Oksidatiiviseen stressiin liittyvä geenin ilmentyminen cumulus-soluissa heikosti reagoivien keskuudessa

Alhainen vaste kontrolloituun munasarjojen hyperstimulaatioon (alle 5 poimittua munasolua) on ongelma joillakin pariskunnalla, joka saa hoitoa hedelmättömyyteen. Tutkimukset osoittivat, että näiden potilaiden hoidon onnistumisprosentti on alhaisempi kuin normaalivasteryhmässä. Monien alhaiseen vasteeseen vaikuttavien tekijöiden joukossa oksidatiivisen stressin epäillään liittyvän follikkeliympäristön toimintahäiriöihin ja munasolujen kypsymiseen. Suoraa yhteyttä oksidatiivisen ja munasolun toiminnan välillä ei kuitenkaan voida tutkia eettisistä syistä, joten monissa tutkimuksissa oli sen sijaan tutkittu oosyyttiä ympäröivää ympäristöä, kuten kumpusolua ja munasolun nestettä.

Tutkimuksessamme pyrimme tutkimaan eroja hapetusstressiin liittyvien geenien ilmentymisen ja munasolujen kompetenssin biomarkkereiden välillä heikosti reagoivien ja normaaliresponsiivisten välillä. Kumulussolujen oksidatiiviseen stressiin liittyvän geenin ilmentymisen osalta mittaamme mRNA:n ilmentymisen kvantitatiivisella PCR:llä superoksididismutaasille 1 (SOD1), SOD2:lle, glutationiperoksidaasille (GPX) ja indusoituvalle typpioksidisyntaasille (iNOS). Oosyyttipätevien biomarkkereiden osalta käytämme ELISA-tekniikkaa GDF(, BMP15, Amphiregulin ja CoQ10) tason mittaamiseen follikulaarisessa nesteessä.

Näytekoon laskeminen suoritettiin Donnabelan et al:n suorittaman tutkimuksen tiedoilla, jotka havaitsivat, että SOD-geenin keskimääräinen ilmentyminen kontrolliryhmässä oli 2,06 2-ΔΔCT (SD = 0,53). Käytettiin kaavaa kahden erilaisen keskiarvon vertailuun sillä odotuksella, että heikosti reagoivien ryhmässä SOD-geenin ilmentyminen olisi 20 % pienempi:

n/ryhmä = 2(Z α/2 + Z β)2 σ2 / (X̅ 1- X̅ 2)2

α = 0,05, β = 0,2 Z α/2 = Z0,05/2 = 1,96 (kaksi häntää) Zp = Z0,8 = 0,84

Keskiarvo ryhmässä 1 (X̅ 1) = 2,06, SD. ryhmässä 1 (σ₁) = 0,53 Keskiarvo ryhmässä 2 (X̅ 2) = 1,64, SD. ryhmässä 2 (σ₂) = 0,53 Näytteen koko: Ryhmä 1 (n₁) = 25, Ryhmä 2 (n₂) = 25 Potilaiden kokonaismäärä on 56 (lisätty 10 % mahdollisen tietojen häviämisen vuoksi)

Tilastollinen analyysi

1. Kuvailevissa tiedoissa käytetään keskiarvoa ja keskihajontaa.
2. Mann-Whitneyn U-testiä, paritonta t-testiä ja chi-neliötä käytetään tarvittaessa
3. p-arvoa alle 0,05 pidetään tilastollisesti merkitsevänä.