Meten van de impact van voedingssuppletie met een nieuw bakproduct op darmmicrobiota en cholesterolmetabolisme

De eerste resultaten van in-vitrotesten van het PreBIOil-project hebben het vermogen aangetoond van een olijvenbloem om de microbiële populatie van de menselijke darm te moduleren op een manier die vergelijkbaar is met die van inuline dat wordt herkend als polysaccharide met een prebiotisch vermogen. Op basis van deze resultaten, en op basis van andere in de literatuur, is het bakkerijproduct PreBIOil geformuleerd. Het product bevat olijvenmeel, boekweit, erwten en kastanje.

Het algemene doel van de studie is om te beoordelen of de introductie in het dieet van een bakkerijproduct bereid met olijfmeel, gemengd met boekweit-, erwten- en kastanjemeel, het profiel van de darmmicrobiota en het plasmacholesterol, in het bijzonder LDL, kan veranderen. Het onderzoek is opgezet als voedingssupplementen, dubbelblind, gerandomiseerd, parallel aan de controlegroep, waarbij het volgende product wordt vergeleken:

i) een nieuw bakkerijproduct ontworpen studie PreBIOil (test); ii) een isoenergetische controle van bakkerijproducten (controle).

Beschrijving van het voedsel aangevuld in de proef Het testproduct is een nieuw gebakken product geformuleerd met een mengsel van meel van olijven, boekweit, erwten en kastanje en heeft het uiterlijk van een gezouten koekje.

Deelnemers moeten dagelijks ongeveer 90 gram test- of controleproduct consumeren. De exacte hoeveelheden van elke productpartij zullen worden bepaald na beoordeling van de voedingskenmerken van het eindproduct om dezelfde calorie-inname te bieden met de twee producten.

Verteerbaarheid, fermenteerbaarheid en modulatie van de microbiota Boekweit wordt beschouwd als een niet-graansoort die naast vezels, mineralen en vitamines, zoals B2 en B6, ook een bron van antioxidantverbindingen vertegenwoordigt vanwege het gehalte aan flavonoïden.

Het erwtenmeel bevat belangrijke componenten voor de menselijke voeding (zetmeel, eiwit en andere voedingsstoffen). De gezondheidsvoordelen van de consumptie van erwten zijn voornamelijk afkomstig van de concentratie en eigenschappen van zetmeel, eiwitten, vezels, vitamines, mineralen en fytochemicaliën. De vezels in het omhulsel en in de celwanden van de cotyledon dragen bij aan de gastro-intestinale functie. Het zetmeelgehalte in erwtenmeel wordt gekenmerkt door een lagere glycemische index. De eiwitten uit erwten kunnen peptiden met antioxiderende werking produceren. Het vitamine- en mineralengehalte van erwten kan een belangrijke rol spelen bij het voorkomen van deficiëntieziekten, met name die welke verband houden met de deficiënties van selenium en foliumzuur. Erwten bevatten een verscheidenheid aan fytochemicaliën. Deze omvatten polyfenolen die mogelijk antioxidanten en kankerbestrijdende eigenschappen hebben, saponinen die hypocolesterolemische en antikankeractiviteiten hebben, en oligosacchariden van galactose die prebiotische voordelen kunnen hebben in de dikke darm.

De voedingscomponenten van kastanjemeel bestaan ​​uit koolhydraten, eiwitten en vetten in de samenstelling om zo een energiewaarde te geven van ongeveer 350-400 kcal / 100 g. Van kastanjes is gestemd dat ze een positief effect hebben op de stofwisseling van darmbacteriën en een bron zijn van lange keten vetzuren C18:1 en C18:2 en vitamines (vitamine E). De mogelijke aanwezigheid van polyfenolen is beperkt tot de buitenste schillen, die doorgaans tijdens de productie van het meel van de vrucht worden gescheiden. Het meel afkomstig van olijvenpasta wordt in de wetenschappelijke literatuur niet beschreven voor specifieke nutritionele eigenschappen voor de menselijke voeding. Olijven zijn echter een integraal onderdeel van het mediterrane dieet waarin ze worden geconsumeerd als tafelolijven en olijfolie. De olijfvrucht bevat 50% water, 22% vet, ongeveer 19% koolhydraten en ongeveer 2% eiwit; het polyfenolgehalte varieert in het bereik van 1-3%. De olijven worden geconsumeerd of als olijfolie of tafelolijven. De olijven worden gekenmerkt door een sterke bitterheid, voornamelijk veroorzaakt door dall'oleuropein. De oleuropeïne kan 140 mg / g drooggewicht bereiken in onrijpe olijven en neemt af en naarmate het fruit rijpt, worden tafelolijven behandeld om de bittere smaak te verminderen door middel van processen zoals maceratie soda en fermentatie in pekel. Tijdens het zoeten van de bitterheid verloren echter enkele belangrijke verbindingen die in olijven aanwezig zijn, zoals polyfenolen en vezels. Er is geen bewijs voor het vermogen van polyfenolen in extra vierge olijfolie om het risico op hart- en vaatziekten te verminderen, maar een groot deel van de mogelijke effecten van de componenten van de olijf alleen of in synergie met de polyfenolen is nog onontgonnen. Bovendien wordt een groot deel van de in water oplosbare fractie in de olijven, waartussen de vezels en polyfenolen met bewezen gunstige effecten op de menselijke gezondheid, niet verwijderd tijdens het olieproductieproces. Er zijn aanwijzingen dat sommige fenolische fracties als secoiridoïden slecht worden geabsorbeerd door het darmslijmvlies en vervolgens beschikbaar zijn voor de microflora van de dikke darm. In wezen zou de olie in zijn geheel het grootste potentieel hebben, aangezien een voedingsmiddel de samenstelling en activiteit van de symbiotische menselijke darm van micro-organismen gunstig kan moduleren, zoals experimenteel is waargenomen voor andere soorten fruit.

Door middel van in vitro simulatie van colonfermentatie is waargenomen dat de olijvenpasta, zelfs na 30 minuten bakken op 180°C, in staat is om de menselijke darmmicrobiota te moduleren met een prebiotisch effect of een significante toename van bifidobacteriën te induceren. Een dergelijke simulatie in vitro werd uitgevoerd door incubatie gedurende 24 uur in een batch-fermentatiesysteem met controle van pH en temperatuur, na inoculatie met uitwerpselen verkregen van vijf gezonde individuen. De analyse van totaal polyfenolen (belangrijkste antioxidanten aanwezig in het testproduct) aanwezig in het meel van olijven, in het mengsel van het meel en in het testproduct toonde een verlies aan totaal polyfenolen aan als resultaat van bakken gelijk aan 40%.

Klinische resultaten Klinische resultaten hebben aangetoond dat de dagelijkse consumptie van 100 g boekweit in de vorm van meel bepalend is voor de verhoging van de HDL/cholesterol-ratio en de verbetering van de glucosetolerantie en meer recentelijk is waargenomen dat de consumptie van koekjes gemaakt van boekweit de serumspiegel van een ontstekingsmarker, myeloperoxidase (MPO) naast een verlaging van het totale cholesterol met een betere pulmonale vitale capaciteit. Een recente meta-analyse van verschillende interventiestudies over het menselijke dieet met suppletie van peulvruchten, waaronder erwten, toonde hun vermogen om de serumspiegels van LDL-cholesterol te verlagen.

Interventiestudies naar voeding met olijfolie, bijproducten van de verwerking van olijven en producten op basis van olijven zijn uitgevoerd met gezonde vrijwilligers en proefpersonen met verschillende gradaties van cardiovasculair risico. Van deze onderzoeken is aangegeven dat de dagelijkse doses van totale polyfenolen zijn geïntroduceerd (van enkele mg / dag tot 30 mg / dag, tot 100 mg / dag) afhankelijk van het type olijfolie en ook verrijking met extracten. Deze interventies duurden in veel gevallen ongeveer een maand, en de meeste onderzoeken maten de effecten van antioxiderende en ontstekingsremmende veranderingen in de bloedsomloop, samen met de waarden van plasmalipiden en andere parameters die verband houden met oxidatieve stress. Met name in de studie "EUROLIVE", bij een grote steekproef van gezonde individuen, werd waargenomen dat de fenolen van olijfolie bloedlipiden konden beschermen tegen oxidatie, de concentratie van HDL-cholesterol en de relatie tussen gereduceerd en geoxideerd glutathion konden verhogen, er verandert echter niets aan dell'F2-isoprostane.

In 2011 heeft de Europese Autoriteit voor voedselveiligheid (EFSA) de bewering goedgekeurd dat de olijfoliepolyfenolen, met name hydroxytyrosol, LDL beschermen tegen oxidatie, bij een dosis groter dan of gelijk aan 5 mg/kg/dag. Andere onderzoeken hebben ook aangetoond dat olijfoliepolyfenolen verband houden met de verlaging van CRP, verminderde atherogene genexpressie in bloedcellen en verlaagde bloeddruk. Hoewel er aanwijzingen zijn voor het vermogen van polyfenolen in olijfolie om het risico op hart- en vaatziekten te verminderen, is een groot deel van de mogelijke effecten van de componenten van de olijf alleen of in synergie nog onontgonnen. Bovendien wordt een groot deel van de vezels en polyfenolen in de olijf niet geëxtraheerd tijdens het olie-extractieproces en geëlimineerd als bijproduct.

Rationale van het onderzoek Het boekweitmeel voegt vezels en flavonoïden toe, het erwtenmeel bevat koolhydraten met een lage glycemische index, eiwitten en is ook een bron van antioxidanten, kastanjemeel brengt prebiotische stoffen en vitamines. Bloemolijf is de vrucht van de olijf met zijn in water oplosbare componenten (bijv. Vezels en polyfenolen) en in de oplosbare fractie van meervoudig onverzadigde en enkelvoudig onverzadigde vetzuren, tocoferolen en carotenoïden die slechts gedeeltelijk de extra vierge olijf passeren. Deze componenten zijn meestal ontworpen als componenten van extra vierge olijfolie en hebben wetenschappelijk bewezen dat ze bijdragen aan de verbetering van het lipidenmetabolisme en het plasmalipidenkader, aan de gezondheid van het hart en beschermen tegen oxidatieve stress.

Op basis van beschikbare klinische en experimentele onderzoeken is gesuggereerd dat de consumptie van een gebakken product gemaakt van een mengsel van meel van olijvenpasta, boekweit, erwten en kastanjes positieve effecten kan hebben op de biomarkers van het lipidenplasma en de darmmicrobiota (bijvoorbeeld een toename van bifidobacteriën) bij volwassen deelnemers met een plasmagehalte van cholesterol in gemiddelde tot hoge niveaus, zelfs als het nog niet pathologisch is.

Verklaring van overeenstemming Dit onderzoek zal worden uitgevoerd in overeenstemming met het Protocol en in overeenstemming met Good Clinical Practice (GCP), zoals beschreven in ICH GCP voor 1996, de Amerikaanse Code of Federal Regulations (CFR) en de Verklaring van Helsinki. Met ondertekening van dit protocol stemt de onderzoeker ermee in aan deze eisen te voldoen.

Doelstellingen van het onderzoek

Het algemene doel van de studie is om te beoordelen of de introductie in het dieet van een nieuw bakkerijproduct dat een mengsel van meel van olijvenpasta, boekweit, erwten, kastanjes bevat, kan veranderen:

Primaire doelen:

1. Het profiel van fecale microbiota;
2. Plasmawaarden van totaal cholesterol, LDL, ratio/totaal LDL en HDL;
3. De plasmaspiegels van triglyceriden;
4. Apolipoproteïne ApoA-I, ApoB en Lp (a).

Secundaire doelstellingen:

1. De antropometrische indices 2 De secundaire metabolieten van polyfenolen in menselijke biovloeistoffen 3. De profielen van metabolieten in plasma en urine beoordeeld door analyse van massaspectrometrie (MS); 4. De bloedglucose- en nuchtere insulinewaarden; 5. C-reactief proteïne (PRC); 6. Hooggevoelig C-reactief proteïne (hsPRC); 7. urinair isoprostaan ​​F2; 8. geoxideerd LDL in plasma.

Presentatie experimenteel ontwerp De vrijwilligers van de deelnemers zullen worden geïdentificeerd en geworven in een poliklinisch deel van het Casa di Cura Eremo di Arco (TN). Deelnemers worden geïnformeerd over het doel en de methoden van het onderzoek en worden vooraf geselecteerd op basis van criteria voor in- en uitsluiting. De deelnemer ondertekent de geïnformeerde toestemming en gaat de studio binnen na het bezoek aan T-1, uitgevoerd in het poliklinische deel van Casa di Cura Eremo di Arco (TN), waar een klinische en biochemische gezondheidsstatus wordt uitgevoerd. Om de eetgewoonten goed te kunnen monitoren, vult de in aanmerking komende deelnemer na het eerste bezoek een voedingsdagboek bij.

Als proefpersonen in aanmerking komen voor de studie op basis van alle criteria voor opname en uitsluiting, worden ze gerandomiseerd om placebo of de actieve integratie te ontvangen bij bezoek T0.

Het klinisch onderzoek en het afnemen van bloed en urine vindt plaats na ongeveer 10 uur vasten aan het begin van de opstartperiode (bezoek T-1). Klinische tests, bloedmonsters, verzameling van ontlasting en urine zullen worden uitgevoerd tijdens bezoeken T0, T1. Extra voedingsdagboek (4 opeenvolgende dagen) zal worden ingevuld bij bezoeken T0 en voorafgaand aan T1. Bijwerkingen, inname van medicijnen en supplementen worden door de deelnemers bijgehouden in een speciaal dagboek.

Deelnemers aan het onderzoek zullen ook worden gevraagd om een ​​sensorische evaluatie in te vullen van elk voedsel dat blind wordt aangeboden, de eerste smaak en aan het einde van 8 weken suppletie voor elk product

Onderzoeksprocedure Werving van deelnemers Deelnemers worden geïdentificeerd en geworven in een poliklinisch deel van Casa di cura Eremo di Arco (TN) Deelnemers worden geïnformeerd over het doel en de methoden van het onderzoek en worden vooraf geselecteerd op basis van criteria voor opname/uitsluiting . Indien in aanmerking komend, zal de deelnemer de geïnformeerde toestemming ondertekenen en de studio betreden met een bezoek aan T-1, dat zal worden uitgevoerd tijdens een klinische en biochemische gezondheidstoestand. De proefpersonen die in aanmerking komen voor de studie op basis van alle criteria voor inclusie/exclusie, zullen in de studie worden opgenomen en gerandomiseerd om de eerste voedingssupplementen (test of controle) te ontvangen om T0 te bezoeken (twee weken later door de run-in ).

Aanvulling

Nadat de geschiktheid is beoordeeld, worden de deelnemers gerandomiseerd om de integratie met het bakkerijproduct met het test- of controleproduct te ontvangen:

De enkele dagelijkse doses worden verpakt in verpakkingen die zijn gecodeerd door een gekwalificeerde groep. Suppletie duurt acht weken, dubbelblind, parallel. met een van de twee producten (toegeschreven aan randomisatie).

Vervolg Het project zal bestaan ​​uit een periode van acht weken suppletie, klinische onderzoeken en het afnemen van bloed en urine na een nacht vasten (exclusief waterverbruik) van ongeveer 10 uur om T-1 te bezoeken. Klinische tests, bloedafname, het verzamelen van ontlasting en urinetesten zullen worden uitgevoerd bezoeken aan T0, T1: T0 is de dag van de eerste integratie, T1 is acht weken na de start van de behandeling. Het voedingsdagboek zal worden samengesteld om T-1 te bezoeken en vóór bezoeken T0 en T1 worden uitgedeeld voor bezoeken aan T0 en T1 voor gegevensverzameling.

Klinische evaluatie Elektrocardiogram. Bij de screening (T-1) wordt een ECG gemaakt. De ECG-beelden worden beoordeeld en geïnterpreteerd door het poliklinische deel van het verpleeghuis Hermitage van Arco.

De bloeddruk wordt gemeten volgens de richtlijnen voor hypertensie ISH / WHO 2004 Antropometrische indices Gewicht en lengte worden gemeten op een standaardweegschaal. De maatregelen worden uitgevoerd op proefpersonen zonder schoenen, jassen of warme kleding. Body-mass index, BMI, wordt berekend als kg/m2.

De middelomtrek (navelstreng) wordt gemeten op een manier die wordt bepaald door de National Institutes of Health, National Heart, Lung en Blood Institute. De verhouding van de omtrek van de taille- en heupratio (WHR) wordt berekend.

Vragenlijsten Alle informatie wordt verzameld en vastgelegd in gevalideerde vragenlijsten, waaronder persoonlijke identificatie, medische geschiedenis en informatie over de risicofactoren voor hart- en vaatziekten, medicijngebruik, lichaamsbeweging en eetgewoonten. Ook wordt er door elke deelnemer een vierdaags voedingsdagboek bijgehouden.

Deelnemers aan het onderzoek zullen ook worden gevraagd om een ​​sensorische evaluatie in te vullen van elk voedsel dat wordt aangeboden tijdens de eerste blinde proeverij en aan het einde van 8 weken suppletie.

Afname van bloed en urine Na 10 uur vasten wordt bloed (≤ 30 ml) afgenomen uit een perifere ader. Er wordt 24 uur urine verzameld, het volume gemeten en het monster wordt bewaard bij -80°C.

Afname van fecesmonsters Fecale monsters worden binnen 12 uur na monsterafname verwerkt. Aliquots van elk fecaal monster worden direct ingevroren bij -80 ° C voor analyse van het metabolomische profiel.

Laboratoriumtesten door de laboratoriumanalyse van het Casa di Cura Eremo di Arco Bloedmonsters zullen worden gecentrifugeerd volgens de vereisten van de tests die onmiddellijk na bloedafname moeten worden uitgevoerd. Plasma of serum wordt afgescheiden, deels direct getest en de overige fractie wordt bewaard bij -80°C.

Totaal cholesterol, HDL-cholesterol, triglyceriden en glucose zullen worden geëvalueerd met enzymatische methode. LDL-cholesterol zal analytisch worden gemeten met een enzymatische methode.

Insulineniveaus zullen worden beoordeeld door elettrochemioluminescenza. Het aantal bloedcellen en het aantal bloedplaatjes wordt beoordeeld met behulp van de impedentiometrische methode. Het C-reactieve proteïne (CRP) zal worden gemeten met een turbidimetrische assay. Het zeer gevoelige C-reactieve proteïne (hsPCR) zal worden gemeten door middel van een turbidimetrische assay.

Apolipoproteïne AI (ApoA-I), ApoB en Lp (a) werden bepaald door immunoturbidimetrie.

De test voor de verificatie van de afwezigheid van glucosurie wordt uitgevoerd door de glucoseconcentratie in de urine te meten.

Laboratoriumtests door de Fondazione Edmund Mach [EMF] Urine- en plasmametabolomisch profiel. De F2-isoprostanen zullen in de urine worden gemeten als maat voor oxidatieve stress, door middel van een specifieke EIA-kit, na zuivering door middel van chromatografie vaste fase (kolommen SepPack).

De analyse van LDL geoxideerd in het plasma zal worden uitgevoerd met behulp van ELISA kit.

De stalen van urine en bloed (plasma en serum) zullen zowel worden onderworpen aan analyse van gerichte metabolomics (UPLC-MS/MS voor niet-vluchtige verbindingen en GC-MS/MS voor vluchtige verbindingen) als aan analyses van niet-gerichte metabolomics (ULPC -Q -TOF-MS en Nano -FTMS-Q-TOF niet-vluchtig en GC-TOF voor de vluchtige verbindingen). Voor profielen van gerichte plasmametabolieten zal de MS-gebaseerde Biocrates AbsoluteIDQ ® Kit P180 worden gebruikt, die nauwkeurige kwantitatieve gegevens genereert over 180 menselijke metabolieten die verband houden met het risico op diabetes. Daarnaast zal specifieke gerichte analyse worden toegepast op het lipidenprofiel van serumgalzuren, korteketenvetzuren (kortketenige vetzuren, SCFA's) en kwantificering van metabolieten van de polyfenolen van microbiële oorsprong in biovloeistoffen (inclusief feces) met UPLC / QQQ-MS/MS.

Analyse van fecale microbiota. Veranderingen in de fecale microbiota van specifieke bacteriepopulaties zullen worden geëvalueerd met behulp van de methode van in situ hybridisatie met fluorescerende sondes (FISH).

Ook veranderingen in de fecale microbiota zullen worden geëvalueerd met behulp van een metagenomics-benadering met behulp van pyrosequencing 454. Kortom, na het verzamelen van ontlastingsmonsters (n = 128, 2 ontlastingsmonsters op verschillende tijdstippen T0, T1 van 64 proefpersonen voor en na consumptie van elke voedseltest en placebo) zal het bacteriële genomische DNA worden geëxtraheerd met behulp van de kit SPIN FastDNA (MPbio ) specifiek voor uitwerpselen. Met behulp van primers die specifiek zijn voor het bacteriële 16S rRNA-gen (hypervariabel gebied V1-V3) zal het worden uitgevoerd door PCR-amplificatie en vervolgens het geamplificeerde V1-V3 onderwerpen aan 454 pyrosequencing.

Zal de GS FLX Titanium Chemistry gebruiken met adapters Multiplex Identifier (MID) om sequenties met een lengte van 600 bp te krijgen die zullen worden geanalyseerd door de database van 16S rRNA fylogenetisch, openbaar beschikbaar, te vergelijken via de pijplijn QIIME die toewijzing aan het genusniveau van de mens mogelijk maakt darmflora. Er zullen in totaal ongeveer 20.000 sequenties worden geproduceerd voor elk fecaal monster. Als kwaliteitscontrole en analyse van microbiële ecologie zal het worden gebruikt als een multivariate statistiek om de veranderingen in de samenstelling van de fecale microbiota te correleren na de consumptie van voedseltests of placebo.

Randomisatie geblindeerd Deelnemers worden willekeurig maar gelijkelijk verdeeld naar geslacht en leeftijd toegewezen aan een van de twee behandelingen: bakkerijproducttest of controleproduct, zelfs met behulp van specifieke software. De klinische onderzoekers, onderzoekers en laboratoriumpersoneel zullen blind zijn voor de randomisatie.

Behandeling De suppletie wordt in de dagelijkse voeding geïntroduceerd door de consumptie van een bakkerijproduct (test) voor een dagelijkse consumptie van 90 gram product dat meel van olijven, van boekweit, van erwten, kastanjes bevat. Het voedsel zorgt voor een analoge controle van de calorie-inname. De producten die worden onderzocht (test of controle) worden geleverd in verpakkingen die in de lokale taal worden geëtiketteerd met het codenummer van het onderzoek. de naam van de fabrikant, het aantal patiënten, het aantal studiebezoeken. De producten worden vanaf het bezoek T0 uitgedeeld aan de deelnemers.

Duur van onderzoek en planning Nadat is beoordeeld of ze in aanmerking komen, worden de deelnemers gerandomiseerd in twee groepen (producttest of controle) die 8 weken voedingssupplementen volgen.

De totale duur van het onderzoek, inclusief de opstartperiode (inloopperiode) en de behandeling, zal 10 weken bedragen.

De werving start later en binnen drie maanden na goedkeuring door de ethische commissie.

De inloopperiode start binnen twee weken na het eerste bezoek (T-1). Proefpersonen worden geworven over een periode van 10 maanden en het onderzoek zal binnen 12 maanden vanaf het moment van de eerste werving worden afgerond.

Criteria voor stopzetting van het onderzoek In overeenstemming met de Verklaring van Helsinki, de ICH-normen voor goede klinische praktijken en de "Food and Drug Administration (FDA) Regulations" van de Verenigde Staten, heeft een persoon het recht om zich op elk moment terug te trekken uit het onderzoek en om welke reden dan ook, zonder afbreuk te doen aan toekomstige medische zorg van de arts of de instelling. Onderzoekers hebben ook het recht om proefpersonen terug te trekken (zie hieronder). In het geval dat een persoon (of een persoon wettelijk gemachtigde) besluit met pensioen te gaan, zal alles in het werk worden gesteld om de waarnemingen zo goed mogelijk aan te vullen en te rapporteren. Een definitieve alomvattende beoordeling moet worden gemaakt op het moment dat de proefpersoon zich terugtrekt, waarbij de reden voor de terugtrekking moet worden geregistreerd en er moet in ieder geval worden geprobeerd een vervolgevaluatie uit te voeren.

De proefpersonen kunnen om de volgende redenen uit het onderzoek worden verwijderd:

Schending van het Protocol door de onderzoeker Onbetekenende naleving door de proefpersoon De weigering van de proefpersoon om de behandeling voort te zetten of opmerkingen Onaanvaardbare toxiciteit Beslissing van de onderzoeker dat de sluiting in het beste medische belang van de proefpersoon is Onduidelijk geval van ziekte of complicaties Gebruik van gelijktijdige medicatie die onverenigbaar is met het onderzoek. Zwangerschap Misbruik van alcohol of drugs Degenen die stoppen met of zich terugtrekken uit het onderzoek, worden niet vervangen.

Procedure voor beëindiging

Als een individu stopt voordat het onderzoek is voltooid, worden de reden en de sluitingsdatum geregistreerd. De datum van de laatste dosis voedsel in het onderzoek moet worden genoteerd. Bij voortijdige beëindiging moeten de volgende procedures worden gevolgd:

Klinische tests (systolisch en diastolisch, hartslag, gewicht en lengte om BMI en taille- en heupomtrek te berekenen).

Bloed en ontlasting afnemen en urine verzamelen. Een voedselfrequentievragenlijst (wekelijks). In het geval dat de persoon niet kan terugkeren voor een vervolgbezoek, zullen de onderzoekers getast hebben om telefonisch contact op te nemen met de persoon om eventuele bijwerkingen op te sporen.

Als een persoon zijn toestemming voor het ontvangen van voedsel in de studio intrekt, wordt u aangemoedigd om in het onderzoek te blijven zonder behandeling voor het verzamelen van veiligheidsgegevens.

De betrouwbaarheidsprocedures van het onderzochte product De producten (test of controle) worden geleverd in verpakkingen die in de lokale taal zijn geëtiketteerd met het codenummer van het onderzoek, het nummer van de locatiecode, de naam van de fabrikant, het aantal deelnemers, de aantal bezoeken van de studie, het aantal partijen, instructies voor opslag en vervaldata. De producten worden vanaf het bezoek T0 uitgedeeld aan de deelnemers.

Randomisatiecodes De codes van randomisatie naar geslacht en leeftijd worden voor elke deelnemer opgeslagen in een verzegelde envelop door een gekwalificeerde groep van Sensorische Kwaliteit (QS van het Departement Voeding en Voedselkwaliteit van het Onderzoeks- en Innovatiecentrum van de Edmund Mach Foundation).

Gegevensbroncontrole Alle gegevens die tijdens het onderzoek worden verzameld, zullen worden verkregen uit primaire bronnen en zullen als onderwerp worden vastgelegd in schriftelijke documenten en elektronische medische dossiers. De resultaten van klinische, laboratoriumuitslagen en ECG worden vastgelegd in het elektronisch medisch dossier van de proefpersoon. Er zullen geen gegevens rechtstreeks in het "case report form" (CRF) worden ingevoerd, zonder te worden overgedragen vanuit de primaire bron, zoals papieren of elektronische documenten.

Gelijktijdige medicamenteuze therapie Alle medicatie die binnen een maand voor aanvang van het onderzoek door de proefpersoon wordt ingenomen en/of tijdens het onderzoek wordt toegediend, wordt beschouwd als gelijktijdige therapie. Een dergelijke behandeling moet worden gedocumenteerd op de juiste pagina van het CRF en in de medische dossiers van de proefpersonen. Alle wijzigingen in de gelijktijdige therapie tijdens het onderzoek moeten duidelijk worden vastgelegd en de reden voor de wijziging moet worden gedocumenteerd.

Er zal een brief worden gestuurd naar de arts van elke deelnemer, waarin wordt gespecificeerd welke behandelingen gelijktijdig onverenigbaar zijn met de studie. Het gebruik van de volgende geneesmiddelen is tijdens het onderzoek niet toegestaan: bloedverdunners, antihypertensiva, lipideverlagende middelen, bètablokkers, systemische corticosteroïden, neuroleptica, antibiotica, laxeermiddelen, vitaminesupplementen, antioxidanten en mineralen, voedingsvezels, prebiotica (bijv. inuline, oligofructose) en probiotica. Daarom wordt de patiënt, als de proefpersoon geneesmiddelentherapieën nodig heeft die onverenigbaar zijn met de studie, door de behandelende arts op de hoogte gebracht om de studie te beëindigen en het hoofd van de studie te informeren en de procedures voor de vroegtijdige beëindiging te volgen.

Nalevingsbeoordeling Om de naleving van suppletie te beoordelen, worden fenolen in de urine gemeten bij proefpersonen die worden aangevuld met voedseltests op T0, T1. Bovendien worden alle ongebruikte of lege verpakkingen aan het einde van elke week teruggegeven aan de onderzoekers.

Methoden Beveiliging Er waren tijdens eerdere onderzoeken geen beveiligingsproblemen met betrekking tot de consumptie van producten gemaakt van olijven, boekweit, erwtenmeel, kastanjemeel.

De studie zal worden begeleid door medisch en paramedisch personeel van het Casa di Cura Eremo van Arco. Bijwerkingen zullen tijdens het onderzoek nog steeds worden geregistreerd. Abnormale laboratoriumwaarden die klinische tekenen of symptomen veroorzaken of therapeutische interventie vereisen, zullen onmiddellijk aan de proefpersoon worden meegedeeld, als de proefpersoon expliciet heeft aangegeven dat hij dergelijke communicatie wenst te ontvangen in de vorm van geïnformeerde toestemming. Het staat de proefpersoon vrij om zich op voorhand terug te trekken uit het onderzoek als therapeutische interventie niet verenigbaar is met het onderzoek, of als u bijwerkingen ervaart die een verandering veroorzaken in de criteria voor opname van deze proefpersoon in het onderzoek. Het staat de proefpersoon nog steeds vrij om zich op elk moment terug te trekken uit het onderzoek, voor het geval het onderzoek te wijten is aan ongemak na de procedure voor vroegtijdige beëindiging.

Statistische analyse De basiskenmerken zijn gerangschikt naar type suppletie: continue variabelen worden uitgedrukt als gemiddelde +/- standaarddeviatie of medianen met interkwartielafstanden en als een percentage voor categorische variabelen. Gegevens met een asymmetrische distributie volgen een logverwerking voorafgaand aan de analyse. De verschillen tussen de twee supplementen zullen worden geëvalueerd met univariate en multivariate statistische methoden. Het medium voor en na de ingreep wordt vergeleken met het General Linear Model (ANOVA) voor herhaalde metingen of voor gepaarde data. Je voert eenvoudige en meervoudige lineaire regressies uit om de relaties tussen onafhankelijke variabelen te bepalen; we zullen ook de test uitvoeren om verschillen in therapietrouw te evalueren die zijn gedetecteerd in de soorten suppletie. De resultaten worden uitgedrukt als gemiddelde +/- SEM en de verschillen worden als significant beschouwd wanneer P <0,05. Gegevens met een asymmetrische distributie volgen een logverwerking voorafgaand aan de analyse.

De hoofdanalyse zal gebaseerd zijn op een vergelijking van de verschillen in gemiddelde niveaus na consumptie van het testproduct en na consumptie van de controle. Ook worden de verschillen tussen de gemiddelde waarden aan het einde van elke suppletie (T1) ten opzichte van de relatieve gemiddelde basiswaarde (T0) gemeten.

De verschillen in tijd tussen behandelingsarmen zullen worden geëvalueerd door variantieanalyse voor herhaalde metingen. Het significantieniveau zal worden beschouwd als <0,05 in twee staarten.

De steekproefomvang voor elke suppletie is bepaald op 32 om een ​​afname van LDL-cholesterol in het plasma te detecteren gelijk aan ongeveer 15,44 mg/dl met een standaarddeviatie van 14,28 mg/dl met behulp van de vergelijking Snedecor en Cochran met α gelijk aan 0,05 en 1 -β gelijk aan 0,9 (Dell et al., 2002). Volgens deze formule is het minimum aantal vakken om in te schrijven gelijk aan 28. Rekening houdend met mogelijke uitvallers, 32 mensen voor suppletie met het testproduct en 32 mensen voor suppletie met controleproduct voor in totaal 64 proefpersonen in dit onderzoek.

De beoordeling wordt gemaakt op basis van de omvang van de afname van LDL-cholesterol in plasma, op basis van de metingen (gemiddelde en standaarddeviatie) van LDL-cholesterol gerapporteerd in een parallelle studie gepubliceerd in het European Journal of Nutrition. De parameter LDL-cholesterol is niet alleen een erkend effect op de menselijke gezondheid, maar ook restrictiever en vereist observatietijden die langer zijn dan de mate van wijziging van de darmmicroflora.

Directe toegang tot brongegevens/documenten Regelgevende instanties willen mogelijk controles uitvoeren op klinisch onderzoek om de naleving van de principes van GCP te beoordelen. Regelgevende instanties kunnen ook een inspectie willen uitvoeren (tijdens de proef of na afloop ervan). Als een inspectie vereist is door een regelgevende instantie en/of de Ethische Commissie voor Klinische Proeven c/o APSS Trento, moet de onderzoeker ermee instemmen om toegang te verlenen, regelgevende instanties, tot de documentatie met betrekking tot het onderzoek.

Gegevensbeheer en records De bron van de gegevens en documentatie wordt gedefinieerd als de eerste plaats waar de gegevens worden vastgelegd. Eventuele originele documenten mogen niet op dezelfde locatie worden bewaard en ter beschikking worden gesteld. De onderzoeker bewaart de originele documenten van elke persoon die aan het onderzoek deelneemt.

De gegevens die tijdens de proef op het CRF worden verzameld, worden op anonieme wijze gedocumenteerd en worden geïdentificeerd met cijfers of symbolen. Als het in uitzonderlijke omstandigheden nodig is, om redenen van veiligheid of regelgeving, om de persoon te identificeren, zijn OlioCRU Ltd en de onderzoeker verplicht om dergelijke informatie vertrouwelijk te houden.

Alle gegevens die in het CRF worden ingevoerd, moeten leesbaar zijn en in zwarte inkt worden vastgelegd. Mocht u een correctie nodig hebben, dan kunt u dit doen door de invoer met een enkele regel te verwijderen en de juiste informatie naast het item zelf in te voeren. De correctie moet worden geparafeerd en gedateerd door de onderzoeker of een aangewezen gekwalificeerde persoon.