mûrit, les olives de table sont traitées pour atténuer le goût amer grâce à des processus tels que la macération à la soude et la fermentation en saumure. Cependant, dans le processus d'adoucissement, l'amertume a perdu certains composés importants présents dans les olives, tels que les polyphénols et les fibres. Il n'existe aucune preuve sur la capacité des polyphénols de l'huile d'olive extra vierge à réduire le risque de maladies cardiovasculaires, mais une grande partie des effets possibles des composants de l'olive seuls ou en synergie avec les polyphénols sont encore inexplorés. De plus, une grande partie de la fraction hydrosoluble contenue dans les olives, entre lesquelles se trouvent les fibres et les polyphénols aux activités bénéfiques prouvées sur la santé humaine, n'est pas éliminée lors du processus de production d'huile. Il est prouvé que certaines fractions phénoliques comme les sécoiridoïdes sont mal absorbées par la muqueuse intestinale et sont alors disponibles pour la microflore colique. Essentiellement l'huile dans son intégralité aurait le plus grand potentiel car un aliment peut moduler avantageusement la composition et l'activité des micro-organismes symbiotiques de l'intestin humain, comme observé expérimentalement pour d'autres types de fruits.

Grâce à la simulation in vitro de la fermentation colique, il a été observé que la pâte d'olive, même après cuisson à 180°C pendant 30', est capable de moduler le microbiote intestinal humain avec un effet prébiotique ou d'induire une augmentation significative des bifidobactéries. Cette simulation in vitro a été réalisée par incubation pendant 24 h dans un système de fermentation discontinue avec contrôle du pH et de la température, après inoculation avec des matières fécales provenant de cinq individus sains. L'analyse des polyphénols totaux (principaux antioxydants présents dans le produit testé) présents dans la farine d'olives, dans le mélange de la farine et dans le produit testé a permis de détecter une perte de polyphénols totaux, par suite de cuisson égale à 40%.

Résultats cliniques Les résultats cliniques ont montré que la consommation quotidienne de 100 g de sarrasin sous forme de farine a déterminé l'augmentation du rapport HDL/cholestérol et amélioré la tolérance au glucose et plus récemment, il a été observé que la consommation de biscuits à base de sarrasin a réduit la taux sérique d'un marqueur de l'inflammation, la myéloperoxydase (MPO) en plus d'une réduction du cholestérol total avec une meilleure capacité vitale pulmonaire. Une méta-analyse récente de plusieurs études d'intervention sur l'alimentation humaine avec une supplémentation en légumineuses, dont les pois, a montré leur capacité à diminuer les taux sériques de cholestérol LDL.

Des études d'intervention sur l'alimentation avec des huiles d'olive, des sous-produits de la transformation des olives et des produits à base d'olive ont été menées auprès de volontaires sains et de sujets présentant divers degrés de risque cardiovasculaire. Parmi ces études ont été indiquées les doses quotidiennes de polyphénols totaux introduites (de quelques mg/jour à 30 mg/jour, jusqu'à 100 mg/jour) selon le type d'huile d'olive et également l'enrichissement en extraits. Ces interventions avaient dans de nombreux cas une durée d'environ un mois, et la plupart des études mesuraient les effets des changements antioxydants et anti-inflammatoires dans le système circulatoire, ainsi que les valeurs des lipides plasmatiques et d'autres paramètres liés au stress oxydatif. En particulier dans l'étude "EUROLIVE", sur un large échantillon d'individus sains, il a été observé que les phénols de l'huile d'olive étaient capables de protéger les lipides sanguins de l'oxydation, d'augmenter la concentration de cholestérol HDL et la relation entre glutathion réduit et oxydé, cependant aucun changement dell'F2-isoprostane.

En 2011, l'Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA) a approuvé l'allégation selon laquelle les polyphénols de l'huile d'olive, en particulier l'hydroxytyrosol, protègent les LDL de l'oxydation, à une dose supérieure ou égale à 5 mg/kg/jour. D'autres études ont également montré que les polyphénols d'huile d'olive sont liés à la réduction de la CRP, à la réduction de l'expression des gènes athérogènes dans les cellules sanguines et à la diminution de la pression artérielle. Bien qu'il existe des preuves sur la capacité des polyphénols de l'huile d'olive à réduire le risque de maladies cardiovasculaires, une grande partie des effets possibles des composants de l'olive seuls ou en synergie sont encore inexplorés. De plus, une grande partie des fibres et des polyphénols contenus dans l'olive n'est pas extraite lors du processus d'extraction de l'huile et éliminée comme sous-produit.

Justification de l'étude La farine de sarrasin apporte des fibres et des flavonoïdes, la farine de pois contient des glucides à index glycémique bas, des protéines et est également une source d'antioxydants, la farine de châtaigne apporte des substances prébiotiques et des vitamines. La farine d'olive est le fruit de l'olive est avec ses composants hydrosolubles (par exemple. Fibres et polyphénols) et dans la fraction soluble des acides gras polyinsaturés et monoinsaturés, des tocophérols et des caroténoïdes qui ne passent que partiellement l'olive extra vierge. Ces composants sont conçus principalement comme des composants de l'huile d'olive extra vierge et ont prouvé scientifiquement qu'ils contribuent à l'amélioration du métabolisme des lipides et de la structure des lipides plasmatiques, à la santé cardiaque et à la protection contre le stress oxydatif.

Sur la base des études cliniques et expérimentales disponibles, il a été suggéré que la consommation d'un produit de boulangerie fabriqué à partir d'un mélange de farine de pâte d'olive, de sarrasin, de pois et de châtaigne peut avoir des effets positifs sur les biomarqueurs plasmatiques lipidiques et le microbiote intestinal (par exemple, une augmentation de bifidobactéries) chez les participants adultes avec un taux plasmatique de cholestérol moyen à élevé même s'il n'est pas encore pathologique.

Déclaration de conformité déclaration Cette étude sera réalisée conformément au protocole et conformément aux bonnes pratiques cliniques (GCP), telles que décrites dans ICH GCP pour 1996, le Code of Federal Regulations (CFR) des États-Unis et la Déclaration d'Helsinki. Avec la signature de ce protocole, le chercheur s'engage à se conformer à ces exigences.

Objectifs de l'étude

L'objectif global de l'étude est d'évaluer si l'introduction dans l'alimentation d'un nouveau produit de boulangerie contenant un mélange de farines de pâte d'olive, de sarrasin, de pois, de châtaignes est susceptible de modifier :

Objectifs principaux:

1. Le profil du microbiote fécal ;
2. Taux plasmatiques de cholestérol total, LDL, ratio / LDL total et HDL ;
3. Les taux plasmatiques de triglycérides ;
4. Apolipoprotéine ApoA-I, ApoB et Lp (a).

Objectifs secondaires :

1.Les indices anthropométriques 2 Les métabolites secondaires des polyphénols dans les biofluides humains 3.Les profils des métabolites dans le plasma et l'urine évalués par analyse de spectrométrie de masse (MS) ; 4. Les taux de glycémie et d'insuline à jeun; 5. Protéine C-réactive (PRC); 6. Protéine C-réactive à haute sensibilité (hsPRC); 7. isoprostane F2 urinaire ; 8. LDL oxydé dans le plasma.

Conception expérimentale de la présentation Les participants volontaires seront identifiés et recrutés dans une partie ambulatoire de la Casa di Cura Eremo di Arco (TN). Les participants seront informés des objectifs et des méthodes de l'étude et seront présélectionnés sur la base de critères d'inclusion/exclusion. Le participant signera le consentement éclairé et entrera dans le studio après la visite à T-1, effectuée dans la partie ambulatoire de la Casa di Cura Eremo di Arco (TN) où il sera effectué un état de santé clinique et biochimique. Afin de permettre un bon suivi des habitudes alimentaires, le participant éligible, après la première visite remplira un journal alimentaire.

Si les sujets seront éligibles pour l'étude sur la base de tous les critères d'inclusion et d'exclusion, ils seront randomisés pour recevoir soit un placebo, soit l'intégration active à la visite T0.

L'examen clinique et le prélèvement de sang et d'urine seront effectués après un jeûne d'environ 10 heures au début de la période de démarrage (visite T-1). Des tests cliniques, des prélèvements sanguins, des prélèvements de fèces et d'urine seront effectués lors des visites T0, T1. Un journal alimentaire supplémentaire (4 jours consécutifs) sera rempli lors des visites T0 et avant T1. Les événements indésirables, la prise de médicaments et de suppléments seront consignés par les participants dans un journal spécial.

Les participants inclus dans l'étude seront également invités à remplir une évaluation sensorielle de chaque aliment proposé en aveugle, au premier goût et au bout de 8 semaines de supplémentation pour chaque produit.

Procédure d'étude Recrutement des participants Les participants seront identifiés et recrutés dans une partie ambulatoire de la Casa di cura Eremo di Arco (TN) Les participants seront informés des objectifs et des méthodes de l'étude et seront présélectionnés sur la base de critères d'inclusion/exclusion . S'il est éligible, le participant signera le consentement éclairé et entrera dans le studio avec une visite au T-1, qui sera effectuée lors d'un état de santé clinique et biochimique. Les sujets qui seront éligibles à l'étude sur la base de tous les critères d'inclusion/exclusion, seront inclus dans l'étude et randomisés pour recevoir la première supplémentation alimentaire (test ou contrôle) pour visiter T0 (deux semaines plus tard par le run-in ).

Supplémentation

Une fois l'éligibilité évaluée, les participants seront randomisés pour recevoir l'intégration avec le produit de boulangerie avec le test ou le produit de contrôle :

Les monodoses journalières seront conditionnées en plaquettes codées par un groupement qualifié. La supplémentation durera huit semaines, en double aveugle, en parallèle. avec l'un des deux produits (attribué à la randomisation).

Suivi Le projet consistera en une période de huit semaines de supplémentation, des examens cliniques et le prélèvement de sang et d'urine seront effectués après une nuit à jeun (hors consommation d'eau) d'environ 10 heures pour visiter T-1. Les tests cliniques, les prélèvements sanguins, le prélèvement des selles et les analyses d'urines seront effectués visites à T0, T1 : T0 est le jour de la première intégration, T1 sera huit semaines après le début du traitement. Le journal alimentaire sera compilé pour la visite T-1 et distribué avant les visites T0 et T1 pour les visites de collecte de données T0 et T1.

Évaluation clinique Électrocardiogramme. Un ECG sera réalisé lors du dépistage (T-1). Les tracés ECG seront examinés et interprétés par la partie ambulatoire de la maison de retraite Hermitage d'Arco.

La pression artérielle sera mesurée conformément aux directives pour l'hypertension ISH / WHO 2004 Indices anthropométriques Le poids et la taille seront mesurés sur une échelle standard. Les mesures seront effectuées sur des sujets sans chaussures, manteaux ou vêtements chauds. L'indice de masse corporelle, IMC, est calculé en kg/m2.

Le tour de taille (ombilical) sera mesuré d'une manière déterminée par les National Institutes of Health, National Heart, Lung, and Blood Institute. Le rapport de la circonférence de la taille et du rapport des hanches (WHR) est calculé.

Questionnaires Toutes les informations seront recueillies et enregistrées dans des questionnaires validés, y compris l'identification personnelle, les antécédents médicaux et les informations sur les facteurs de risque de maladies cardiovasculaires, l'utilisation de médicaments, l'activité physique et les habitudes alimentaires. De plus, un journal alimentaire de quatre jours sera rédigé par chaque participant.

Les participants inclus dans l'étude seront également invités à remplir une évaluation sensorielle de chaque aliment proposé lors de la première dégustation à l'aveugle et à la fin des 8 semaines de supplémentation.

Prélèvement de sang et collecte d'urine Le sang (≤ 30 ml) sera prélevé dans une veine périphérique, après 10 heures de jeûne. Les urines de 24h seront collectées, le volume mesuré et l'échantillon sera conservé à -80°C.

Prélèvement d'échantillons fécaux Les échantillons fécaux seront traités dans les 12 heures suivant le prélèvement des échantillons. Des aliquotes de chaque échantillon fécal seront congelées directement à -80°C pour analyse du profil métabolomique.

Tests de laboratoire par l'analyse en laboratoire de la Casa di Cura Eremo di Arco Les échantillons de sang seront centrifugés selon les exigences des tests à effectuer immédiatement après le prélèvement sanguin. Le plasma ou le sérum sera séparé, en partie immédiatement testé et la fraction restante conservée à -80°C.

Le cholestérol total, le cholestérol HDL, les triglycérides et le glucose seront évalués par méthode enzymatique. Le cholestérol LDL sera mesuré analytiquement avec une méthode enzymatique.

Les niveaux d'insuline seront évalués par elettrochemioluminescenza. La formule sanguine et la numération plaquettaire seront évaluées par méthode impédentiométrique. La protéine C-réactive (CRP) sera mesurée par dosage turbidimétrique. La protéine C-réactive à haute sensibilité (hsPCR) sera mesurée par dosage turbidimétrique.

L'apolipoprotéine AI (ApoA-I), l'ApoB et la Lp (a) ont été déterminées par immunoturbidimétrie.

Le test de vérification de l'absence de glycosurie sera réalisé en mesurant la concentration de glucose dans les urines.

Tests de laboratoire par la Fondazione Edmund Mach [EMF] Profil métabolomique urinaire et plasmatique. Les F2-isoprostanes seront dosés dans les urines comme mesure du stress oxydatif, au moyen d'un kit EIA spécifique, après purification par chromatographie en phase solide (colonnes SepPack).

L'analyse des LDL oxydées dans le plasma sera réalisée à l'aide du kit ELISA.

Les échantillons d'urine et de sang (plasma et sérum) seront soumis aussi bien à des analyses de métabolomique ciblées (UPLC-MS/MS pour les composés non volatils et GC-MS/MS pour les composés volatils) qu'à des analyses de métabolomique non ciblées (ULPC -Q -TOF-MS et Nano -FTMS-Q-TOF non volatils et GC-TOF pour les composés volatils). Pour les profils de métabolites plasmatiques ciblés, il sera utilisé le kit P180 Biocrates AbsoluteIDQ ® basé sur MS, générant des données quantitatives précises sur 180 métabolites humains liés au risque de diabète. De plus, une analyse ciblée spécifique sera appliquée au profil lipidique des acides biliaires sériques, des acides gras à chaîne courte (acides gras à chaîne courte, AGCC) et à la quantification des métabolites des polyphénols d'origine microbienne dans les biofluides (dont les matières fécales) avec UPLC/ QQQ-MS / MS.

Analyse du microbiote fécal. L'évolution du microbiote fécal de populations bactériennes spécifiques sera évaluée par la méthode d'hybridation in situ avec des sondes fluorescentes (FISH).

Les modifications du microbiote fécal seront également évaluées à l'aide d'une approche métagénomique utilisant le pyroséquençage 454. En résumé, après le prélèvement des échantillons de selles (n = 128, 2 échantillons de selles à des temps différents T0, T1 de 64 sujets avant et après consommation de chaque test alimentaire et placebo) vont extraire l'ADN génomique bactérien à l'aide du kit SPIN FastDNA (MPbio ) spécifique aux matières fécales. En utilisant des amorces spécifiques du gène bactérien ARNr 16S (région hypervariable V1-V3) il sera réalisé par amplification PCR puis en soumettant les V1-V3 amplifiés à 454 pyroséquençage.

Utilisera le GS FLX Titanium Chemistry avec des adaptateurs Multiplex Identifier (MID) pour obtenir des séquences de longueur 600 bp qui seront analysées en comparant la base de données d'ARNr 16S phylogénétique, accessible au public, via le pipeline QIIME qui permet l'attribution au niveau du genre de l'homme microbiote intestinal. Il sera produit un total d'environ 20 000 séquences pour chaque échantillon fécal. A titre de contrôle qualité et d'analyse de l'écologie microbienne, il sera utilisé une statistique multivariée afin de corréler les modifications de la composition du microbiote fécal suite à la consommation d'aliments test ou de placebo.

Randomisation en aveugle Les participants seront assignés au hasard mais également répartis selon le sexe et l'âge à l'un des deux traitements : test de produit de boulangerie ou produit de contrôle, même à l'aide d'un logiciel spécifique. Les chercheurs cliniques, les investigateurs et le personnel de laboratoire ne seront pas informés de la randomisation.

Traitement La supplémentation sera introduite dans l'alimentation quotidienne par la consommation d'un produit de boulangerie (test) pour une consommation journalière de 90 grammes de produit à base de farine d'olives, de sarrasin, de pois, de châtaignes. La nourriture fournira un apport calorique de contrôle analogique. Les produits à l'étude (test ou contrôle) seront fournis dans des packs qui seront étiquetés dans la langue locale avec le numéro de code de l'étude. le nom du fabricant, le nombre de patients, le nombre de visites d'étude. Les produits seront distribués aux participants dès la visite T0.

Durée de l'étude et planification Une fois l'éligibilité évaluée, les participants seront randomisés en deux groupes (test de produit ou contrôle) qui suivront 8 semaines de supplémentation alimentaire.

La durée globale de l'étude, y compris la période de démarrage (run-in) et le traitement sera de 10 semaines.

Le recrutement commencera plus tard et dans les trois mois suivant l'approbation par le comité d'éthique.

Le rodage commencera dans les deux semaines suivant la première visite (T-1). Les sujets seront recrutés sur une période de 10 mois et l'étude sera achevée dans les 12 mois suivant le premier recrutement.

Critères d'arrêt de l'étude Conformément à la Déclaration d'Helsinki, aux normes de bonne pratique clinique de l'ICH et aux « réglementations de la Food and Drug Administration (FDA) » des États-Unis, une personne a le droit de se retirer de l'étude à tout moment et pour quelque raison que ce soit, sans préjudice des soins médicaux futurs du médecin ou de l'établissement. Les investigateurs ont également le droit de retirer les sujets de l'étude (voir ci-dessous). Dans l'hypothèse où une personne (ou une personne légalement mandatée) déciderait de se retirer, tous les efforts seront faits pour compléter et rapporter au mieux les observations. Une évaluation complète finale doit être faite au moment du retrait du sujet où la raison du retrait doit être enregistrée et dans tous les cas, une tentative doit être faite pour effectuer une évaluation de suivi.

Les sujets peuvent être retirés de l'étude pour les raisons suivantes :

Violation du protocole de la part de l'expérimentateur Absence d'observance significative par le sujet Refus du sujet de poursuivre le traitement ou commentaires Toxicité inacceptable Décision du chercheur que la fermeture est dans le meilleur intérêt médical du sujet Événement peu clair de maladie ou de complications Utilisation de médicaments concomitants incompatibles avec l'étude. Grossesse Abus d'alcool ou de drogues Les personnes qui interrompent ou sont retirées de l'étude ne seront pas remplacées.

Procédure de résiliation

Si un individu s'arrête avant la fin de l'étude, la raison et la date limite seront enregistrées. La date de la dernière dose de nourriture dans l'étude doit être enregistrée. En cas de résiliation anticipée, les démarches suivantes doivent être effectuées :

Tests cliniques (systolique et diastolique, fréquence cardiaque, poids et taille pour calculer l'IMC et le tour de taille et de hanche).

Prise de sang et de matières fécales et collecte d'urine. Un questionnaire de fréquence alimentaire (hebdomadaire). Dans le cas où la personne ne peut pas revenir pour une visite de suivi, les enquêteurs auront tenté de contacter la personne par téléphone pour suivre tout événement indésirable.

Si une personne retire son consentement à recevoir de la nourriture dans le studio, vous serez encouragé à rester dans l'étude sans recevoir de traitement pour la collecte de données de sécurité.

Les procédures de fiabilité du produit à l'étude Les produits (test ou contrôle) seront fournis dans des emballages étiquetés dans la langue locale avec le numéro de code de l'étude, le numéro de code site, le nom du fabricant, le nombre de participants, le nombre de visites de l'étude, le nombre de lot, les instructions de stockage et les dates de péremption. Les produits seront distribués aux participants dès la visite T0.

Codes de randomisation Les codes de randomisation par sexe et âge, pour chaque participant seront conservés dans une enveloppe scellée par groupe qualifié de Qualité Sensorielle (QS du Département de Nutrition et Qualité Alimentaire du Centre de Recherche et d'Innovation de la Fondation Edmund Mach).

Contrôle des sources de données Toutes les données recueillies au cours de l'étude seront obtenues à partir de sources primaires et seront enregistrées dans des documents écrits et des dossiers médicaux électroniques en tant que sujet. Les résultats des résultats cliniques, de laboratoire et ECG seront enregistrés dans le dossier médical électronique du sujet. Aucune donnée ne sera insérée directement dans le « formulaire de rapport de cas » (CRF), sans être transférée de la source primaire, telle que les dossiers papier ou électroniques.

Thérapie médicamenteuse concomitante Tout médicament pris par le sujet dans le mois précédant le début de l'étude et/ou administré pendant l'étude sera considéré comme une thérapie concomitante. Un tel traitement doit être documenté sur la page appropriée du CRF et dans les dossiers médicaux des sujets. Tout changement apporté au traitement concomitant pendant l'étude doit être clairement enregistré et la raison du changement doit être documentée.

Un courrier sera envoyé au médecin de chaque participant, précisant quels sont les traitements concomitants incompatibles avec l'étude. L'utilisation des médicaments suivants ne sera pas autorisée pendant l'étude : anticoagulants, antihypertenseurs, hypolipémiants, bêta-bloquants, corticostéroïdes systémiques, neuroleptiques, antibiotiques, laxatifs, suppléments vitaminiques, antioxydants et minéraux, fibres alimentaires, prébiotiques (par exemple inuline, oligofructose) et probiotiques. Par conséquent, si le sujet nécessite des thérapies médicamenteuses incompatibles avec l'étude, le sujet est averti par le médecin traitant de mettre fin à l'étude et d'en informer le responsable de l'étude et de suivre les procédures d'arrêt anticipé.

Note d'observance Pour évaluer l'observance à la supplémentation, il sera mesuré les phénols urinaires chez les sujets qui seront supplémentés par des tests alimentaires à T0, T1. De plus, tous les emballages non utilisés ou vides à la fin de chaque semaine seront restitués aux expérimentateurs.

Méthodes Sécurité Il n'y a pas eu de problèmes de sécurité lors des études précédentes liées à la consommation de produits à base d'olives, de sarrasin, de farine de pois, de farine de châtaigne.

L'étude sera suivie par le personnel médical et paramédical de la Casa di Cura Eremo d'Arco. Les événements indésirables seront toujours enregistrés tout au long de l'étude. Les valeurs de laboratoire anormales qui induisent des signes ou des symptômes cliniques ou nécessitent une intervention thérapeutique seront rapidement notifiées au sujet, si le sujet a explicitement exprimé le souhait de recevoir une telle communication sous la forme d'un consentement éclairé. Le sujet sera libre de se retirer de l'étude à l'avance si le besoin d'une intervention thérapeutique n'est pas compatible avec l'étude, ou si vous rencontrez des événements indésirables qui entraînent une modification des critères d'inclusion de ce sujet dans l'étude. Le sujet sera toujours libre de se retirer de l'étude à tout moment, au cas où l'étude serait due à une gêne suite à la procédure d'arrêt anticipé.

Analyse statistique Les caractéristiques de base sont répertoriées par type de supplémentation : les variables continues sont exprimées en moyenne +/- écart-type ou médiane avec des écarts interquartiles et en pourcentage pour les variables catégorielles. Les données avec une distribution asymétrique suivront un traitement logarithmique avant l'analyse. Les différences entre les deux suppléments seront évaluées avec des méthodes statistiques univariées et multivariées. Le milieu avant et après l'intervention sera comparé au Modèle Linéaire Général (ANOVA) pour des mesures répétées ou pour des données appariées. Vous effectuerez des régressions linéaires simples et multiples pour déterminer les relations entre les variables indépendantes ; nous effectuerons également le test pour évaluer les différences de conformité détectées dans les types de supplémentation. Les résultats sont exprimés en moyenne +/- SEM et les différences seront considérées comme significatives lorsque P <0,05. Les données avec une distribution asymétrique suivront un traitement logarithmique avant l'analyse.

L'analyse principale sera basée sur une comparaison des différences de teneurs moyennes après consommation du produit à tester et après consommation du témoin. Les écarts entre les valeurs moyennes à la fin de chaque supplémentation (T1) par rapport à la valeur moyenne relative de base (T0) seront également mesurés.

Les différences de temps entre les bras de traitement seront évaluées par analyse de variance pour des mesures répétées. Le niveau de signification sera considéré <0,05 en deux queues.

La taille de l'échantillon pour chaque supplémentation a été déterminée à 32 pour détecter une diminution du cholestérol LDL dans le plasma égale à environ 15,44 mg/dl avec un écart type de 14,28 mg/dl en utilisant l'équation de Snedecor et Cochran avec α égal à 0,05 et 1 -β égal à 0,9 (Dell et al., 2002). Selon cette formule, le nombre minimum de sujets à inscrire est égal à 28. En tenant compte des abandons éventuels, 32 personnes pour la supplémentation avec le produit testé et 32 ​​personnes pour la supplémentation avec le produit témoin pour un total de 64 sujets volontaires dans cette étude.

L'évaluation est faite sur la base de l'abondance de la diminution du cholestérol LDL dans le plasma, sur la base des mesures (moyenne et écart type) du cholestérol LDL rapportées dans une étude parallèle publiée dans le European Journal of Nutrition. Le paramètre cholestérol LDL, en plus d'être un effet reconnu sur la santé humaine, est plus contraignant et nécessite des temps d'observation plus longs que l'ampleur de la modification de la microflore intestinale.

Accès direct aux données/documents sources Les autorités réglementaires peuvent souhaiter effectuer des contrôles sur la recherche clinique pour évaluer la conformité avec les principes des BPC. Les autorités réglementaires peuvent également souhaiter effectuer une inspection (pendant l'essai ou après son achèvement). Si une inspection est requise par une autorité réglementaire et/ou le comité d'éthique des essais cliniques c/o APSS Trento, le chercheur doit accepter de fournir l'accès, aux autorités réglementaires, à la documentation relative à l'étude.

Gestion des données et enregistrements La source des données et de la documentation est définie comme le premier endroit où les données sont enregistrées. Tous les documents originaux et ne doivent pas être conservés et mis à disposition au même endroit. Le chercheur doit conserver les documents originaux de chaque personne participant à l'étude.

Les données recueillies sur le CRF lors de l'essai seront documentées de manière anonyme, et celles-ci seront identifiées par des chiffres ou des symboles. Si dans des circonstances exceptionnelles il est nécessaire, pour des raisons de sécurité ou de réglementation, d'identifier la personne, OlioCRU Ltd et le chercheur sont tenus de garder ces informations confidentielles.

Toutes les données saisies dans le CRF doivent être lisibles et enregistrées à l'encre noire. Si vous avez besoin d'une correction, celle-ci doit être effectuée en supprimant l'entrée d'une seule ligne et en saisissant les informations correctes à côté de l'élément lui-même. La correction doit être paraphée et datée par l'enquêteur ou une personne qualifiée désignée.