Új sütőtermékkel történő étrend-kiegészítés hatásának mérése a bél mikrobiotára és a koleszterin anyagcserére

A PreBIOil projekt in vitro tesztelésének első eredményei felvázolták egy olajbogyó liszt azon képességét, hogy az emberi bél mikrobapopulációját a prebiotikum kapacitású poliszacharidként felismert inulinhoz hasonló módon modulálja. Ezen eredmények és a szakirodalomban szereplők alapján került kialakításra a PreBIOil pékáru. A termék olíva-, hajdina-, borsó- és gesztenyelisztet tartalmaz.

A vizsgálat átfogó célja annak felmérése, hogy az olívaliszttel készült, hajdina-, borsó- és gesztenyeliszttel kevert pékáru étrendbe való bevezetése megváltoztathatja-e a bélmikrobióta profilját és a plazma koleszterinszintjét, különös tekintettel az LDL-re. A vizsgálat étrend-kiegészítőként, kettős vak, randomizált, a kontrollcsoporttal párhuzamosan készül, amelyben a következő terméket hasonlítjuk össze:

i) egy új sütőipari termék tervezett PreBIOil tanulmány (teszt); ii) pékáru-ellenőrző izoenergetikai (kontroll).

A kísérletben kiegészített élelmiszerek leírása A teszttermék egy új, olíva-, hajdina-, borsó- és gesztenyeliszt keverékéből készült, sós keksz megjelenésű pékáru.

A résztvevőknek naponta körülbelül 90 gramm teszt- vagy kontrollterméket kell elfogyasztaniuk. Az egyes terméktételek pontos mennyiségét a késztermék táplálkozási jellemzőinek felmérése után határozzuk meg annak érdekében, hogy a két termék azonos kalóriabevitelt biztosítson.

Emészthetőség, fermentálhatóság és a mikrobióta modulálhatósága A hajdina nem gabonaféléknek számít, amely amellett, hogy tartalmaz rostokat, ásványi anyagokat és vitaminokat, mint például a B2 és B6, flavonoid tartalmának köszönhetően antioxidáns vegyületek forrása is.

A borsóliszt az emberi táplálkozás számára fontos összetevőket tartalmaz (keményítő, fehérje és egyéb tápanyagok). A borsó fogyasztásával kapcsolatos egészségügyi előnyök elsősorban a keményítő, fehérje, rost, vitaminok, ásványi anyagok és fitokemikáliák koncentrációjából és tulajdonságaiból fakadnak. A sziklevél integumentumában és sejtfalában található rostok hozzájárulnak a gyomor-bélrendszer működéséhez. A borsóliszt keményítőtartalmát alacsonyabb glikémiás index jellemzi. A borsó fehérjéi antioxidáns hatású peptideket termelhetnek. A borsó vitamin- és ásványianyag-tartalma fontos szerepet játszhat a hiánybetegségek megelőzésében, különös tekintettel a szelén- és foláthiányra. A borsó különféle fitokemikáliákat tartalmaz. Ide tartoznak a polifenolok, amelyek antioxidáns és rákellenes hatásúak lehetnek, a szaponinok, amelyek hipokoleszterinémiás és rákellenes hatással rendelkeznek, valamint a galaktóz oligoszacharidjai, amelyek prebiotikus hatást fejtenek ki a vastagbélben.

A gesztenyeliszt tápanyag-összetevői szénhidrátokból, fehérjékből és zsírokból állnak, így körülbelül 350-400 kcal/100 g energiaértéket biztosítanak. A gesztenye pozitív hatást gyakorol a bélbaktériumok anyagcseréjére, és hosszú szénláncú C18:1 és C18:2 zsírsavak, valamint vitaminok (E-vitamin) forrása. A polifenolok lehetséges jelenléte a külső héjra korlátozódik, amelyet általában a liszt előállítása során választanak el a gyümölcstől. Az olívapasztából származó lisztet nem írják le a tudományos irodalomban az emberi táplálkozás speciális táplálkozási tulajdonságaira vonatkozóan. Az olajbogyó azonban szerves részét képezi a mediterrán étrendnek, amelyben étkezési olajbogyóként és olívaolajként fogyasztják. Az olíva gyümölcs 50% vizet, 22% zsírt, körülbelül 19% szénhidrátot és körülbelül 2% fehérjét tartalmaz; a polifenoltartalom 1-3% tartományban változik. Az olajbogyót olívaolajként vagy étkezési olajbogyóként fogyasztják. Az olajbogyókat erős keserűség jellemzi, amelyet főleg dall'oleeuropein okoz. Az oleuropein elérheti a 140 mg/g száraz tömeget az éretlen olajbogyókban, és csökken, és ahogy a gyümölcs érik Az étkezési olajbogyót a keserű íz enyhítése érdekében kezelik olyan eljárásokkal, mint a macerációs szóda és a sós lében történő erjesztés. Az édesítés során azonban a keserűség elveszett néhány fontos, az olajbogyóban jelen lévő vegyületről, például polifenolokról és rostokról. Nincs bizonyíték arra, hogy az extra szűz olívaolaj polifenoljai csökkentik a szív- és érrendszeri betegségek kockázatát, de az olívabogyó összetevőinek lehetséges hatásainak nagy része önmagában vagy a polifenolokkal szinergiában még feltáratlan. Ezenkívül az olajbogyó vízben oldódó frakciójának nagy része, amely között a rostok és a polifenolok, amelyek bizonyítottan jótékony hatással vannak az emberi egészségre, nem távoznak el az olajtermelés során. Bizonyíték van arra, hogy egyes fenolfrakciók, mint secoiridoidok, rosszul szívódnak fel a bélnyálkahártyában, és ezután elérhetők a vastagbél mikroflórája számára. Lényegében az olajnak a maga teljességében lenne a legnagyobb potenciálja, mivel élelmiszer képes jótékonyan módosítani a szimbiotikus emberi bélben élő mikroorganizmusok összetételét és aktivitását, amint azt más típusú gyümölcsöknél kísérletileg megfigyelték.

A vastagbélfermentáció in vitro szimulációjával megfigyelték, hogy az olívapaszta 180°C-on 30 percig sütés után is képes prebiotikus hatással módosítani a humán bélmikrobiótát, vagy jelentős bifidobaktériumot indukálni. Az ilyen in vitro szimulációt 24 órás inkubálással hajtották végre egy szakaszos fermentációs rendszerben, a pH és a hőmérséklet szabályozásával, öt egészséges egyén ürülékével történő beoltást követően. Az olajbogyólisztben, a lisztkeverékben és a vizsgált termékben jelenlévő összes polifenol (a vizsgált termékben jelenlévő fő antioxidánsok) elemzése 40%-os sütés következtében az összes polifenol veszteséget mutatta ki.

Klinikai eredmények A klinikai eredmények azt mutatják, hogy napi 100 g hajdina liszt formájú fogyasztása meghatározta a HDL/koleszterin arány növekedését és a glükóz tolerancia javulását, és újabban megfigyelték, hogy a hajdinából készült kekszek fogyasztása csökkentette a a gyulladás markere, a mieloperoxidáz (MPO) szérumszintje, valamint a teljes koleszterinszint csökkenése, jobb pulmonális vitális kapacitással. A hüvelyesek, köztük a borsó kiegészítésével végzett humán étrendre vonatkozó számos intervenciós tanulmány nemrégiben végzett metaanalízise kimutatta, hogy képesek csökkenteni az LDL-koleszterin szérumszintjét.

Az olívaolajjal, az olajbogyó feldolgozásának melléktermékeivel és az olíva alapú termékekkel kapcsolatos étrendre vonatkozó intervenciós tanulmányokat végeztek egészséges önkéntesekkel és különböző fokú kardiovaszkuláris kockázattal rendelkező alanyokkal. Ezekből a vizsgálatokból az olívaolaj típusától függően az összes polifenol napi adagját (néhány mg/naptól 30 mg/napig, legfeljebb 100 mg/nap) jelölték meg, valamint a kivonatokkal való dúsítást. Ezek a beavatkozások sok esetben körülbelül egy hónapos időtartamúak voltak, és a legtöbb tanulmány a keringési rendszer antioxidáns és gyulladáscsökkentő változásainak hatását, valamint a plazma lipidek értékét és az oxidatív stresszel kapcsolatos egyéb paramétereket mérték. Különösen az "EUROLIVE" tanulmányban, egészséges egyének nagy mintáján azt figyelték meg, hogy az olívaolaj fenoljai képesek voltak megvédeni a vérzsírokat az oxidációtól, növelni a HDL-koleszterin koncentrációját és a redukált és oxidált glutation közötti kapcsolatot, azonban nem változik a dell'F2-izoprosztán.

2011-ben az Európai Élelmiszerbiztonsági Hatóság (EFSA) jóváhagyta azt az állítást, amely szerint az olívaolaj-polifenolok, különösen a hidroxi-tirozol 5 mg/kg/nap vagy azzal egyenlő dózisban védik az LDL-t az oxidációtól. Más tanulmányok azt is kimutatták, hogy az olívaolaj polifenoljai összefüggésben állnak a CRP csökkenésével, az aterogén génexpresszió csökkenésével a vérsejtekben és a vérnyomás csökkenésével. Bár vannak bizonyítékok arra vonatkozóan, hogy az olívaolaj polifenoljai képesek csökkenteni a szív- és érrendszeri betegségek kockázatát, az olajbogyó összetevőinek önmagában vagy szinergiában kifejtett lehetséges hatásainak nagy része még feltáratlan. Ezenkívül az olajbogyóban található rostok és polifenolok nagy része nem nyerhető ki az olajkivonás során, és melléktermékként eliminálódik.

A vizsgálat indoklása A hajdinaliszt rostokat és flavonoidokat ad, a borsóliszt alacsony glikémiás indexű szénhidrátokat, fehérjét és antioxidáns forrás is, a gesztenyeliszt prebiotikus anyagokat és vitaminokat tartalmaz. A lisztes olajbogyó az olajbogyó gyümölcse, vízben oldódó összetevőivel (pl. Rostok és polifenolok) és a többszörösen telítetlen és egyszeresen telítetlen zsírsavak, tokoferolok és karotinoidok oldható frakciójában, amelyek csak részben jutnak át az extra szűz olívabogyón. Ezeket a komponenseket leginkább az extra szűz olívaolaj összetevőinek tervezték, és tudományosan bizonyították, hogy hozzájárulnak a lipid-anyagcsere és a plazma lipidrendszerének javításához, a szív egészségéhez és az oxidatív stressz elleni védelemhez.

A rendelkezésre álló klinikai és kísérleti vizsgálatok alapján azt feltételezték, hogy az olívapasztából, hajdinából, borsóból és gesztenyéből készült liszt keverékéből készült pékáru fogyasztása pozitív hatással lehet a lipidplazma biomarkereire és a bél mikrobiotára (pl. bifidobaktériumok) olyan felnőtt résztvevőkben, akiknél a plazma koleszterintartalma közepes vagy magas, még ha nem is patológiás.

Megfelelőségi nyilatkozat Ezt a vizsgálatot a Protokollnak és a Helyes Klinikai Gyakorlatnak (GCP) megfelelően, az 1996. évi ICH GCP-ben, az Egyesült Államok Szövetségi Szabályozási Kódexében (CFR) és a Helsinki Nyilatkozatban leírtak szerint végezzük. Jelen jegyzőkönyv aláírásával a kutató vállalja, hogy eleget tesz ezeknek a követelményeknek.

A vizsgálat céljai

A tanulmány átfogó célja annak felmérése, hogy az olívapasztából, hajdinából, borsóból, gesztenyéből lisztkeveréket tartalmazó új pékáru étrendbe történő bevezetése képes-e megváltoztatni:

Elsődleges célok:

1. A széklet mikrobiota profilja;
2. Az összkoleszterin, LDL plazmaszintje, aránya/teljes LDL és HDL;
3. A trigliceridek plazmaszintje;
4. Apolipoprotein ApoA-I, ApoB és Lp (a).

Másodlagos célok:

1. Az antropometriai indexek 2. A polifenolok másodlagos metabolitjai humán biofluidokban 3. A metabolitok profilja a plazmában és a vizeletben tömegspektrometriás (MS) elemzéssel értékelve; 4. A vércukorszint és az éhomi inzulinszint; 5. C-reaktív fehérje (PRC); 6. Nagy érzékenységű C-reaktív fehérje (hsPRC); 7. vizelet izoprosztán F2; 8. oxidált LDL a plazmában.

Bemutató kísérleti tervezés A résztvevők önkénteseit a Casa di Cura Eremo di Arco (TN) ambuláns részében azonosítják és toborozzák. A résztvevők tájékoztatást kapnak a vizsgálat céljairól és módszereiről, és a felvételi/kizárási kritériumok alapján előzetesen kiválasztásra kerülnek. A résztvevő aláírja a tájékozott beleegyező nyilatkozatát, és a T-1 látogatása után belép a stúdióba, amelyet a Casa di Cura Eremo di Arco (TN) ambuláns részében végeznek, ahol klinikai és biokémiai egészségi állapotot vizsgálnak. Az étkezési szokások megfelelő nyomon követése érdekében a jogosult résztvevő az első látogatás után étkezési naplót tölt.

Ha a vizsgálati alanyok a felvételi és kizárási kritériumok alapján alkalmasak lesznek a vizsgálatra, a T0 vizit alkalmával randomizálják, hogy placebót vagy aktív integrációt kapjanak.

A klinikai vizsgálatot, valamint a vér- és vizeletvételt körülbelül 10 órás koplalás után kell elvégezni, az indulási időszak elején (T-1 látogatás). A T0, T1 vizitek során klinikai vizsgálatokat, vérmintákat, széklet- és vizeletgyűjtést végeznek. További étkezési napló (4 egymást követő napon) a T0 látogatáskor és a T1 előtt kerül kitöltésre. A nemkívánatos eseményeket, a gyógyszerek és táplálékkiegészítők szedését a résztvevők külön naplóba rögzítik.

A vizsgálatba bevont résztvevőket arra is felkérik, hogy töltsenek ki érzékszervi értékelést minden egyes termékre vakon, első ízben és a 8 hetes kiegészítés végén kínált élelmiszerekről.

A vizsgálat menete A résztvevők toborzása A résztvevőket a Casa di cura Eremo di Arco (TN) ambuláns részlegében azonosítják és toborozzák. A résztvevőket tájékoztatják a vizsgálat céljairól és módszereiről, és előzetesen kiválasztják őket a felvételi/kizárási kritériumok alapján. . Ha jogosult, a résztvevő aláírja a tájékozott beleegyező nyilatkozatot, és a stúdióba a T-1 látogatásával lép be, amelyet klinikai és biokémiai egészségi állapota során hajtanak végre. Azokat az alanyokat, akik a felvételi/kizárási kritériumok alapján alkalmasak lesznek a vizsgálatra, bevonják a vizsgálatba, és randomizálják, hogy megkapják az első táplálékkiegészítést (teszt vagy kontroll) a T0 látogatásra (két héttel később, a bejáratásig). ).

Kiegészítés

A jogosultság értékelése után a résztvevőket véletlenszerűen kiválasztják, hogy megkapják a pékáru integrációját a teszt- vagy kontrolltermékkel:

Az egyszeri napi adagokat egy minősített csoport által kódolt csomagokba csomagolják. A kiegészítés nyolc hétig tart, kettős vak, párhuzamos. a két termék egyikével (a véletlenszerűsítésnek tulajdonítható).

Nyomon követés A projekt egy nyolchetes kiegészítésből, klinikai vizsgálatokból, valamint vér- és vizeletvételből áll majd, körülbelül 10 órás éjszakai koplalás (vízfogyasztás nélkül) után a T-1 látogatáshoz. Klinikai vizsgálatok, vérvétel, ürülék gyűjtése és vizeletvizsgálatok elvégzése a T0, T1 látogatások során: T0 az első integráció napja, T1 a kezelés megkezdése után nyolc héttel. Az étkezési naplót összeállítják a T-1 látogatáshoz, és a T0 és T1 látogatások előtt kiosztják a T0 és T1 adatgyűjtési látogatásokhoz.

Klinikai értékelés Elektrokardiogram. A szűréskor (T-1) EKG-t készítenek. Az EKG-lenyomatokat az Arco Hermitage idősek otthonának ambuláns része vizsgálja és értelmezi.

A vérnyomás mérése az ISH / WHO 2004. évi magas vérnyomásra vonatkozó irányelveinek megfelelően történik. Az intézkedéseket cipő, kabát vagy meleg ruha nélküli alanyokon hajtják végre. A testtömegindexet, a BMI-t kg/m2-ben számítják ki.

A derékbőséget (köldök) a National Institutes of Health, National Heart, Lung and Blood Institute által meghatározott módon mérik. A derék- és csípőkör kerületének arányát (WHR) számítják ki.

Kérdőívek Minden információt összegyűjtünk és hitelesített kérdőívekben rögzítünk, beleértve a személyazonosító adatokat, a kórelőzményt és a szív- és érrendszeri betegségek kockázati tényezőire vonatkozó információkat, a gyógyszerhasználatot, a fizikai aktivitást és az étkezési szokásokat. Négy napos étkezési naplót is ír minden résztvevő.

A vizsgálatba bevont résztvevőket arra is felkérik, hogy az első vakkóstoláskor és a 8 hetes kiegészítés végén minden egyes felkínált élelmiszer érzékszervi értékelését töltsék ki.

Vér- és vizeletmintavétel A vért (≤ 30 ml) egy perifériás vénából veszik 10 órás éhezés után. 24 órás vizeletet gyűjtenek, a mért térfogatot és a mintát -80 °C-on tárolják.

Székletminták gyűjtése A székletmintákat a mintavételtől számított 12 órán belül feldolgozzák. Minden székletminta alikvot részeit közvetlenül -80 °C-on lefagyasztják a metabolomikus profil elemzéséhez.

A Casa di Cura Eremo di Arco laboratóriumi elemzésével végzett laboratóriumi vizsgálatok A vérmintákat a vérvétel után azonnal elvégzendő vizsgálatok követelményeinek megfelelően centrifugálják. A plazmát vagy szérumot elválasztják, részben azonnal megvizsgálják, és a maradék frakciót -80 °C-on tárolják.

Az összkoleszterin, a HDL koleszterin, a trigliceridek és a glükóz enzimatikus módszerrel kerül kiértékelésre. Az LDL koleszterint analitikusan, enzimes módszerrel mérjük.

Az inzulinszintet az eletrochemioluminescenza fogja értékelni. A vérképet és a vérlemezkeszámot impedentiometriás módszerrel értékelik. A C-reaktív fehérjét (CRP) turbidimetriás vizsgálattal mérjük. A nagy érzékenységű C-reaktív fehérjét (hsPCR) turbidimetriás vizsgálattal mérjük.

Az apolipoprotein AI-t (ApoA-I), az ApoB-t és az Lp-t (a) immunturbidimetriával határoztuk meg.

A glükózuria hiányának igazolására szolgáló tesztet a vizelet glükózkoncentrációjának mérésével kell elvégezni.

Laboratóriumi vizsgálatok a Fondazione Edmund Mach [EMF] által Vizelet- és plazma metabolomikus profil. Az F2-izoprosztánokat a vizeletben mérik az oxidatív stressz mértékeként, specifikus EIA kit segítségével, szilárd fázisú kromatográfiás tisztítás után (SepPack oszlopok).

A plazmában oxidált LDL analízise ELISA kit segítségével történik.

A vizelet- és vérmintákat (plazma és szérum) a célzott metabolomika elemzésének (UPLC-MS / MS a nem illékony vegyületekhez és GC-MS / MS az illékony vegyületekhez), valamint a nem célzott metabolomikát (ULPC) vizsgálják. -Q -TOF-MS és Nano -FTMS-Q-TOF nem illékony és GC-TOF az illékony vegyületekhez). A megcélzott plazma-metabolitok profiljához az MS-alapú Biocrates AbsoluteIDQ® Kit P180-at fogják használni, amely 180, a cukorbetegség kockázatával összefüggésbe hozható emberi metabolitról készít pontos mennyiségi adatokat. Ezenkívül speciális célzott elemzést alkalmaznak a szérum epesavak, rövid szénláncú zsírsavak (rövid szénláncú zsírsavak, SCFA-k) lipidprofiljára, valamint a mikrobiális eredetű polifenolok metabolitjainak mennyiségi meghatározására biofluidokban (beleértve a székletet is) UPLC-vel / QQQ-MS/MS.

A széklet mikrobiota elemzése. Az egyes baktériumpopulációk széklet mikrobiotájában bekövetkezett változásokat a fluoreszcens próbákkal (FISH) végzett in situ hibridizáció módszerével értékelik.

A széklet mikrobiótájában bekövetkezett változásokat is értékelni fogják metagenomikai megközelítéssel, a 454 piroszekvencia segítségével. Röviden, a székletminták gyűjtése után (n = 128, 2 székletminta különböző időpontokban T0, T1 64 alanytól minden egyes élelmiszer-teszt és placebo elfogyasztása előtt és után) a SPIN FastDNA (MPbio) készlet segítségével kivonja a bakteriális genomiális DNS-t. ) kifejezetten a székletre. A bakteriális 16S rRNS génre (hipervariábilis régió V1-V3) specifikus primerek felhasználásával PCR-amplifikációval, majd az amplifikált V1-V3 454-es piroszekvenálásával hajtják végre.

A GS FLX Titanium Chemistry with adapters Multiplex Identifier (MID) segítségével 600 bp hosszúságú szekvenciákat kap, amelyeket a 16S rRNS filogenetikai adatbázisának összehasonlításával elemeznek, amely nyilvánosan elérhető a QIIME csővezetéken keresztül, amely lehetővé teszi az emberi nemzetség szintjéhez való hozzárendelést. bél mikrobióta. Összesen körülbelül 20 000 szekvenciát állítanak elő minden székletmintához. Minőségellenőrzésként és a mikrobiális ökológia elemzéseként többváltozós statisztikát alkalmaznak a széklet mikrobióta összetételében bekövetkezett változások korrelálására az élelmiszer-teszt vagy placebo fogyasztását követően.

Randomizációs vak A résztvevőket véletlenszerűen, de nem és életkor szerint egyenlően elosztva két kezelés egyikére osztják be: sütőipari termék teszt vagy kontroll termék, akár speciális szoftver használatával is. A klinikai kutatók, a vizsgálók és a laboratóriumi személyzet vakok lesznek a randomizációval szemben.

Kezelés A kiegészítés bekerül a napi étrendbe egy pékáru (teszt) fogyasztásával napi 90 gramm olajbogyó lisztet tartalmazó termék fogyasztása hajdinából, borsóból, gesztenyéből. Az étel analóg kalóriabevitelt biztosít. A vizsgált (vizsgálati vagy kontroll) termékeket a vizsgálat kódszámával a helyi nyelven felcímkézett csomagokban szállítják. a gyártó neve, a betegek száma, a tanulmányi látogatások száma. A termékeket a T0 látogatásból osztják ki a résztvevőknek.

A tanulmány időtartama és a tervezés A jogosultság értékelése után a résztvevőket véletlenszerűen két csoportra osztják (termékteszt vagy kontroll), amelyek 8 hetes étrend-kiegészítést követnek.

A vizsgálat teljes időtartama, beleértve a kezdeti időszakot (bejáratást) és a kezelést, 10 hét.

A toborzás később, az Etikai Bizottság jóváhagyását követő három hónapon belül kezdődik.

A bejáratás az első látogatást követő két héten belül kezdődik (T-1). Az alanyokat 10 hónapon keresztül veszik fel, és a vizsgálatot az első felvételtől számított 12 hónapon belül fejezik be.

A vizsgálat megszakításának kritériumai A Helsinki Nyilatkozat, a jó klinikai gyakorlat ICH szabványai, valamint az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatósági (FDA) szabályzata értelmében a személynek joga van bármikor kilépni a vizsgálatból és bármilyen okból, az orvos vagy az intézmény jövőbeni egészségügyi ellátásának sérelme nélkül. A nyomozóknak joguk van a vizsgálati alanyok visszavonására is (lásd alább). Abban az esetben, ha egy személy (vagy jogilag meghatalmazott személy) úgy dönt, hogy nyugdíjba vonul, mindent meg kell tenni annak érdekében, hogy az észrevételeket a lehető legjobban kiegészítsék és jelentsék. Végső átfogó értékelést kell végezni az alany visszavonásakor, ahol rögzíteni kell a visszavonás okát, és minden esetben meg kell kísérelni utólagos értékelést.

Az alanyokat a következő okok miatt lehet eltávolítani a vizsgálatból:

A kísérleti alany részéről a jegyzőkönyv megsértése Az alany nem érdemi betartása A vizsgálati alany a kezelés folytatásának megtagadása vagy megjegyzései Elfogadhatatlan toxicitás A kutató döntése, miszerint a lezárás az alany legjobb orvosi érdekét szolgálja. Betegség vagy szövődmények nem egyértelmű eseménye egyidejűleg alkalmazott gyógyszerek, amelyek nem kompatibilisek a vizsgálattal. Terhesség Alkohollal vagy kábítószerrel való visszaélés Azok, akik abbahagyják vagy kivonják a vizsgálatot, nem kerülnek helyettesítésre.

A felmondás eljárása

Ha az egyéni leállás a vizsgálat befejezése előtt történik, az okot és a záró dátumot rögzítjük. Fel kell jegyezni a vizsgálatban szereplő utolsó ételadag dátumát. Korai felmondás esetén a következő eljárásokat kell végrehajtani:

Klinikai tesztek (szisztolés és diasztolés, pulzusszám, súly és magasság a BMI, valamint a derék- és csípőkörfogat kiszámításához).

Vér- és székletfelvétel, vizeletgyűjtés. Étkezési gyakoriság kérdőív (hetente). Abban az esetben, ha az egyén nem tud visszatérni az utóvizsgálatra, a nyomozóknak telefonon kell felvenniük a kapcsolatot a személlyel az esetleges nemkívánatos események nyomon követése érdekében.

Ha egy személy visszavonja hozzájárulását ahhoz, hogy ételt kapjon a stúdióban, akkor Önt arra ösztönzik, hogy maradjon a vizsgálatban anélkül, hogy kezelést kapna a biztonsági adatok gyűjtéséért.

A vizsgált termék megbízhatóságának vizsgálati eljárásai A termékeket (teszt vagy kontroll) a helyi nyelven felcímkézett csomagolásban kell biztosítani a vizsgálat kódszámával, a helyszíni kód számával, a gyártó nevével, a résztvevők számával, a a vizsgálat látogatásainak száma, a tételek száma, a tárolási utasítások és a lejárati dátumok. A termékeket a T0 látogatásból osztják ki a résztvevőknek.

Kódok véletlenszerű besorolása Az egyes résztvevők nem és életkor szerinti randomizálásának kódjait egy zárt borítékban tárolja az Érzékszervi Minőség minősített csoportja (az Edmund Mach Alapítvány Kutatási és Innovációs Központ Táplálkozási és Élelmiszerminőségi Osztályának QS).

Adatforrás-ellenőrzés A vizsgálat során gyűjtött összes adat elsődleges forrásból származik, és alanyként írásos dokumentumokban és elektronikus egészségügyi dokumentációban rögzítésre kerül. A klinikai, laboratóriumi eredmények és EKG eredményeit az alany elektronikus kórlapjába rögzítjük. Semmilyen adat nem kerül beillesztésre közvetlenül az „esetbeszámoló űrlapba” (CRF), anélkül, hogy az elsődleges forrásból – például papíralapú vagy elektronikus – átvitelre kerülne.

Egyidejű gyógyszeres terápia A vizsgálat megkezdése előtt egy hónapon belül az alanytól bevett és/vagy a vizsgálat során alkalmazott bármely gyógyszer egyidejű kezelésnek minősül. Az ilyen kezelést dokumentálni kell a CRF megfelelő oldalán és az alanyok egészségügyi dokumentációjában. A vizsgálat során az egyidejű kezelésben bekövetkezett bármilyen változást egyértelműen fel kell jegyezni, és a változtatás okát dokumentálni kell.

Minden résztvevő orvosának levelet küldenek, amelyben megjelölik, hogy melyek azok a kezelések, amelyek nem egyeztethetők össze a vizsgálattal. A vizsgálat során a következő gyógyszerek alkalmazása nem megengedett: vérhígítók, vérnyomáscsökkentők, lipidcsökkentők, béta-blokkolók, szisztémás kortikoszteroidok, neuroleptikumok, antibiotikumok, hashajtók, vitamin-kiegészítők, antioxidánsok és ásványi anyagok, élelmi rostok, prebiotikumok (pl. inulin, oligofruktóz) és probiotikumok. Ezért, ha az alany a vizsgálattal összeegyeztethetetlen gyógyszeres terápiát igényel, a kezelőorvos értesíti az alanyt a vizsgálat leállításáról, és tájékoztatja a vizsgálatvezetőt, és követi a korai befejezés eljárásait.

Megfelelőségi értékelés A kiegészítésnek való megfelelés értékeléséhez vizelet fenolszintet mérnek az alanyoknál, amelyeket T0 és T1 időpontokban táplálékvizsgálatokkal egészítenek ki. Ezenkívül minden hét végén minden fel nem használt vagy üres csomagolást visszaküldenek a kísérletezőknek.

Módszerek Biztonság Az olívabogyóból, hajdinaból, borsólisztből, gesztenyelisztből készült termékek fogyasztásával kapcsolatos korábbi vizsgálatok során nem volt biztonsági probléma.

A tanulmányt az arcoi Casa di Cura Eremo egészségügyi és paramedicinális személyzete fogja felügyelni. A nemkívánatos eseményeket továbbra is rögzítik a vizsgálat során. A klinikai tüneteket vagy tüneteket kiváltó, illetve terápiás beavatkozást igénylő kóros laboratóriumi értékekről haladéktalanul értesíteni kell az alanyt, ha az alany kifejezetten kifejezte, hogy tájékoztatáson alapuló beleegyezés formájában kíván ilyen tájékoztatást kapni. Az alany előzetesen kiléphet a vizsgálatból, ha a terápiás beavatkozás szükségessége nem összeegyeztethető a vizsgálattal, vagy ha olyan nemkívánatos eseményeket tapasztal, amelyek megváltoztatják az alany vizsgálatba vonásának kritériumait. Az alany továbbra is bármikor kiléphet a vizsgálatból, ha a vizsgálat a korai befejezés eljárását követő kényelmetlenség miatt következik be.

Statisztikai elemzés Az alapvető jellemzőket a kiegészítés típusa szerint soroljuk fel: a folytonos változókat átlag +/- szórással vagy mediánnal fejezzük ki interkvartilis tartományokkal és százalékban kategorikus változók esetén. Az aszimmetrikus eloszlású adatok naplófeldolgozást követnek az elemzés előtt. A két kiegészítés közötti különbségeket egy- és többváltozós statisztikai módszerekkel értékeljük. A beavatkozás előtti és utáni közeget összehasonlítják az általános lineáris modellel (ANOVA) ismételt mérések vagy páros adatok esetén. Egyszerű és többszörös lineáris regressziót fog végrehajtani a független változók közötti kapcsolatok meghatározásához; Ezenkívül lefuttatjuk a tesztet, hogy értékeljük a kiegészítés típusaiban észlelt eltéréseket a megfelelőségben. Az eredményeket átlag +/- SEM-ben fejezzük ki, és a különbségeket akkor tekintjük szignifikánsnak, ha P <0,05. Az aszimmetrikus eloszlású adatok naplófeldolgozást követnek az elemzés előtt.

A fő elemzés a vizsgált termék és a kontrolltermék elfogyasztása utáni átlagos szintek közötti különbségek összehasonlításán alapul. Mérni kell az egyes kiegészítések végén az átlagértékek (T1) közötti különbségeket a relatív átlagos alapértékhez (T0) viszonyítva.

A kezelési ágak közötti időbeli különbségeket az ismételt mérések varianciaanalízisével értékeljük. A szignifikancia szintje két farokban <0,05.

Az egyes kiegészítések mintanagyságát 32-re határozták meg, hogy a plazma LDL-koleszterinszintjének kb. 15,44 mg/dl-rel, 14,28 mg/dl-es szórással detektálható legyen a Snedecor és Cochran egyenlet alkalmazásával, ahol az α értéke 0,05 és 1 -β egyenlő 0,9 (Dell et al., 2002). E képlet szerint a felvett tárgyak minimális száma 28. Figyelembe véve az esetleges lemorzsolódást, a vizsgálatban összesen 64 önkéntes alany esetében 32 fő a teszttermékkel, 32 fő pedig kontrolltermékkel való kiegészítésre.

Az értékelés a plazma LDL-koleszterin-csökkenésének bősége alapján, az LDL-koleszterin mértékének (átlag és standard deviáció) alapján, a European Journal of Nutrition című folyóiratban megjelent párhuzamos tanulmányban közölt adatok alapján történik. Az LDL-koleszterin paraméter amellett, hogy az emberi egészségre gyakorolt ​​hatást felismerték, szigorúbb és hosszabb megfigyelési időt igényel, mint a bél mikroflóra módosulásának mértéke.

Közvetlen hozzáférés a forrásadatokhoz/dokumentumokhoz A szabályozó hatóságok esetleg ellenőrizni kívánják a klinikai kutatásokat, hogy értékeljék a GCP elveinek való megfelelést. Előfordulhat, hogy a szabályozó hatóságok vizsgálatot is végezhetnek (a próba alatt vagy annak befejezése után). Ha egy szabályozó hatóság és/vagy az APSS Trento Klinikai Vizsgálatok Etikai Bizottsága által megkövetelt ellenőrzést, a kutatónak bele kell egyeznie, hogy hozzáférést biztosít a szabályozó hatóságoknak a vizsgálattal kapcsolatos dokumentációhoz.

Adatkezelés és nyilvántartások Az adatok és a dokumentáció forrása az adatrögzítés első helye. Az eredeti dokumentumokat nem szabad ugyanazon a helyen tárolni és hozzáférhetővé tenni. A kutatónak meg kell őriznie minden vizsgálatban részt vevő személy eredeti dokumentumát.

A tárgyalás során a CRF-en gyűjtött adatokat anonim módon dokumentáljuk, és azokat számokkal vagy szimbólumokkal azonosítjuk. Ha rendkívüli körülmények között biztonsági vagy szabályozási okokból a személy azonosítása szükséges, az OlioCRU Ltd. és a kutató köteles ezeket az információkat bizalmasan kezelni.

A CRF-be bevitt összes adatnak olvashatónak kell lennie, és fekete tintával kell rögzítenie. Ha javításra van szüksége, azt úgy kell megtenni, hogy a bejegyzést egy sorral törölje, és maga a tétel mellé írja be a helyes adatokat. A kijavítást a vizsgálónak vagy egy erre jogosult személynek kézjegyével és dátummal kell ellátnia.